Pien Tze Huang ameliorează inflamația articulațiilor la șoarecii cu artrită indusă de colagen Medicina chineză
Abstract
fundal
Poliartrita reumatoidă (RA) este o boală autoimună caracterizată prin sinovită. Pien Tze Huang (PZH) este un medicament cu brevet chinezesc, cu efecte antiinflamatorii și imunomodulatoare. Cu toate acestea, dacă PZH ar putea fi utilizat în terapia RA este încă necunoscut. Prin urmare, acest studiu și-a propus să investigheze efectul terapeutic și mecanismul potențial al PZH asupra șoarecilor artrite induse de colagen (CIA).
Metode
Șoarecii masculi DBA/1J au fost folosiți pentru a stabili un model animal de CIA și apoi tratați cu doze diferite de PZH timp de 4 săptămâni. Efectul terapeutic al PZH asupra șoarecilor CIA a fost evaluat prin scorul de artrită, colorarea patologică și detectarea nivelurilor factorilor inflamatori din ser și articulații. Pentru investigarea mecanismului său posibil, au fost detectate activitatea căii de semnalizare NF-κB, inflammasomul NLRP3 și nivelul A20.
Rezultate
Rezultatele au arătat că PZH ar putea atenua eritemul și umflarea labelor posterioare ale șoarecilor CIA, îmbunătăți condițiile patologice ale articulației și scade producția de IL-1β, IL-6 și IL-17 în ser și articulații. Mai mult, PZH ar putea inhiba în mod semnificativ activitatea căii de semnalizare NF-κB și inflammasomul NLRP3 în articulația gleznei șoarecilor CIA, comparativ cu grupul model. De asemenea, a crescut nivelul de A20 în articulația gleznei șoarecilor CIA.
Concluzie
Acest studiu a indicat că PZH ar putea atenua inflamația articulară a șoarecilor CIA, iar mecanismul ar putea fi legat de reglarea căii de semnalizare NF-κB și inflammasomul NLRP3.
fundal
Poliartrita reumatoidă (RA) este o boală inflamatorie caracterizată prin hiperplazie sinovială extinsă și infiltrare celulară inflamatorie, care provoacă în cele din urmă leziuni osoase și dizabilități articulare funcționale [1]. Citokinele pro-inflamatorii precum IL-1β, IL-6 și IL-17 produse de sinovocite și celulele imune infiltrante sunt puternic asociate cu patogeneza RA [2]. Ar putea activa alți mediatori inflamatori precum INF-γ, iNOS și COX-2, inflamație sinovială îmbunătățită sinergic, ducând în cele din urmă la deteriorarea articulațiilor [3]. Multe căi de semnalizare au fost implementate pentru a implica reglarea producției de citokine pro-inflamatorii în RA. Pe lângă calea clasică de semnalizare NF-κB, inflammasomul cu conținut de 3 (NLRP3) al familiei receptorului NOD-like în progresul patologic al RA a obținut treptat îngrijorări [4, 5]. Activarea inflammasomului NLRP3 a influențat nu numai expresia IL-1β și IL-18, ci și activarea căii de semnalizare NF-κB [6, 7]. Transmiterea acestor semnale inflamatorii a indicat, de asemenea, complexitatea procesului patologic RA.
Medicamentele clinice pentru RA includ medicamente antiinflamatoare nesteroidiene (AINS), glucocorticoizi și mai mulți agenți biologici, care au diferite grade de eficacitate și efecte secundare [8]. Prin urmare, medicamentele sigure și eficiente sunt încă necesare în tratamentul RA. Medicamentele tradiționale chinezești (TCM) sunt comoara pentru descoperirea de noi medicamente. Unele TCM au fost utilizate pentru a trata pacienții cu RA în clinică cu o eficacitate bună, cum ar fi Wu-Tou Decoction și Yi Shen Juan Bi Pill [9, 10].
Pien Tze Huang (PZH), o binecunoscută formulă tradițională chineză, constă din Notoginseng Radix și Rhizoma (Tianqi sau Sanqi), calcul bovis (Niuhuang sau calculul biliar al bouului), Shedan (calculul biliar al șarpelui) și moscul [11]. A fost folosit în China și Asia de Sud-Est de secole ca remediu popular pentru diferite boli legate de inflamație, cum ar fi hepatita. S-a dovedit că PZH a exercitat efect antiinflamator prin reglarea procentului de celule Th1 și Th17, reducând expresia IL-17, IL-23 și IFN-γ și reglând căile de semnalizare NF-κB și STAT la animalele model inflamatorii [11, 12]. Recent, unele componente medicinale ale Notoginseng Radix și Rhizoma au fost raportate că au un efect remarcabil în tratarea șoarecilor sau șobolanilor cu artrită indusă de colagen (CIA), un model animal clasic RA [13, 14]. În plus, ginsenosidul Rg1 și compusul metabolit al ginsenozidului K ar putea regla în mod semnificativ inflammasomul NLRP3 și translocația nucleară NF-κB [14, 15]. Pe baza acestor studii, am emis ipoteza că PZH ar putea avea un efect terapeutic asupra șoarecilor CIA. Prin urmare, această cercetare a vizat explorarea potențialului terapeutic și a mecanismului posibil al PZH pe șoareci CIA.
