Hrănirea cu grăsimi trans are ca rezultat o alanină aminotransferază serică mai mare și o rezistență crescută la insulină

Abstract

Grăsimile trans sunt o formă de grăsimi nesaturate, care sunt relativ rare în natură, dar sunt prezente din abundență în „fast-food” și în multe alimente procesate care sunt consumate excesiv în țările dezvoltate. Grăsimile trans diferă de majoritatea acizilor grași nesaturați datorită unei duble legături întrans”Configurare în locul standardului”cis”Configurare. Această modificare structurală are ca rezultat o specie de acid gras care este mai dreaptă și seamănă mai mult cu structura unui acid gras saturat. Se consideră că această modificare structurală joacă un rol deosebit de important în toxicitatea grăsimilor trans (41). Sursa principală de grăsimi trans din dieta noastră este de la hidrogenarea parțială a uleiurilor vegetale, care este un proces industrial utilizat pentru a transforma uleiurile în grăsimi semisolide pentru a fi utilizate în produse de patiserie, fast-food-uri prăjite și margarine. Consumul de doar una sau două porții din aceste produse poate depăși adesea aportul zilnic recomandat de grăsimi trans. Grăsimile trans reprezintă aproximativ 2-3% din totalul caloriilor consumate de americani, dar s-a recomandat ca aportul să nu fie mai mare de 1% din consumul total de calorii (2, 35).

Consumul de grăsimi trans este asociat cu un risc crescut de boli coronariene (5, 36, 37). În plus, grăsimile trans pot exacerba diabetul, așa cum sugerează rezistența crescută la insulină la rozătoarele hrănite cu grăsimi trans, deși datele care leagă grăsimile trans de diabetul la oameni sunt contradictorii (16, 18, 34, 51). Rezistența la insulină și bolile vasculare se întâlnesc frecvent la persoanele cu NAFLD, iar aceste boli au factori de risc comuni. Mai multe studii recente au demonstrat o creștere a evenimentelor cardiovasculare la pacienții cu NAFLD, independent de factorii de risc convenționali (4, 13, 19, 49). Deși consumul unei diete bogate în grăsimi de către rozătoare duce la dezvoltarea unei boli hepatice grase experimentale, importanța specifică a grăsimilor trans fie asupra bolii hepatice grase, fie experimentale sau umane, nu a fost abordată anterior. Prin urmare, am căutat să comparăm efectul unei diete de grăsimi trans care constă în principal din trans-18: 1, n-6, specia găsită în cea mai mare abundență în grăsimile trans consumate din surse industriale, cu un standard caloric ridicat de grăsimi (trans fără grăsimi) dietă privind dezvoltarea bolilor hepatice grase experimentale.

Animale și protocol experimental.

Șoarecii masculi AKR/J au fost cumpărați de la Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME), iar șoarecii aveau vârsta de 9-10 săptămâni la începutul fiecărui experiment. Animalele au fost găzduite într-o cameră cu temperatură controlată (22 ° C) cu lumină de 14 ore: 10 ore ciclism întunecat și hrănite cu Harlan Teklad chow (Madison, WI) înainte de experimentare, cu acces gratuit la alimente și apă. Șoarecilor li s-a administrat fie o dietă standard cu conținut ridicat de grăsimi trans, fie o dietă de control (Research Diets, New Brunswick, NJ) timp de 10 zile = 6-8 pe grup), 4 săptămâni = 5-6 pe grup), sau 8 săptămâni = 4-5 per grup). Au fost utilizate cohorte separate de șoareci pentru fiecare moment experimental.

tabelul 1. Compoziții dietetice

PUFA, acizi grași polinesaturați; SFA, acizi grași saturați.

Determinarea nivelului chimic și hormonal.

