Infecția cu Cryptosporidium varanii la geckos leopard (Eublepharis macularius) în Argentina
A. Dellarupe
1 Laborator de imunoparazitologie, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională din La Plata, 60 și 118, 1900 La Plata, Argentina
2 Consiliul Național pentru Investiții Științifice și Tehnice (CONICET), Buenos Aires, Argentina
J.M. Unzaga
1 Laborator de imunoparazitologie, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională din La Plata, 60 și 118, 1900 La Plata, Argentina
Domnul More
1 Laborator de imunoparazitologie, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională din La Plata, 60 și 118, 1900 La Plata, Argentina
2 Consiliul Național pentru Investiții Științifice și Tehnice (CONICET), Buenos Aires, Argentina
M. Kienast
3 Institutul de Genetică Veterinară (IGEVET), CCT La Plata, CONICET, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională din La Plata, La Plata, Argentina
A. Larsen
4 Departamentul de Imunologie Veterinară, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională La Plata, La Plata, Argentina
C. Stiebel
5 Dpto. Zoonosis, Municipalidal Gral. San Martín, Prov. de Buenos Aires, Hotel Argentina
M. Rambeaud
1 Laborator de imunoparazitologie, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională din La Plata, 60 și 118, 1900 La Plata, Argentina
2 Consiliul Național pentru Investiții Științifice și Tehnice (CONICET), Buenos Aires, Argentina
M.C. Venturini
1 Laborator de imunoparazitologie, Facultatea de Științe Veterinare, Universitatea Națională din La Plata, 60 și 118, 1900 La Plata, Argentina
Abstract
Criptosporidioza se observă la reptile cu morbiditate ridicată și mortalitate considerabilă. Obiectivul acestui studiu a fost de a realiza identificarea moleculară a Cryptosporidium spp. în geckos leopard de companie (Eublepharis macularius) dintr-o colonie de reproducători din Buenos Aires, Argentina. Oochisturi comparabile cu cele ale Cryptosporidium spp. au fost detectate la trei geckos cu antecedente de diaree, anorexie și cașexie. Metodele de identificare moleculară au confirmat prezența Cryptosporidium varanii (syn. C. saurophilum). Acest agent a fost considerat a fi cauza principală a bolii clinice observate. Aceasta este prima descriere a infecției cu C. varanii la reptilele animalelor de companie din Argentina.
Introducere
Reptilele devin animale de companie populare în întreaga lume; cu toate acestea, se știe puțin despre prezența și controlul criptosporidiozei la această populație de animale. În ultimii ani, criptosporidioza a cauzat pierderi economice importante pentru crescătorii de reptile comerciale. Prin urmare, obiectivul acestui studiu a fost de a efectua caracterizarea moleculară a Cryptosporidium spp. din geckos leopard infectat natural (Eublepharis macularius) în Argentina.
Materiale și metode
Animale și probe
O probă de scaun colectată de la 3 geckos leopard (E. macularius) a fost colectată și trimisă la Universitatea La Plata pentru studii moleculare. Trei geckos (două femele și 1 bărbat) (Fig. 1) au fost primiți de către medicii veterinari dintr-o colonie de crescători din Buenos Aires, Argentina cu antecedente de diaree, anorexie și cașexie. Probele fecale au fost plasate mai întâi într-un tub de 15 ml. Tubul a fost parțial umplut cu soluție de zaharoză și amestecat într-un vortex timp de aproximativ 5 sec. fiecare tub a fost centrifugat la 252 g timp de 10 min. O alicotă a fost luată de la suprafață și răspândită pe o lamă și examinată pentru prezența Cryptosporidium spp. oochisturi prin microscopie cu lumină (Deming și colab., 2008). Pata modificată Ziehl-Neelsen pentru frotiurile fecale a fost efectuată în esență așa cum s-a descris anterior (Henriksen și Pohlenz, 1981); au fost evidențiate câteva oociste rotunde de 4-5 um în diametru compatibile cu Cryptosporidium spp. (Fig. 2). Eșantionul colectat a fost supus unei tehnici de flotație a zahărului (soluție de zaharoză fără formaldehidă) și sedimentare a apei așa cum s-a descris anterior pentru concentrația de oocisti coccidieni (Ortega-Mora și colab., 2007). Oochisturile concentrate au fost resuspendate în 450 ofl de apă fără nuclează.
Trei geckos leopard (două femele și 1 bărbat) primite de medicii veterinari dintr-o colonie de reproducători din Buenos Aires, Argentina cu antecedente de diaree, anorexie și cașexie
Frotiu fecal al geckosului leopard (tehnica Ziehl-Neelsen modificată): oociste rotunde cu diametrul de 4-5 diametri compatibile cu Cryptosporidium spp.
Extracția ADN-ului
Întreruperea ovocistului și purificarea ADN-ului din proba fecală (procesată în triplicat) a fost efectuată cu un kit comercial de scaun ADN (QIAamp DNA Stool Mini Kit, Qiagen, Hilden, Germania) conform recomandărilor producătorului. O probă de control al procesului (soluții de kit de extracție și 150 ofl de apă fără nuclează) a fost evaluată împreună cu probele de scaun.