Aportul de sodiu, dar nu și nervii renali, atenuează modificările renale induse de presiunea venoasă renală

Divizia de Nefrologie, Departamentul de Medicină, Universitatea din Alberta, Edmonton, Alberta, Canada

Departamentul de fiziologie, Universitatea din Alberta, Edmonton, Alberta, Canada

Divizia de Nefrologie, Departamentul de Medicină, Universitatea din Alberta, Edmonton, Alberta, Canada

Fiziologie și kinetoterapie biomedicală, Universitatea Simon Fraser, Burnaby, Columbia Britanică, Canada

Divizia de Nefrologie, Departamentul de Medicină, Universitatea din Alberta, Edmonton, Alberta, Canada

Departamentul de fiziologie, Universitatea din Alberta, Edmonton, Alberta, Canada

Adresa pentru cereri de reimprimare și alte corespondențe: B. Braam, Univ. of Alberta Hospital, Dept. Medicină/Div. Nefrologie și imunologie, 11-132 CSB Clinical Sciences Bldg., Edmonton, AB T6G 2G3, Canada (e-mail: [e-mail protejat]).

Abstract

Creșterea presiunii venoase centrale și a presiunii venoase renale (RVP) sunt asociate cu agravarea funcției renale în exacerbarea acută a insuficienței cardiace congestive. Am testat dacă o creștere acută izolată a RVP într-un rinichi duce la vasoconstricție renală ipsilaterală și la scăderea ratei de filtrare glomerulară (GFR) și dacă aceasta depinde de aportul de sare din dietă sau de activarea nervilor renali. Șobolanii Lewis de sex masculin au primit o dietă normală (1% NaCl, NS) sau bogată în sare (6% NaCl) timp de ≥ 14 zile înainte de experimentul acut. Șobolanii au fost apoi randomizați în următoarele trei grupuri: controlul timpului și creșterea RVP la 10 sau 20 mmHg pentru a evalua ritmul cardiac, fluxul sanguin renal (RBF) și GFR. Pentru a crește RVP, vena renală stângă a fost parțial ocluză timp de 120 de minute. Pentru a determina rolul nervilor renali, denervarea chirurgicală a fost efectuată la șobolani în ambele diete. Activitatea nervului simpatic renal (RSNA) a fost înregistrată suplimentar într-un grup separat de șobolani. Creșterea RVP la 20 mmHg a scăzut RBF ipsilateral (7,5 ± 0,4 până la 4,1 ± 0,7 ml/min, −1 · mmHg −1,

FIG. 1.Organigrama grupului experimental înființat al studiului.

Pregătirea

Experimente hemodinamice renale.

După laparotomia liniei medii, rinichiul stâng a fost expus. Vena suprarenală stângă sau vena supraspermatică a fost canulată (Micro-Renathane MRE-025; Braintree Scientific, Braintree, MA), iar canula a fost avansată până când tipul s-a odihnit în vena renală principală pentru măsurarea directă a RVP. O lungime de 3-0 prolen (Johnson-Johnson, San Lorenzo, Puerto Rico) a fost alunecată în jurul venei renale stângi la joncțiunea sa cu vena cavă inferioară și învelită cu o mică bucată de tub PE-90 pentru a crea o curea. Pentru a crește RVP, cureaua a fost strânsă pentru a constrânge vena renală. O sondă de flux de timp de tranzit 1RB a fost plasată în jurul arterei renale stângi pentru măsurarea directă a RBF (Transonic, Ithaca, NY). Ureterul stâng a fost cateterizat pentru colectarea urinei (PE-10; BD Intramedic). Șobolanul a primit lichide suplimentare în timpul preparării chirurgicale [5% albumină serică bovină (BSA), A7906; Sigma, Oakville, ON] cu 250 μg/min de inulină FITC (Sigma) la 1,5 ml/h. Această perfuzie a continuat pe tot parcursul experimentului cu 1% BSA cu 250 µg/min de inulină FITC la 1,5 ml/h.

Denervarea renală.

Șobolanii au fost preparați așa cum s-a descris, cu excepția faptului că nervii renali care se desfășoară de-a lungul vaselor renale stângi și drepte au fost îndepărtați chirurgical, iar vasele renale au fost vopsite cu fenol 10% în etanol 70%.

Activitatea nervului simpatic renal.

Proiectare experimentală

După finalizarea instrumentelor chirurgicale, șobolanii au fost stabilizați timp de 60 de minute. Datele inițiale au fost colectate timp de 60 de minute, după care RVP a fost crescut selectiv la 10 sau 20 mmHg prin constricție gradată a venei renale stângi sau nu a fost manipulat (controale de timp). Colectarea datelor a continuat încă 120 de minute. Pentru experimentele hemodinamice, probele de sânge (200 μl) au fost obținute la începutul perioadei de bază și la fiecare 60 de minute după aceea. Probele de urină cronometrate au fost colectate la fiecare 30 de minute. Nu a fost finalizată nicio prelevare de sânge sau urină în timpul experimentelor de înregistrare a nervilor.

Metode de analiză

Pentru a determina GFR folosind FITC-inulină, probele de plasmă și urină au fost diluate în 0,5 mol/l HEPES (pH 7,4) pentru a menține pH-ul fiziologic. O placă neagră cu 96 de godeuri (Greiner, Monroe, NC) a fost utilizată pentru încărcarea a 50 pl din fiecare soluție în duplicat. Fluorescența a fost determinată utilizând fluorometrul de microplacă de ascensiune Fluoroskan (Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finlanda) la lungimea de undă de excitație de 485 nm și lungimea de undă de emisie de 527 nm. Probele de sânge terminale au fost obținute din cateterul femural pentru a măsura nivelul reninei plasmatice prin ELISA (NOVATEINBIO, Cambridge, MA).

Pentru a determina RSNA, numărul total de vârfuri de deasupra fundalului a fost cuantificat utilizând software-ul Spike Histogram (Diagrama de laborator 8; ADInstruments). Au fost luate șase măsurători în timpul perioadei de înregistrare de bază și au fost mediate. Măsurătorile au fost luate la intervale de 5 minute pentru primele 30 de minute de creștere a RVP și la intervale de 30 de minute după aceea. Cuantificarea răspunsului RSNA la RVP crescut a fost calculată ca variație procentuală a RSNA față de valoarea inițială.

Analize și statistici

Datele sunt prezentate ca medii de intervale consecutive de 30 de minute. Caracterizarea inițială a fost comparată atât între șobolanii intacti, cât și cu cei denervați pe dieta normală și HS folosind modelul liniar general multivariat (MANOVA) cu testul Bonferroni post hoc. Pentru a evalua impactul RVP crescut, a fost utilizat un model liniar multiplu cu măsurare repetată pentru a compara fiecare punct de timp a trei grupuri atât la animale denervate, cât și la animale intacte, pe diferite diete, folosind Bonferroni ca test post hoc. Nivelurile de renină plasmatică și aldosteron au fost analizate cu ANOVA unidirecțional cu testul post-hoc Student-Newman-Keuls. Datele au fost transformate în jurnal sau clasificate dacă nu sunt distribuite în mod normal. Datele RSNA au fost analizate cu ANOVA cu măsuri repetate bidirecționale cu testul post-hoc Student-Newman-Keuls. Datele au fost analizate folosind SPSS 24 (IBM, Armonk, NY) și SigmaPlot 13 (Systat, San Jose, CA). Semnificația statistică a fost acceptată la