Îndepărtarea anticorpilor din celulele roșii Compararea a trei metode de eluare
Rahul Katharia
Departamentul de Medicină Transfuzională, Institutul Postuniversitar de Științe Medicale Sanjay Gandhi, Lucknow, Uttar Pradesh, India
Rajendra K. Chaudhary
Departamentul de Medicină Transfuzională, Institutul Postuniversitar de Științe Medicale Sanjay Gandhi, Lucknow, Uttar Pradesh, India
Abstract
Fundal:
Testul antiglobulinic direct (DAT) este cel mai frecvent test efectuat în laboratorul de imunohematologie, care detectează imunoglobulina și fragmentele de complement atașate la celulele roșii din sânge. Aceste celule roșii din sânge acoperite sunt dificil de fenotipat cu precizie, ceea ce poate fi necesar pentru selectarea unității adecvate de celule roșii din sânge pentru transfuzie.
Am studiat eficacitatea diferitelor metode de eluare în îndepărtarea anticorpilor care acoperă celulele roșii și impactul acestora asupra activității diferite a antigenului grupelor sanguine.
Materiale și metode:
Probele de pacienți trimise pentru evaluarea serologică a hemolizei autoimune au fost incluse în studiu. Testul DAT și testul antiglobulinei indirecte (IAT) au fost efectuate folosind carduri de gel (sistem de identificare, DiaMed Elveția). Celulele roșii acoperite cu anticorpi, fie prin sensibilizare in-vivo sau in-vitro, au fost utilizate pentru a evalua rezultatul a trei metode de eluare.
Rezultate:
Din 93 de probe DAT pozitive deja sensibilizate in vivo, 28 de probe (30%) au devenit DAT negative posteluare folosind oricare dintre cele trei metode, în timp ce 36 (38,8%) au arătat reducerea puterii reacției, în timp ce în 29 (31,2%) a existat nici o schimbare a puterii reacției. În mod similar, din cele 17 eșantioane preparate prin sensibilizare in vitro, 12 eșantioane au devenit complet negative după eluarea glicinei-HCl/EDTA, 9 și 5 eșantioane au devenit negative după eluarea la căldură și respectiv a metodelor de eluare a difosfatului de clorochină, respectiv.
Concluzie:
La analiza comparativă, metoda de eluare a glicinei-HCl/EDTA a fost mai bună decât celelalte două metode și poate fi utilizată pentru eluarea imunoglobulinelor din celulele roșii intacte.
Introducere
Testul antiglobulinic direct (DAT) este cel mai frecvent test efectuat în laboratorul de imunohematologie, care detectează imunoglobulina și fragmentele de complement atașate la celulele roșii din sânge. Se efectuează de obicei pentru evaluarea pacienților cu suspiciune de hemoliză și un rezultat pozitiv semnifică acoperirea in vivo a celulelor roșii din sânge. Celulele roșii pot fi acoperite cu IgG sau complement singure sau cu o combinație. [1] Aceste celule roșii acoperite sunt dificil de fenotipat cu precizie, ceea ce poate fi necesar pentru selectarea unei unități de sânge adecvate pentru transfuzie la acești pacienți. [2]
Antiserurile reactive saline, antiserurile modificate chimic și anticorpii monoclonali IgM sunt disponibili pentru unii dintre antigenii eritrocitari, dar; antigenele detectate prin testul antiglobulinei indirecte sunt dificil de fenotipat. [3] Prin urmare, este necesar să se îndepărteze anticorpii din celulele roșii sensibilizate in vivo pentru a le fenotipa. Diferite proceduri de eluție sunt utilizate pentru disocierea anticorpilor de celule roșii. Multe dintre procedurile de eluție fie determină hemoliza totală a celulelor roșii, așa cum se vede cu metode de eluare cu eter cloroform sau xilen, sau provoacă denaturarea Kell; Antigeni Duffy și MNS, așa cum se observă cu ZZAP (ditiotreitol și papaină). [4,5]
Am studiat eficacitatea diferitelor metode de eluare în îndepărtarea anticorpilor care acoperă celulele roșii și impactul acestora asupra activității diferite a antigenului grupelor sanguine.
Materiale și metode
Probele de pacienți trimise pentru evaluarea serologică a hemolizei autoimune au fost incluse în studiu. DAT și IAT au fost efectuate folosind carduri de gel (sistem de identificare, DiaMed Elveția). Celulele roșii acoperite cu anticorpi, fie prin sensibilizare in-vivo sau in-vitro, au fost utilizate pentru a evalua rezultatul a trei metode de eluare.
S-au efectuat metode de eluție cu glicină-HCI/EDTA, eluție termică și clorochină difosfat pe toate probele DAT pozitive și a fost comparată eficacitatea lor în îndepărtarea autoanticorpilor.