Efectul suplimentării de 8 săptămâni a micronutrienților dietetici asupra expresiei genetice în handbalul de elită

A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Jorge Molina-López, María Antonieta Quispe Ricalde, Basilio Valladares Hernández, Elena Planells

efectul

Conceptualizare roluri, curatarea datelor, analiză formală, investigație, metodologie, scriere - schiță originală, scriere - revizuire și editare

Departamentul de Fiziologie, Facultatea de Farmacie, Universitatea din Granada, Granada, Spania, Institutul de nutriție și tehnologia alimentară, Centrul de cercetare biomedicală, Parcul tehnologic al științelor sănătății, Universitatea din Granada, Granada, Spania

A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Jorge Molina-López, María Antonieta Quispe Ricalde, Basilio Valladares Hernández, Elena Planells

Conceptualizare roluri, curatarea datelor, investigație, metodologie, resurse, scriere - schiță originală, scriere - revizuire și editare

Afiliere Institutul Universitar de Boli Tropicale și Sănătate Publică din Insulele Canare, Universitatea din La Laguna, La Laguna, Tenerife, Insulele Canare, Spania

A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Jorge Molina-López, María Antonieta Quispe Ricalde, Basilio Valladares Hernández, Elena Planells

Investigarea rolurilor, metodologie, resurse, supraveghere, scriere - revizuire și editare

Afiliere Institutul Universitar de Boli Tropicale și Sănătate Publică din Insulele Canare, Universitatea din La Laguna, La Laguna, Tenerife, Insulele Canare, Spania

Roluri Curarea datelor, Analiza formală

Autori ‡ Acești autori au contribuit, de asemenea, în mod egal la această lucrare.

Unitatea de afiliere pentru studii sociale a apărării, secretar general tehnic, Ministerul Apărării, Madrid, Spania

Roluri Curarea datelor, Analiza formală

Autori ‡ Acești autori au contribuit, de asemenea, în mod egal la această lucrare.

Departamentul de statistică pentru afiliere. Facultatea de Științe Sociale și Juridice, Universitatea Carlos III, Getafe, Madrid, Spania

A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Jorge Molina-López, María Antonieta Quispe Ricalde, Basilio Valladares Hernández, Elena Planells

Investigații de roluri, metodologie, resurse, scriere - schiță originală, scriere - recenzie și editare

Departamentul de Fiziologie, Facultatea de Farmacie, Universitatea din Granada, Granada, Spania, Institutul de nutriție și tehnologie alimentară, Centrul de cercetare biomedicală, Parcul tehnologic al științelor sănătății, Universitatea din Granada, Granada, Spania

  • Jorge Molina-López,
  • María Antonieta Quispe Ricalde,
  • Basilio Valladares Hernández,
  • Antonio Planells,
  • Roberto Otero,
  • Elena Planells

Cifre

Abstract

Scop

S-a făcut un studiu cu privire la modificările exprimării genelor la sportivii de handbal de elită, comparând modularea genică înainte, după și în absența unei intervenții nutriționale de 8 săptămâni cu suplimente multivitamine/minerale.

Metode

Au fost incluși 13 sportivi de handbal de elită (cu vârsta de 22,9 ± 2,7 ani) și 13 controale sedentare (cu vârsta de 20,9 ± 2,8 ani). Au fost stabilite trei puncte de timp: T0 (condiții de bază); T8 (după 8 săptămâni de suplimentare cu un complex multivitaminic/mineral); și T16 (după 8 săptămâni în absența suplimentării). Expresiile unui total de 112 de gene au fost evaluate prin analiza RT-qPCR cu sistemul QuantStudio ™ 12K Flex Real-Time PCR System.

