Frontiere Proprietăți probiotice ale enterococului izolate din microbiologie a produselor lactate artizanale

Microbiologie alimentară

Acest articol face parte din subiectul de cercetare

Siguranța alimentară și agentul patogen alimentar - O perspectivă globală asupra diversității, combaterea rezistenței și gestionării multidrogurilor Vizualizați toate cele 39 de articole

Editat de
Learn-Han Lee

Monash University Malaysia, Hotel Malaysia

Revizuite de
Sergio E. Pasteris

Universitatea Națională Tucumán, Argentina

Konstantinos Papadimitriou

Departamentul de Știință și Tehnologie Alimentară, Universitatea din Peloponez, Grecia

Afilierile editorului și ale recenzenților sunt cele mai recente oferite în profilurile lor de cercetare Loop și este posibil să nu reflecte situația lor în momentul examinării.

frontiere

  • Descărcați articolul
    • Descărcați PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Suplimentar
      Material
  • Citarea exportului
    • Notă finală
    • Manager de referință
    • Fișier TEXT simplu
    • BibTex
DISTRIBUIE PE

Cercetare originală ARTICOL

  • 1 Departamentul de Biotehnologie Alimentară, Direcția pentru Regiunea Nord-Vest și Vest, Institutul de Cercetări în Biotehnologie Agricolă, Organizația pentru Educație și Extindere (AREEO), Tabriz, Iran
  • 2 Suplimentele dietetice și Centrul de cercetare probiotice, Universitatea Alborz de Științe Medicale, Karaj, Iran

Introducere

Enterococii aparțin generației de bacterii lactice (LAB). Sunt gram-pozitive, catalază negativă, în formă de cocci, anaerobe facultative și bacterii care nu formează spori (Haghshenas și colab., 2016). Pe baza dovezilor filogenetice și a studiilor moleculare (secvențierea 16S-rDNA sau hibridizarea ADN - ADN), mai mult de 26 de specii au fost clasificate în acest gen. Aceste microorganisme sunt bacterii omniprezente care se prezintă ca microbiota obișnuită în intestinele oamenilor, mamiferelor și altor tracturi gastrointestinale ale animalelor, dar există și în sol, apă, produse vegetale, carne, carne și produse lactate fermentate și fierte (Li și colab. ., 2018; Zommiti și colab., 2018). Acest lucru se datorează toleranței lor ridicate la condiții dure, cum ar fi temperaturi ridicate, pH scăzut și salinitate ridicată. Rol semnificativ al E. faecium, E. faecalis, și E. durans în maturarea brânzeturilor tradiționale au indicat faptul că enterococii joacă un rol important în maturarea acestor brânzeturi, probabil prin proteoliză, lipoliză și descompunerea citratului, contribuind astfel la gustul și aroma lor tipice. Majoritatea operelor specifică acest lucru Enterococ izolatele joacă un rol vital în dezvoltarea proprietăților senzoriale ale alimentelor fermentate, cum ar fi măslinele (descompun oleuropeinul în măsline fermentate), cârnații și brânza (Moreno și colab., 2006).

Există mai multe matrice de probiotice, în principal Lactobacillus și Bifidobacterii grupuri și Enterococ genurile din ultimii ani, sunt utilizate în alimente funcționale (Haghshenas și colab., 2017). Avantajele revendicate ale enterococilor probiotici sunt: ​​(i) diareea sau tratamentul diareei în asociere cu medicamente antibiotice, contaminări virale, chimioterapie și boli provenite de la agenții patogeni de origine alimentară (Lau și Chamberlain, 2016); (ii) reducerea creșterii bacteriilor patogene (Zorriehzahra și colab., 2016); (iii) caracteristici anti-mutagene și anticancerigene; (iv); creșterea barierei mucoasei intestinale (Ahl și colab., 2016); (v) stimularea sistemului imunitar (Sheikhi și colab., 2016); (vi) prevenirea ulcerelor legate de Helicobacter pylori infecție (Oh și colab., 2016) și (vii) asimilarea colesterolului în alimente și în intestinul uman (Kobyliak și colab., 2016). Aceste microorganisme au activități antagoniste prin intermediul agenților patogeni de către diferiți compuși antimicrobieni producerea cuprinde bacteriocine, acizi lactici și acetici și peroxid de hidrogen.

