Text integral Caracteristici genetice clinice și moleculare ale Hb H și AE-Bart; s d TACG
Acceptat pentru publicare 10 februarie 2018
Publicat 3 aprilie 2018 Volumul 2018: 11 pagini 23—30
Verificat pentru plagiat da
Comentarii peer reviewer 3
Editor care a aprobat publicarea: Prof. Dr. Martin H. Maurer
Chanchai Traivaree, 1, * Boonchai Boonyawat, 2, * Chalinee Monsereenusorn, 1 Piya Rujkijyanont, 1 Apichat Photia 1
1 Divizia de Hematologie/Oncologie, Departamentul de Pediatrie, Spitalul Phramongkutklao și Colegiul de Medicină, Bangkok, Thailanda; 2 Divizia de Genetică, Departamentul de Pediatrie, Spitalul Phramongkutklao și Colegiul de Medicină, Bangkok, Thailanda
* Acești autori au contribuit în mod egal la această lucrare
Talasemia este cea mai frecventă tulburare de sânge moștenită din Asia de Sud-Est, care este cauzată de sinteza redusă sau absentă a lanțurilor de globină a hemoglobinei care duce la dezechilibrul lanțurilor de globină. α-Talasemia este unul dintre tipurile majore de talasemie și este cauzată de mutația genei α1-globinei (HBA1) sau a genei α2-globinei (HBA2) de pe cromozomul 16. 1 Mutația genetică are ca rezultat o variabilă clinică în funcție de scăderea sau absența lanțul α-globină. În Thailanda, cel mai frecvent tip de mutație a genei α-globinei este ștergerea a două gene α-globină (α-talasemia 1) denumite în mod specific ca ștergere de tip sud-est asiatic (SEA) (- SEA), urmată de ștergerea unei α -globina (α-talasemia 2) incluzând 3,7 kb sau deleția spre dreapta (-α 3,7) și respectiv 4,2 kb sau deleția spre stânga (-α 4,2), respectiv. Cea mai frecventă mutație a genei α-globinei nedelecționale în Thailanda este primăvara constantă a hemoglobinei (Hb CS, αα CS). Hemoglobina E (Hb E), care este una dintre cele mai frecvente mutații genice HBB din Asia de Sud-Est, poate fi prezentă fie cu hemoglobinopatie, fie cu fenotip talasemic asociat cu diverse manifestări clinice.
Manifestarea clinică și hematologică a α-talasemiei este variabilă, variind de la purtător silențios până la sindromul fatal Hb Bart’s hydrops fetalis. Interacțiunea dintre α-talasemia 1 și α-talasemia 2 determină boala hemoglobinei H (Hb H) și interacțiunea bolii Hb H cu Hb E heterozigo are ca rezultat boala AE Bart. 2,3 Hb H se caracterizează în două forme principale, inclusiv boli Hb H deletive și nedelecționale. Boala Hb H delețională este cauzată de o combinație de deleție care elimină ambele gene ale α-globinei pe un cromozom 16 și eliminare eliminând doar o singură genă α-globină pe celălalt cromozom 16. Boala Hb H nedelecțională rezultă dintr-o combinație de deleție care elimină ambele Genele α-globinei pe un cromozom 16 și mutația punctuală sau inserția/deleția mică care implică fie gena HBA1, fie HBA2 pe celălalt cromozom 16. Corelația dintre fenotipurile clinice, parametrii hematologici, genotipurile α-globinei și biomarkerii de laborator din diferite populații au avut a fost studiat. 4-6
Scopul acestui studiu a fost de a investiga manifestările fenotipice ale acestor mutații ale genei α-globinei prin studierea parametrilor hematologici ai acestora, tipizarea hemoglobinei, vârsta la prezentare, necesitatea transfuziei, vârsta și înălțimea atât a bolii Hb H, cât și a formelor de α-talasemie ale bolii AE Bart. . A fost prezentată corelația genotip - fenotip a fiecărei mutații, inclusiv biomarkeri de laborator și profiluri genetice la copiii cu boala Hb H și boala AE Bart tratați la Spitalul Phramongkutklao, un centru de îngrijire terțiară pentru pacienții cu talasemie din centrul Thailandei.
