Frontiere O perspectivă metabolică asupra efectului neuroprotector al decoctului Jin-Mai-Tong (JMT) pe

Etnofarmacologie

Editat de
George Q. Li

Universitatea Western Sydney, Australia

Revizuite de
Shuai Ji

Universitatea Medicală Xuzhou, China

Suresh K. Mohankumar

JSS College of Pharmacy, India

Afilierile editorului și ale recenzenților sunt cele mai recente oferite în profilurile lor de cercetare Loop și este posibil să nu reflecte situația lor în momentul examinării.

frontiere

  • Descărcați articolul
    • Descărcați PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Suplimentar
      Material
  • Citarea exportului
    • Notă finală
    • Manager de referință
    • Fișier TEXT simplu
    • BibTex
DISTRIBUIE PE

Cercetare originală ARTICOL

  • 1 Departamentul de Medicină tradițională chineză, Spitalul Colegiului Medical din Uniunea Beijing, Colegiul Medical al Uniunii din Beijing, Academia Chineză de Științe Medicale, Beijing, China
  • 2 Centrul de Cercetări Medicale, Spitalul Colegiului Medical din Uniunea Beijing, Colegiul Medical al Uniunii din Beijing, Academia Chineză de Științe Medicale, Beijing, China

Decoctul Jin-Mai-Tong (JMT) este o rețetă tradițională chineză compusă pentru tratarea neuropatiei periferice diabetice (DPN). Scopul acestui studiu este de a investiga efectul neuroprotector al decoctului JMT asupra șobolanilor diabetici cu neuropatie periferică și de a elucida mecanismul potențial bazat pe o abordare metabolomică. Șobolanii Sprague-Dawley (SD) au fost împărțiți aleatoriu în patru grupuri: grupul martor, grupul model indus de Streptozotocin (STZ), grupul tratat cu doză mică JMT (JMT-L) și grupul tratat cu doză mare JMT (JMT-H). După 12 săptămâni de tratament, s-au estimat modificări de comportament, pierderi mici de fibre și leziuni histopatologice ale nervilor sciatici. Probele de ser au fost colectate pentru analize metabolomice nedestinate pe baza UPLC/QTOF-MS și statistici multivariate. Ca urmare, tratamentul cu JMT la două doze (13,9 și 27,8 g/kg⋅d) a îmbunătățit evident pragul mecanic al durerii ( 1. Numărul lotului și alte informații detaliate ale fiecărui material medicamentos au fost date în tabelul suplimentar S1 și în figura suplimentară S1. Specimenele de voucher au fost depuse la Departamentul de Medicină tradițională chineză, Spitalul Universitar Medical din Beijing Union, Beijing, China.

Pentru prepararea decoctului JMT, medicamentele brute amestecate au fost înmuiate cu apă liniștită la temperatura camerei (25 ° C) timp de 2 ore. Pentru primul decoct, medicamentele au fost refluxate cu 10 ori apă (1:10, w/v) timp de 1,5 ore înainte de filtrare. Pentru al doilea decoct, reziduurile de droguri au fost refluxate cu opt ori mai mare de apă (1: 8, w/v) înainte de filtrare. Cele două decocturi au fost apoi amestecate împreună și concentrate în vid. Decoctul concentrat a fost liofilizat cu un randament de extracție de 19%. Apoi, extractul JMT a fost depozitat la -80 ° C și bine suspendat în apă înainte de utilizare.

Analiza chimică a decoctului JMT

Animale și tratament

Șobolanii din grupul STZ + JMT-L și grupul STZ + JMT-H au fost administrați oral cu decoct JMT în doza de 13,9 g/kg (egală cu doza clinică, calculată în greutate a medicamentelor brute) și respectiv 27,8 g/kg, o dată pe zi și timp de 12 săptămâni consecutive după stabilirea modelului de diabet. Șobolanii din grupul STZ și grupul martor au fost administrați cu volum egal de apă distilată (5 ml) o dată pe zi. Greutatea corporală și nivelurile glicemiei de tip coadă la toți șobolanii au fost măsurate la fiecare 4 săptămâni.

Testarea senzorială Von Frey

După 12 săptămâni de tratament, sensibilitatea mecanică la stimulii nocivi a fost evaluată folosind un anestezimetru al instrumentului de măsurare a durerii Von Frey (IITC Life Science Inc., Woodland Hills, CA, Statele Unite) (Choi și colab., 2014; Yerra și colab., 2018). După cum s-a descris mai devreme, după ce șobolanii s-au adaptat la mediul înconjurător, laba posterioară a fost stimulată de o sondă a instrumentului Von Frey (Song și colab., 2019). Pragul mecanic al durerii a fost măsurat ca forță la care a fost observată retragerea labei și înregistrată în grame. Fiecare șobolan a fost măsurat de 3 ori pe labele bilaterale posterioare cu un interval de 5 minute între stimuli consecutivi. Pragul mecanic al durerii la șobolani a fost considerat drept măsurătorile medii.

Observarea modificărilor morfologice în nervul sciatic

La sfârșitul experimentului, toți șobolanii au fost sacrificați prin injecție intraperitoneală de 10% hidrat de clor (3 ml/kg) pentru anestezie profundă. După recoltarea sângelui, nervul sciatic stâng (2-3 mm) a fost izolat și fixat în paraformaldehidă (PFA) 4% la 4 ° C peste noapte. Nervul sciatic a fost încorporat în parafină și a tăiat atât secțiunea transversală, cât și secțiunea longitudinală (4 μm). Procedura histopatologică de rutină a fost efectuată pentru colorarea hematoxilinei și eozinei (H&E) pentru observarea modificărilor structurale patologice și imaginile au fost achiziționate de Aperio CS2 (Leica Biosystems, Richmond, IL, Statele Unite).

Profilul nervului intraepidermic și subepidermic

Pregătirea probei de ser

La sfârșitul experimentului, toți șobolanii au fost posti timp de 12 ore (gratuit pentru a bea apă) și apoi sacrificați pentru colectarea serului sub anestezie. Sângele a fost colectat din aorta abdominală. Fiecare probă a stat la 4 ° C timp de 4 ore, centrifugată la 3.000 rpm timp de 10 minute și supernatantul a fost colectat și depozitat la -80 ° C până la analiza metabolică. Înainte de analiză, fiecare probă de ser a fost decongelată la 4 ° C și o alicotă de 100 μL a fost transferată într-un tub siliconizat steril de 1,5 ml Eppendorf. După tratarea cu 300 μL de metanol rece, amestecul a fost agitat timp de 30 s și apoi a stat la 4 ° C timp de 1 oră pentru a precipita proteina. După centrifugare la 13.000 g timp de 10 min, supernatantul a fost apoi colectat și filtrat printr-o membrană de 0,22 μm înainte de analiza UPLC/Q-TOF MS. Eșantionul de control al calității (QC) a fost preparat prin amestecarea volumului egal (50 μL) din fiecare probă de testare. Eșantionul QC a fost injectat de 6 ori la începutul cursei pentru a asigura echilibrarea sistemului UPLC/Q-TOF MS și apoi între fiecare 6 eșantioane din cursă pentru a asigura coerența analizei.