Restricția lizinei afectează aportul de furaje și metabolizarea aminoacizilor prin microbiomul intestinal la purcei -
Tiejun Li și Yulong Yin
Laboratorul cheie al proceselor agroecologice în regiunea subtropicală,
Institutul de Agricultură Subtropicală, Academia Chineză de Științe, Hunan (China)
E-mail [email protected]; [email protected]
Articole similare pentru „”
- Stare de nervozitate
Abstract
Introducere
Restricția dietetică este un potențial terapeutic promițător pentru prevenirea bolilor legate de îmbătrânire și extinderea perioadei de sănătate prin medierea comportamentului alimentar și reprogramarea metabolică, în special pentru restricția proteinelor [1-4]. Lizina servește drept element cheie pentru sinteza proteinelor și a fost clasificată ca aminoacid esențial la oameni și animale [5-7]. În studiile anterioare, am folosit o dietă cu deficit de lizină formulată cu zeină și am constatat că deficitul de lizină a inhibat aportul de hrană și a influențat absorbția intestinală și metabolismul aminoacizilor la șoareci și purcei [8, 9]. Acest studiu a fost una dintre primele încercări de a investiga dacă limitarea lizinei corespunde rolului benefic al restricției proteice.
Materiale și metode
Animale și grupuri
18 purcei masculi (Landrace × Large White) cu greutatea corporală medie (21,26 ± 0,39 kg) au fost împărțiți în mod aleatoriu în 6 pixuri triunghiulare (Fig.1A) (n = 3) cu trei jgheaburi în fiecare colț. Trei diete de lizină (70%, 100% și 130%) conform NRC 2012 (Tabelul 1) au fost hrănite în fiecare jgheab, iar ordinea de hrănire și jgheaburile de hrănire ale dietelor au fost schimbate în fiecare zi într-o ordine fixă. Animalele erau libere să bea apă și hrănite de 6 ori pe zi timp de 25 de zile. Aportul de furaje în fiecare jgheab a fost înregistrat zilnic pentru a evalua preferințele dietetice pentru dietele care variază în concentrația de lizină.
tabelul 1.
Compoziția și nivelul nutrienților din dieta bazală. * Premixul a furnizat următoarele pe kilogram de dietă: Sepiolit, 6.043g; vitamina porcului, 750 mg; FeSO4 · H2O, 516mg; CuSO4 · 5H2O, 600 mg; MnSO4 · H2O 250mg; ZnSO4 · H2O, 212mg; Na2SeSO3, 30 mg; CoO 500 mg; VB4 1000mg; ZnO 60mg; KI 39mg; DE, energie digestivă
FIG. 1.
Cantitativ în timp real (RT-PCR)
ARN-ul total din probele de jejun și ileon a fost izolat din țesuturile azotate congelate și măcinate cu regiz TRIZOL (Invitrogen, SUA) și apoi tratate cu DNază I (Invitrogen, SUA) [21-23]. Transcrierea inversă a fost efectuată la 37 ° C timp de 15 minute, 95 ° C 5 sec. Primerii utilizați în acest studiu au fost proiectați prin Exemplul 5.0 în conformitate cu secvența genei de șoareci și porci (Tabelul 2). β-actina a fost aleasă ca genă de menaj pentru normalizarea nivelurilor genei țintă. Starea ciclului PCR a fost de 36 cicluri la 94 ° C timp de 40 sec, 60 ° C timp de 30 sec și 72 ° C timp de 35 sec. Expresia relativă a fost exprimată ca raport dintre gena țintă și gena martor utilizând formula 2 - (∆∆Ct), unde tratamentul ∆∆Ct = (CtTarget -Ctβ-actin) - (CtTarget -Ctβ-actin) control. Expresia relativă a fost normalizată și exprimată ca raport cu expresia din grupul de control [24-26].
masa 2.
Grunduri utilizate în acest studiu. F, înainte; R, invers
Izolarea și caracterizarea microbiotei
ADN-ul total al genomului din digestia ileală a fost extras folosind QIAamp DNA Stool Mini Kit și concentrația și puritatea ADN-ului au fost monitorizate pe geluri de agaroză 1%. Conform concentrației, ADN-ul a fost diluat la 1ng/μL folosind apă sterilă. Genele ARNr 16S din regiuni distincte (16SV3-V4) au fost amplificate folosind un exemplu specific cu codul de bare. Toate reacțiile PCR au fost efectuate cu Phusion® High-Fidelity PCR Master Mix (New England Biolabs). Se amestecă același volum de tampon de încărcare 1X (conținut verde SYB) cu produse PCR și se operează electroforeza pe gel de agaroză 2% pentru detectare. Probele cu bandă principală strălucitoare între 400-450bp au fost alese pentru alte experimente. Apoi, amestecul de produse PCR a fost purificat cu Qiagen Gel Extraction Kit (Qiagen, Germania).