Metode
Droguri
PZH a fost produs de Zhangzhou Pien Tze Huang Pharmaceutical Co., Ltd., (Zhangzhou, China; aprobarea FDA nr. Z35020243). Probele de medicament au fost identificate și caracterizate prin HPLC - MS/TOF ca publicația noastră anterioară [12]. Soluția stoc de PZH a fost preparată prin dizolvarea pulberii PZH în apă purificată și proba a fost complet amestecată din nou înainte de utilizare.
Animale
Șoareci masculi DBA/1J de 6-8 săptămâni au fost obținuți de la Beijing Vital River Laboratories (Beijing, China). Șoarecii au fost hrăniți cu hrană și apă ad libitum și apoi li s-a permis să se aclimatizeze timp de 1 săptămână înainte de inițierea experimentului. Toate protocoalele utilizate aici au primit aprobarea de la Comitetul de etică al cercetării al Institutului de teorie de bază a medicinei chineze, Academia Chineză de Științe Medicale din China.
Inducerea CIA
Colagenul de tip II bovin (CII, 2 mg/ml; Chondrex, Redmond, WA, SUA) a fost diluat într-un volum egal de adjuvant Freund complet (Chondrex). Șoarecii au fost mai întâi imunizați cu 100 μL emulsie conținând 100 μg CII prin injecție intradermică în coadă și urmată de o imunizare de rapel în ziua 21 [16]. Debutul CIA a putut fi observat între ziua 28 și ziua 32 după prima imunizare.
Tratament
Am împărțit șoarecii cu inducere cu succes a modelului CIA în șase grupuri (șase șoareci pe grup), care erau grup normal, grup model, grup cu doză mică PZH (PZH-L, 0,078 g/kg/zi), grup cu doză medie PZH PZH -M, 0,234 g/kg/zi, egală cu doza clinică), grupul cu doză mare PZH (PZH-H, 0,702 g/kg/zi) și grupul cu metotrexat (MTX, 0,3 mg/kg/zi, stabilit ca anterior descris [17]). Apa purificată (grup normal, grup model), MTX și PZH au fost administrate intragastric în fiecare zi la un volum de 1 ml/100 g timp de 4 săptămâni.
Scorul artritei
Scorul artritei a fost măsurat de două ori pe săptămână. Scorul artritei pentru fiecare articulație a gleznei a fost înregistrat de aceiași observatori, care erau orbi la tratamentul primit de animale, așa cum a fost descris anterior. Scorul a fost efectuat cu o scară 0-4, scorurile artritei au fost realizate ca: 0 = fără schimbare; 1 = labă cu umflare ușoară la un singur membru; 2 = mai mult de o labă cu umflături; 3 = toată laba cu umflare și eritem evident; și 4 = laba întreagă cu umflături severe. Scorul maxim al fiecărui șoarece a fost de 16 [18].
ELISA
Probele au fost preparate din șoareci de ser. Nivelurile de IL-1β, IL-6 și IL-17 în serul șoarecilor au fost determinate de ELISA folosind truse comerciale (Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA) conform protocolului producătorului.
Determinarea biochimică a sângelui
Alanina aminotransferaza (ALT), aspartatul aminotransferaza (AST), creatinina (CREA) și ureea (UREA) din serul șoarecilor au fost testate cu kituri comerciale biochimice din sânge de către un analizor biochimic automat Hitachi 7160 din Japonia.
Histopatologie
Secțiunile (3 μm) au fost preparate și colorate cu hematoxilină și eozină (H&E). Caracteristicile histopatologice au fost evaluate și punctate în condiții de orbire în conformitate cu următorul sistem: 0, nicio modificare detectabilă; 1, infiltrat focal minor; 2, infiltrat moderat; 3, infiltrat sever, dar fără panus sau eroziune a cartilajului; și 4, infiltrat foarte sever plus eroziune și fibroză a panoului sau cartilajului [19]. Scorul a fost realizat orbește de trei observatori independenți.