Antagonistul hormonului de eliberare a hormonului de creștere MZ-5-156 inhibă creșterea DU-145 umană

Contribuție de Andrew V. Schally

hormonului

Abstract

MATERIALE ȘI METODE

Peptidă și reactivi.

Antagonist GH-RH (MZ-5-156) PhAc- [D-Arg 2, Phe (p-Cl) 6, Abu 15, Nle 27] hGH-RH (1-28) Agm [unde PhAc este fenilacetil, Phe ( p-Cl) este paraclor-fenilalanil, Abu este α-aminoisobutiril, Nle este norleucil, iar Agm este agmatină] a fost sintetizată prin metode în fază solidă și purificată în laboratorul nostru (20). Pentru injecțiile zilnice, MZ-5-156 a fost dizolvat în 0,1% dimetil sulfoxid (DMSO) în 10% propilen glicol/soluție salină sterilă (Sigma).

Animale.

Șoarecii nud masculi atimici (Ncr nu/nu), cu vârsta de aproximativ 6 săptămâni la sosire, au fost obținuți de la Institutul Național al Cancerului (Bethesda, MD) și găzduiți în dulapuri cu flux de aer laminar în condiții fără patogeni, cu o lumină de 12 ore/12- h program întunecat și hrănit autoclav standard chow și apă ad libitum. Îngrijirea lor era în concordanță cu orientările instituționale.

Cultură de celule.

Linia DU-145 de carcinom de prostată independent de androgen uman a fost obținută din colecția American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Celulele DU-145 au fost cultivate sub formă de monostrat în mediu RPMI 1640 (GIBCO) suplimentat cu 10% ser fetal bovin, antibiotice și antimicotice la 37 ° C într-o atmosferă umidificată 95% aer/5% CO2 atmosferă. Celulele tumorale care au crescut exponențial au fost recoltate prin incubare scurtă cu soluție de tripsină-EDTA 0,25% (GIBCO). Xenogrefele de DU-145 au fost inițiate de s.c. injectarea a 1 × 107 celule în flancurile stângi a cinci șoareci nud masculi.

Protocol experimental.

Tumorile DU-145 rezultate după 8 săptămâni de creștere au fost disecate aseptic și tocate mecanic; 3-mm 3 bucăți din fiecare țesut tumoral au fost transplantate s.c. prin ac trocar în șoareci masculi nud sub anestezie metoxifluran (Methofane, Pitman-Moore, Mundelein, IL). La șase săptămâni după transplant, când tumorile crescuseră până la un volum cuprins între 40 și 50 mm 3, șoarecii purtători de tumori au fost împărțiți în două grupuri de câte opt animale fiecare. Grupul martor a fost injectat numai cu 0,1% DMSO în 10% propilen glicol/soluție salină s.c. (soluție vehicul) și grupul experimental a fost tratat cu 20 μg de antagonist GH-RH MZ-5-156 s.c. de doua ori pe zi. Tratamentul a fost continuat timp de 8 săptămâni. Tumorile au fost măsurate o dată pe săptămână cu microcalipere, iar volumul tumorii a fost calculat ca lungime × lățime × înălțime × 0,5236 (25). La sfârșitul experimentului, șoarecii au fost anesteziați cu metoxifluran și sacrificați prin decapitare, iar sângele din trunchi a fost colectat. Serul a fost separat și analizat prin radioimunotest. S-au înregistrat greutăți corporale și tumorile au fost disecate, curățate și cântărite cu atenție, iar probele fiecărei tumori au fost luate pentru analize radioimunologice și biologie moleculară.