Materiale și metode

Condiții de eșantionare și cultură

Produsele lactate artizanale (iaurt, brânză și caș) au fost colectate de la producătorii interni (Tabelul 1). Probele au fost transportate la laborator în cutii de gheață și depozitate la 4 ° C. Pentru o mai bună separare a bacteriilor de particulele solide de iaurt și brânză, omogenizarea inițială a avut loc prin vortex. Pentru a prepara suspensia bacteriană de iaurt, 10 g de iaurt au fost transferați la 100 ml de apă peptonă fiziologică sterilă și agitați ușor. Pentru a prepara suspensia bacteriană de brânză și caș, 20 g din fiecare probă au fost suspendate în 180 ml soluție sterilă de citrat de sodiu și, după o jumătate de oră, s-au adăugat 10 ml soluție preparată la 200 ml Man Rogosa Sharpe (MRS) ) bulion pentru a îmbogăți și îmbunătăți populația bacteriană inițială în condiții anaerobe și incubat la 37 ° C timp de 24 de ore (Haghshenas și colab., 2017).

tabelul 1. Originea, regiunea probelor preparate și toleranța acidă și biliară a izolatelor.

Izolarea Enterococ Izolați

Enterococ izolatele au fost izolate prin metoda streak-plate pe agar MRS și incubate aerob la 37 ° C timp de 24 de ore. Coloniile individuale au fost verificate în mod curent pentru puritate prin examinare microscopică. Coloniile pure au fost folosite pentru a caracteriza colorarea Gram și testul catalazei. Coloniile care au fost Gram-pozitive și catalază-negative au fost selectate și inoculate în bulion MRS conținând 30% glicerol ca crioprotector și stocate la -80 ° C (El Soda și colab., 2003). Culturile purificate au fost activate prin subcultivare de două ori în bulion MRS înainte de utilizare.

Evaluarea proprietăților probiotice

Toleranță la acizi și săruri biliare

Pentru a determina toleranța la acid, 10 mL de cultură bacteriană din fiecare probă au fost incubate timp de 24 de ore în bulion MRS. Coloniile selectate au fost transferate în soluție salină tamponată cu fosfat mediu (PBS, pH 2,5). Probele au fost incubate aerob timp de 3 ore la 37 ° C. Ulterior, celulele au fost diluate de până la 10 ori folosind ser fiziologic steril (clorură de sodiu: 5,8 g/L) și a fost cultivată fiecare diluție de 100 μL pentru suprafața de agar MRS în mediu de cultură. Probele au fost incubate aerob timp de 48-72 ore la 37 ° C (Haghshenas și colab., 2015).

Toleranța la sărurile biliare a fost analizată pe baza metodei utilizate anterior de Nami și colab. (2015b). Pe scurt, mediul de cultură bulion MRS, ca martor, și MRS cu 0,3% oxal biliar, utilizat ca mediu de testare (tratamente), au fost inoculate simultan cu 1% cultură bacteriană activă la 37 ° C timp de 4 ore. Densitățile optice ale culturilor de creștere controlate și tratate au fost măsurate cu un spectrofotometru (Eppendorf, Germania) la 600 nm. Procentul de suprimare a creșterii a fost măsurat folosind următoarea formulă:

Activitatea antimicrobiană și detectarea bacteriocinei

Metoda de difuzie a puțului a fost efectuată pentru a concluziona și recunoaște metaboliții inhibitori produși de Enterococ izolate (Nami și colab., 2015a). Culturile peste noapte ale izolatelor selectate au fost cultivate în agar MRS la 37 ° C timp de 24 de ore. Bacteriile indicatoare utilizate în acest studiu au fost Shigella flexneri PTCC 1234, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Listeria monocytogenes ATCC 13932, Yersinia enterocolitica ATCC 23715, Klebsiella pneumoniae PTCC 1053, Escherichia coli PTCC, 1276 și Bacillus subtilis ATCC 19652. Aceste organisme patogene au fost achiziționate din colecția de culturi de tip persan (PTCC) pentru a detecta substanțele antagoniste. Jumătate bacterii indicator McFarland (1,5 × 108 CFU/ml) au fost turnate pe agar Mueller-Hinton și godeurile au fost tăiate pe plăci. Apoi, fiecare godeu a fost umplut cu 50 μL de supernatant filtrat și plăci incubate peste noapte la 37 ° C și, în cele din urmă, zona de inhibare din jurul godeurilor a fost măsurată cu etriere digitale.