Efectul dietei materne bogate în grăsimi asupra componentelor cheie ale endocannabinoidului placentar și hepatic

Facultatea de Medicină, Departamentul de Obstetrică și Ginecologie, Universitatea Texas Tech Centrul de Științe ale Sănătății din bazinul Permian, Odessa, Texas

Departamentul de Științe Animale, Universitatea din Wyoming, Laramie, Wyoming

Texas Biomedical Research Institute și Southwest National Primate Research Center, San Antonio, Texas

Școala de farmacie, Texas Tech University Health Science Center, Amarillo, Texas

Universitatea din Alabama la Birmingham, Birmingham, Alabama

Facultatea de Medicină, Departamentul de Obstetrică și Ginecologie, Centrul de Științe de Sănătate al Universității Texas Tech din bazinul Permian, Odessa, Texas

Școala de farmacie, Texas Tech University Health Science Center, Amarillo, Texas

Institutul de Cercetări Clinice, Texas Tech University Health Sciences, Lubbock, Texas

Facultatea de Medicină, Departamentul de Obstetrică și Ginecologie, Universitatea Texas Tech Centrul de Științe ale Sănătății din bazinul Permian, Odessa, Texas

Departamentul de Științe Animale, Universitatea din Wyoming, Laramie, Wyoming

Texas Biomedical Research Institute și Southwest National Primate Research Center, San Antonio, Texas

Facultatea de Medicină, Departamentul de Obstetrică și Ginecologie, Universitatea Texas Tech Centrul de Științe ale Sănătății din bazinul Permian, Odessa, Texas

Adresa pentru solicitări de reimprimare și alte corespondențe: N. Schlabritz-Lutsevich, Dept. de obstetrică și ginecologie, depart. of Pharmacology and Neuroscience, Texas Tech University Health Sciences Center la Permian Basin School of Medicine, 800 W. 4th St., Odessa, TX 79763 (e-mail: [e-mail protejat]).

Abstract

Îngrijirea animalelor

Pentru a produce obezitate, babuinii cu greutate normală (Papio spp.) au fost hrăniți cu o dietă de 45% grăsimi (HFD; = 11) ad libitum, în timp ce controalele (CTR; = 11) au consumat 12% grăsimi timp de ≥ 9 luni înainte de concepție și în timpul sarcinii. Compoziția dietetică este descrisă în detaliu în altă parte (53, 57). Animalele au fost adăpostite într-un mediu controlat în aer liber, în cuști sociale de 14-16 femele și un bărbat cu activitate fizică și socială completă (33). Cezarianele au fost efectuate sub anestezie generală la 0,9 zile de gestație (165 dGA), așa cum s-a descris anterior (57). Țesuturile fetale, placentare și materne au fost colectate și conservate fie prin fixarea formalinei (pentru imunohistochimie), fie prin congelare în azot lichid și depozitare la -80 ° C pentru cuantificarea proteinei/ARN-ului. Toate procedurile au fost aprobate de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor de la Centrul Național de Cercetare a Primatelor din Sud-Vest (protocolul nr. 1244PC).

Estimarea concentrațiilor de 2-arahidonoil glicerol și anandamidă în serul fetal și matern utilizând cromatografie lichidă-spectrometrie de masă/spectrometrie de masă

Transcriere inversă în timp real PCR cantitativ

Imunohistochimie

Western Blotting

Analize statistice

Toate datele sunt rezumate ca medii ± SE. Testele lui Shapiro-Wilk și Levene au fost utilizate pentru a evalua normalitatea și, respectiv, egalitatea varianței. Deoarece variabile multiple nu au îndeplinit criteriile pentru o analiză a varianței 2 × 2 datorită distribuțiilor nenormale și a dimensiunilor foarte mici ale eșantioanelor, extensia nonparametrică Scheirer-Ray-Hare a testului Kruskal-Wallis a fost utilizată pentru a analiza efectul dietei (HFD vs CTR), sexul fetal (masculin vs. feminin) și dieta × interacțiunea sexuală. Datele CB1R și CB2R de la IHC au fost analizate folosind aceeași abordare, dar efectele sexului fetal și interacțiunea dietă × sex nu au fost calculate din cauza configurării experimentale IHC. Semnificația a fost stabilită la 0,05.

Morfometrie fetală și maternă

Greutatea fetală a fost influențată de sexul fetal, dar nu de tiparul alimentar matern (Tabelul 1). Creșterea greutății materne la animalele hrănite cu HFD s-a apropiat de semnificație ( = 0,055).

Tabelul 1. Greutățile materne și fetale în grupurile CTR și HFD

Valorile sunt medii ± SE. CTR, control; HFD, dietă bogată în grăsimi; CS, cezariană. Notă: Animalele HFD au fost hrănite cu o dietă de 45% grăsimi, iar CTR au fost hrănite cu o dietă de 12% grăsimi. Deoarece greutățile placentare și hepatice au prezentat valori lipsă, sunt prezentate doar date descriptive pentru aceste variabile. Greutatea CS Mat este greutatea maternă la momentul operației cezariene.

Concentrații circulante de 2-AG și AEA în baraje și fetusurile lor

Concentrațiile materne 2-AG au fost crescute și concentrațiile fetale au scăzut în grupul HFD independent de sexul fetal (Tabelul 2).

Tabelul 2. Concentrațiile de AEA și 2-AG după dietă și sex fetal

Valorile sunt medii ± SE. AEA, anandamidă; 2-AG, 2-arahidonoil glicerol; CTR, control; HFD, dietă bogată în grăsimi.

Expresia sistemului endocannabinoid în placentă și ficat matern și fetal

Sistemul endocannabinoid hepatic matern și fetal.

imunohistochimie.

CB1R a fost exprimat în citoplasmă (diguri) și în membranele celulare (fetuși) ale hepatocitelor periportale care înconjoară vena centrală și epiteliul căilor biliare (Fig. 1). Histoscorele nu au fost diferite între grupurile HFD și CTR. Expresia CB2R a fost evidentă în fibroblastele țesuturilor conjunctive ale triadei, ale căilor biliare, ale hepatocitelor pericentrale și ale pereților arteriali (Fig. 2), iar histoscorele nu au fost diferite între grupurile HFD și CTR.

FIG. 1.Expresia proteinei receptorului endocannabinoid 1 (CB1R) în ficatul matern și fetal al unei diete bogate în grăsimi (HFD); = 11) și control (CTR; = 10) animale. A-D: imagini reprezentative ale ficatului fetal de la fetuții masculi (MF) în CTR = 3) și HFD ( = 6) grupuri. E-H: ficatul fetal de la fetuții feminini (FF) în CTR ( = 6) și HFD = 3) grupuri. Eu-L: ficatul matern al barajelor cu MF în CTR ( = 4) și HFD ( = 5) grupuri. M-: secțiuni de ficat matern de la baraje care transportă FF în CTR ( = 5) și HFD = 4) grupuri. Î-T: analize cantitative. Săgețile albastre indică căile biliare, săgețile verzi indică arterele, săgețile roz indică venele centrale (CV), iar asteriscurile galbene indică vena portă. Controalele negative (omiterea anticorpilor primari) sunt prezentate în A-, insecte (sus în dreapta). Bare de scară, 20 μm. Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Triada portală este definită de vena portală, conducta biliară și artera hepatică.