Ratele sintetice ale proteinelor exportate de ficat sunt crescute prin hrănirea orală a mesei în cancerul de slăbit

Departamentul de Chirurgie, Royal Infirmary of Edinburgh, Edinburgh EH3 9YW;

Departamentul de Chirurgie, Glasgow Royal Infirmary, Glasgow G31 2ER; și

Laboratorul de biochimie a izotopilor, Centrul de cercetare și reactor al universităților scoțiene, East Kilbride, Regatul Unit G75 0QF

Departamentul de Chirurgie, Royal Infirmary of Edinburgh, Edinburgh EH3 9YW;

Laboratorul de biochimie a izotopilor, Centrul de cercetare și reactor al universităților scoțiene, East Kilbride, Regatul Unit G75 0QF

Abstract

S-a demonstrat anterior că, în starea de repaus alimentar, rata totală de sinteză a albuminei este neschimbată la pacienții cu cancer avansat, comparativ cu martorii, în ciuda concentrațiilor de albumină mult mai mici (19). Prin contrast, rata totală de sinteză a fibrinogenului este semnificativ crescută în starea de repaus alimentar la pacienții cu cancer, însoțită de concentrații circulante mai mari comparativ cu martorii (33). Acest lucru ar sugera că, în starea de post pentru albumină cel puțin, o rată de sinteză redusă nu explică hipoalbuminemia observată. În schimb, concentrațiile plasmatice de fibrinogen reflectă, cel puțin parțial, o rată crescută de sinteză.

Sinteza albuminei este considerată a fi stimulată prin hrănirea subiecților sănătoși (13, 24); totuși, în schimb, sinteza fibrinogenului rămâne neschimbată (10, 13). Dacă ar exista un răspuns sintetic redus al albuminei la hrănirea în cancer, acest lucru ar putea contribui la hipoalbuminemie. Alternativ, dacă s-ar crește sinteza fibrinogenului ca răspuns la hrănirea cu cancer (și acest proces a afectat alte proteine pozitive în fază acută), atunci acest lucru ar putea contribui la cerințele metabolice asupra economiei de azot a acestor pacienți și ar putea contribui în cele din urmă la pierderea slabă. țesutului, în special dacă aportul de proteine din dietă a fost restricționat.

În încercarea de a explora aceste ipoteze, scopul prezentului studiu a fost de a evalua dacă pacienții slăbiți cu cancer pancreatic avansat au un răspuns anormal de albumină sintetică în starea de hrănire și dacă sinteza proteinei de fază acută pozitivă fibrinogen este modificat.cu hrănirea la astfel de pacienți.

Subiecte.

Opt pacienți cu un diagnostic neechivoc de cancer pancreatic, care pierdeau în greutate fără dovezi clinice de ascită sau edem periferic, au fost examinați în studiu. Șase indivizi sănătoși stabili în greutate au servit drept controale. Niciunul dintre pacienți nu a primit chimioterapie sau radioterapie și niciunul nu a suferit intervenții chirurgicale în ultimele 4 săptămâni. Niciun pacient nu a prezentat dovezi clinice sau radiologice de infecție, a fost icterizat sau a fost sever anemic sau a primit steroizi. Studiul a fost aprobat de comitetul etic local și toți subiecții au dat consimțământul scris în scris.

Protocol de studiu.

FIG. 1.Protocol de studiu. REE, cheltuieli energetice restante.

Pregătirea probelor și analiza izotopilor.