Rezultate

Analiza a relevat diferite profiluri de reglare a genelor ale genelor implicate în comunicarea celulară, metabolismul energiei celulare, inflamația și sistemul imunitar, stresul oxidativ și funcția musculară la sportivi comparativ cu controalele sedentare în condiții de odihnă (gene reglate în sus: dimensiunea efectului = mare, ƞ2 = 1,011 la 1.398, p Tabelul 1. Conținutul sesiunilor de antrenament săptămânal la sportivii de handbal.

Criteriile de includere au fost: promovarea unei evaluări medicale de recrutare constând dintr-un examen clinic, evaluarea istoricului medical, statutul de nefumător și absența utilizării medicamentelor. Criteriile de excludere au fost: consumul de suplimente nutritive de orice fel în 6 săptămâni înainte și în timpul studiului și lipsa dorinței de a participa la studiu. Studiul a fost aprobat de Comitetul de Etică al Universității din Granada și a fost realizat în conformitate cu Declarația de la Helsinki. Scopul studiului și posibilele sale riscuri și disconforturi au fost explicate participanților înainte de obținerea consimțământului lor scris. Studiul a fost înregistrat la Institutul Național de Sănătate al SUA (ClinicalTrials.gov) NCT03672786. Titlu: Expresia genelor la sportivii interveniți.

Proiectare experimentală

SED = controale sedentare; MÂNĂ = Jucători de handbal de elită.

Caracteristicile participanților

Prelevarea de sânge și izolarea și cuantificarea ARN-ului

Participanții au raportat la laborator luni dimineață între 8 a.m. și 10 a.m. după ce s-a abținut de la exerciții fizice cel puțin 24 de ore. După o perioadă de repaus în decubit dorsal de 10 minute, s-au recoltat probe de sânge venos din vena antecubitală utilizând tehnici standard. Mai exact, probele au fost colectate în tuburi speciale (tub de ARN din sânge PAXgene, Becton Dickinson, Germania) pentru a determina expresia ARN și au fost depozitate la -80 ° C până la analiză.

Tuburile de ARN din sânge PAXgene au fost incubate timp de două ore la temperatura camerei pentru a realiza liza completă a celulelor sanguine. Apoi, 2,5 ml de sânge integral uman în tuburile de ARN din sânge PAXgene au fost centrifugate timp de 10 minute la 5000 g. După centrifugare, supernatantul a fost aruncat și peleta a fost spălată cu 4 ml de apă fără RNază și vortexată și centrifugată timp de 10 minute la 5000 g. După spălare, peleta a fost dizolvată în 350 μl tampon de resuspendare și incubată cu 300 μl tampon de legare și 40 μl proteină K timp de 10 minute la 55 ° C într-un agitator-incubator. Lizatul a fost transferat într-o coloană de centrifugare PAXgene și centrifugat la 18.000 g timp de trei minute. Fracția de curgere a fost amestecată cu 350 pl de etanol și transferată într-o coloană de rotire ARN PAXgene. După spălarea coloanei cu tamponul de spălare 1, probele au fost incubate cu 10 pl de DNază I timp de 15 minute. Coloanele de rotire ARN PAXgene au fost spălate cu tampon de spălare și ARN eluat cu 40 pl tampon de eluare. Eficacitatea tratamentului cu DNază a fost evaluată în probe RT-negative.

Randamentul ARN a fost estimat prin măsurarea absorbanței la 260 nm într-un spectrofotometru NanoDrop ND-1000 (Thermo Fisher Scientific). Puritatea ARN a fost calculată din raportul de absorbție la 260 nm și 280 nm. Raportul OD 260/280 a fost între 1,9 și 2,2 pentru toate probele. Integritatea ARN-ului a fost evaluată utilizând testul Eucaryote Total RNA Nano pe un bioanalizator Agilent 2100 (Agilent Technologies). Calitatea ARN a fost evaluată în funcție de numărul de integritate ARN (RIN) folosind 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies). Eșantioanele de înaltă calitate (RIN ≥ 9) și eșantioanele de calitate standard (RIN = 7) au fost incluse în studiu pentru a asigura o abordare mai realistă.