Pacienți și metode
Șaptezeci și șase de pacienți cu α-talasemie, care au fost tratați la Clinica de hematologie, Departamentul de Pediatrie, Spitalul Phramongkutklao, Bangkok, Thailanda, au fost înrolați în acest studiu. Consimțământul informat scris și formularul de aprobare au fost obținute de la toți participanții, precum și de la părinți sau tutori ai copiilor înainte de înscrierea în studiu. Protocolul de studiu a fost aprobat de Comitetul de Revizuire Instituțională al Spitalului Phramongkutklao și Colegiul de Medicină din Bangkok, Thailanda, urmând principiile etice ale Declarației de la Helsinki din 1975 și revizuirea acesteia. Criteriile de includere includ pacienții cărora li s-a diagnosticat boala Hb H și boala AE Bart la vârsta de ≤18 ani și consimțământul informat și aprobarea scrisă pentru a participa la studiul nostru. Pacienții care au avut date incomplete, inclusiv date hematologice, tipizarea hemoglobinei și analiza mutației genelor α-globinei din dosarele medicale au fost excluși din studiu.
Au fost incluși în total 58 de pacienți cu boala Hb H și 18 cu boala AE Bart. Majoritatea pacienților provin din partea centrală a Thailandei. Pacienții cu α-talasemie au fost clasificați clinic în dependență de transfuzie și non-dependență de transfuzie. Pacienții au fost examinați și pentru parametrii de creștere. Pacienții cu α-talasemie au fost diagnosticați pe baza vârstei la prima transfuzie, necesitatea transfuziei, examenul fizic și, de asemenea, pe baza testelor, inclusiv date hematologice, biomarkeri de laborator, tipizarea hemoglobinei și analiza mutației genelor α-globină. A fost înregistrat un istoric clinic complet împreună cu parametrii de creștere. Datele hematologice, biomarkerii de laborator și tiparea hemoglobinei au fost obținute retrospectiv din dosarele medicale.
Parametri hematologici și biochimici
Analizele hematologice au fost efectuate folosind un analizor automat de hematologie Coulter HMX (Beckman Coulter Corporation, Miami, FL, SUA). Profilurile de hemoglobină și concentrațiile de hemoglobină fetală (HbF) au fost determinate folosind electroforeza capilară (CE; sistem Minicap, Sebia, Parc Technologique Leonard de Vinci, Franța).
Au fost colectate un total de 76 de probe EDTA de sânge periferic de la toți indivizii. ADN-ul genomic a fost extras din limfocitele din sângele periferic folosind kituri disponibile comercial conform protocolului producătorului. A fost efectuată analiza moleculară pentru mutația HBA1 și HBA2. 7,8 Pe scurt, reacția în lanț multiplex gap-polimerază (PCR) a fost folosită pentru a caracteriza delețiile comune ale genei α-globinei în populațiile din Asia de Sud-Est, inclusiv α-talasemia 1 [deleția SEA (- SEA) și THAI (- THAI)] și α-talasemia 2 [3,7 kb (-α 3,7) și 4,2 kb (-α 4,2) ștergere]; s-a efectuat un sistem de mutație refractară cu amplificare multiplexă pentru a detecta mutații genetice comune α-globinei nedelecționale, inclusiv Hb CS și hemoglobină Paksé (Hb PS); 9 și secvențierea directă a ADN a tuturor regiunilor de codificare și a limitelor exon-intron ale ambelor gene a fost utilizată în cele din urmă pentru a detecta mutațiile genei α-globinei nedelecționale necunoscute. 10
Numărul estimat de participanți a fost calculat prin stabilirea unei erori α de 0,05, prevalența 0,06 11 și stabilită la 80 de pacienți. Valorile inițiale ale variabilelor selectate au fost calculate ca medie, mediană și medie în funcție de percentilă. Distribuția variabilelor cantitative a fost analizată folosind testul Shapiro-Wilk. Variabilele continue au fost comparate între două grupuri utilizând testul t nepereche pentru date cu o distribuție parametrică și testul Mann-Whitney pentru distribuția non-parametrică. Testul Chi-pătrat și testul exact al lui Fisher au fost utilizate pentru a analiza variabilele categorice pentru date cu o distribuție parametrică și, respectiv, o distribuție neparametrică. Pachetul statistic pentru știința socială (SPSS) software-ul versiunea 23 (IBM Corporation, Armonk, NY, SUA) a fost utilizat pentru analiza statistică și valoarea p 2 și respectiv 17,6 ± 3,8 kg/m 2. Nu au existat diferențe statistice în gen, vârstă medie la diagnostic, greutate, înălțime și IMC între pacienții cu boala Hb H și cei cu boala AE Bart. Majoritatea pacienților cu boală Hb H (55 pacienți; 94,8%) au locuit în centrul Thailandei. Doar pacienții cu boala AE Bart (5 pacienți; 27,8%) au locuit în nord-estul Thailandei.