Metoda de preparare a probei a fost descrisă anterior (27). Pe scurt, protocolul de studiu a necesitat măsurarea îmbogățirii marcate cu fenilalanină în bazinul de fenilalanină fără plasmă și în albumina plasmatică și fibrinogen. Pentru analiza gratuită a fenilalaninei, probele de plasmă de 1,5 ml au fost diluate cu 5 ml de apă distilată deionizată, cu 250 nmol cicloleucină adăugată ca standard intern. Probele diluate au fost apoi deproteinizate prin ultrafiltrare (25.000 greutate moleculară tăiată cu centrifree, Amicon, Gloucestershire, Marea Britanie) și acidificate, iar aminoacizii au fost purificați prin schimb de cationi. [2H5] - sau [2H8] îmbogățirea fenilalaninei a fost măsurată prin cromatografie în fază gazoasă-spectrometrie de masă (GC-MS) catert-derivați de butildimetilsilil (37). S-a descoperit că fenilalanina [2H8] formează în timp [2H7] fenilalanină (fenilalanina liberă în circulație a cuprins aproximativ 50% ([2H7] fenilalanină la aproximativ 100 de minute după doza de inundație de [2H8] fenilalanină). Acest fenomen s-a produs in vivo și nu în standardele de urmărire sau în timpul prelucrării probelor. Pentru a depăși această problemă, ambii izotopomeri au fost măsurați în toate probele, iar suma lor a fost utilizată în toate calculele.

Albumina a fost extrasă din 1 ml de ser prin solubilitate diferențială în etanol absolut din 10% (greutate/greutate) proteină precipitată cu acid tricloroacetic. Pentru a elimina urmele de fenilalanină liberă, soluția de albumină etanolică a fost spălată de trei ori cu 5 ml de apă distilată deionizată prin ultrafiltrare. Albumina purificată a fost apoi hidrolizată și îmbogățirea cu fenilalanină marcată a fost măsurată prin GC-MS (37).

După spălarea plasmei de trei ori într-un con de ultrafiltrare, așa cum s-a descris mai sus, fibrinogenul a fost îndepărtat ca un cheag de fibrină. Coagularea a fost efectuată prin diluarea a 1,5 ml de plasmă la 20 ml cu soluție salină și 0,5 ml de clorură de calciu (0,5 mol/l). Cincisprezece unități de trombină fără albumină umană (Sigma, Poole, Marea Britanie) au fost apoi adăugate și după 10 minute fibrina a fost colectată pe o tijă de sticlă gravată. Fibrina a fost apoi hidrolizată sub vid la 145 ° C timp de 4 ore cu 6 mol/l HCI și îmbogățirea marcată cu fenilalanină a fost măsurată așa cum s-a descris mai sus.

Îmbogățirea marcată cu fenilalanină a bazinului fără plasmă, a albuminei și a fibrinogenului în starea de post și hrănire este prezentată în Fig.2.

FIG. 2.Îmbogățirea marcată cu fenilalanină a bazinului fără plasmă (A și ), albumina (C șiD) și fibrinogen (E și F) în post (stânga) și hrănit (dreapta) stări în controale sănătoase (linii punctate) și pacienți cu cancer care slăbesc (linii solide). Graficele prezente înseamnă ± SE.

Analize de proteine.

Concentrațiile de albumină serică au fost măsurate utilizând metoda verde bromocrezol pe un analizor automat Technicon RA-1000 (Technicon Instruments, Tarrytown, NY). Concentrațiile plasmatice de fibrinogen au fost măsurate prin evaluarea timpului de coagulare în prezența unei concentrații ridicate de trombină pe un coagulometru KC4A (Baxter Healthcare, Thetford, Marea Britanie).

Calcule.

Viteza de sinteză fracționată a albuminei și fibrinogenului a fost calculată prin împărțirea ratei de schimbare a îmbogățirii marcate cu fenilalanină a albuminei sau fibrinogenului la zona de sub curba îmbogățirii precursorului vs. timp (2).

Măsurarea mediatorului.

Probele pentru măsurarea concentrațiilor de insulină, cortizol și interleukină-6 au fost luate la 8 AM după un post peste noapte. Concentrațiile serice de interleukină-6 au fost măsurate prin ELISA (Quantikine, R&D Systems, Abingdon, Marea Britanie). Limita de detectare a fost de 0,5 pg/ml. Coeficientul de variație a fost de 2 teste sau testul Wilcoxon semnat-rang, după caz (Statview, Abacus Concepts, Berkeley, CA). A valoarea