Nivelurile serice de alanină aminotransferază (ALT) au fost determinate folosind un kit spectrofotometric achiziționat de la Biotron Diagnostics (Hemet, CA). Nivelurile de trigliceride serice și hepatice au fost determinate folosind un kit de testare spectrofotometrică achiziționat de la Thermo Electron (Louisville, CO). Concentrația de proteine a omogenatului hepatic a fost determinată cu un reactiv de testare Coomassie (Pierce, Rockford, IL) și BSA ca standard. Conținutul de trigliceride hepatice a fost normalizat la conținutul de proteine al omogenatului. Nivelurile serice de insulină, leptină și interleukină-1β hepatică (IL-1β) au fost analizate cu plăci cu mai multe godeuri achiziționate de la Meso Scale Discovery (MSD) (Gaithersburg, MD), utilizând SECTOR Imager 2400 (MSD), conform instrucțiunilor producătorului. Ficatul a fost omogenizat în tampon de liză (pH 7,4, 50 mM Tris · HCI, 150 mM NaCI, 25 mM EDTA, 5 mM EGTA, 0,25% Na-deoxicolat, 1% Igepal-630, 0,5 mM DTT, 1% BSA) pentru determinare a nivelurilor hepatice de IL-1β. Nivelurile de glucoză în post au fost determinate folosind un glucometru cu reflectanță (One Touch II, Lifescan, CA). Indicele cantitativ de verificare a sensibilității la insulină (QUICKI) a fost calculat ca o măsură a sensibilității la insulină; QUICKI = 1/[log (insulină de post) + log (glucoză de post)].

Cromatografie lichidă cu proteine rapide și colesterol seric.

Lipoproteinele serice au fost fracționate cu un sistem de cromatografie lichidă rapidă cu proteine AKTA (FPLC) utilizând volume egale de plasmă reunită din cohorte de șoareci pe coloanele tandem Superose 6 FPLC (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ). Coloanele au fost apoi eluate cu 200 mmol/l fosfat de sodiu (pH 7,4), 50 mmol/l NaCI, 0,03% (greutate/vol) EDTA și 0,02% (greutate/vol) azidă de sodiu la un debit de 0,4 ml/min. Conținutul de colesterol din fracțiunile eluate a fost măsurat cu o tehnică de testare a microplăcilor. Colesterolul serului și al fracțiilor eluate a fost determinat cu un kit de reactivi de testare enzimatică (Sigma, St. Louis, MO). Nivelurile Apo B-100 ale fracțiilor LDL grupate au fost determinate folosind anticorpi policlonali de iepure (1: 500) direcționați împotriva apoB-100 de șoarece (Biodesign International, Saco, ME) așa cum s-a descris anterior (40).

PCR cantitativ în timp real.

ARN-ul a fost izolat din ficat utilizând reactivul Trizol cumpărat de la Invitrogen (Carlsbad, CA). Prima sinteză a ADNc-catenă a fost realizată prin transcriere inversă a 2 μg de ARN total cu un kit de sinteză ADNc iScript de la Bio-Rad (Hercules, CA). PCR în timp real a fost efectuată folosind 2 μl din ADNc total într-o reacție de 25 μl care conține QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen, Valencia, CA) (secvențe de exemplu enumerate în Tabelul 2). Amplificarea a fost efectuată în duplicat pentru fiecare probă într-un Detector de Secvență Aplicat Biosystems 7300 (Foster City, CA) și cantitatea de ARNm a fost normalizată cu GAPDH utilizat ca control endogen.

masa 2. Grunduri pentru PCR cantitativă în timp real

analize statistice.

Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Comparațiile între grupuri au fost efectuate cu ANOVA unidirecțională și metoda Holm-Sidak pentru comparații multiple în perechi. SigmaStat 3.0 a fost utilizat pentru a calcula rezultatele, iar semnificația a fost definită ca

FIG. 1.Valorile serice ale alaninei aminotransferazei (ALT). La 10 zile și 4 săptămâni nu a existat nicio diferență semnificativă în valorile ALT între grupuri. La 8 săptămâni, grupul de grăsimi trans a avut valori mai mari ale ALT comparativ cu grupul standard cu conținut ridicat de grăsimi și cel de control (*

Șoarecii trans hrăniți cu grăsime au câștigat mai puțină greutate după 8 săptămâni, comparativ cu șoarecii standard hrăniți cu grăsimi, dar au avut o creștere similară a steatozei hepatice.

După 10 zile, 4 săptămâni și 8 săptămâni în dietele lor respective, șoarecii standard cu conținut ridicat de grăsimi și trans-hrăniți cu grăsimi au avut o creștere în greutate crescută comparativ cu șoarecii care au primit dieta de control. Cu toate acestea, până la 8 săptămâni șoarecii cu conținut ridicat de grăsimi au câștigat mai multă greutate decât șoarecii trans-hrăniți cu grăsimi (Fig. 2A). După 8 săptămâni, grupurile cu conținut ridicat de grăsimi și grăsimi trans au avut o creștere similară a conținutului de trigliceride hepatice și ambele grupuri au avut un conținut de trigliceride hepatice semnificativ mai mare decât grupul de control (Fig. 2).