Neutrofile umane la pacienții cu serologie pozitivă pentru boala Chagas Journal of Immunology și

AFILIATII

Autor corespondent (Adresă):

Articol asociat la Pubmed, Google Scholar

Leucocitele neutrofile polimorfonucleare (PMN) sunt celule cu imunitate înnăscută recunoscute într-un frotiu de sânge periferic din cauza nucleului lor multilobular particular. Nucleii în formă de inel sunt tipici la șobolani și șoareci, fiind descriși în unele patologii la om, precum și la subiecți sănătoși. Aceste neutrofile au fost găsite precoce la pacienții cu boala Chagas. Aici, acest studiu a fost realizat pentru a observa comportamentul și caracteristicile morfologice ale PMN ale culturii autologe și, pe de altă parte, distribuția sa sexuală la indivizi sănătoși (H) și cu serologie Chagas pozitivă (CH).

Materiale și metode: Cuantificarea celulelor inelare în frotiuri de probe de sânge uman heparinizat cu și fără serologie pozitivă pentru Chagas; testarea cu reacție citochimică pentru tehnica mieloperoxidazei (MPO); culturi de celule autologe; Test LPS pentru generarea de NET-uri, ADN vizualizat cu DAPI în microscopie de imunofluorescență; studiu ultrastructural cu microscopie electronică de transmisie (TEM).

Rezultate: Nu s-au găsit diferențe semnificative în frotiurile de sânge în numărul de neutrofile cu nuclee inelare între sexe în ambele grupuri (H și CH). Diferențe semnificative (p Introducere

Recent s-a raportat că neutrofilele participă la un rol cheie în mecanismele efectoare și de reglare ale răspunsurilor înnăscute și adaptative [1-3]. Neutrofilele se mai numesc polimorfonucleare (PMN) deoarece nucleul lor poate avea trei până la cinci lobi conectați prin punți subțiri de cromatină. S-a propus că compoziția proteică a anvelopei nucleare a neutrofilelor le permite „deformabilitatea” nucleului său și ar facilita migrarea celulelor activate din vase către locurile de infecție și, de asemenea, lobulația și formele din inel [4,5] . Existența PMN murin cu nucleu în formă de inel a fost cunoscută de mult timp, dar la neutrofilele umane nucleul inelar a fost observat mai devreme de Cabral în 1987 la pacienții chagasici și la persoanele sănătoase [6,7]. Nucleii în formă de inel din neutrofile erau compuse din trei sau patru zone lobate complet conectate între ele, unele dintre ele printr-o bandă subțire de ADN. S-a propus că numărul mare (aproximativ 15%) al acestor celule din sângele periferic sugerează că acestea pot fi un stadiu evolutiv normal în dezvoltarea PMN uman [6,7]. Mai mult, în unele patologii, cum ar fi mononucleoza infecțioasă, sindroamele mielodisplazice și altele, s-au observat nuclee în formă de inel și la neutrofilele umane [8-15].

PMN recunosc microorganismele prin diverși receptori și recunoașterea promovează fagocitoza și apoi distrugerea citotoxică [16]. Granulele au un conținut bogat foarte divers și un set de peptide degradative microbiostatice sau microbicide precum mieloperoxidaza (MPO) din granulele azuropile [17]. În condiții inflamatorii, PMN captează și ucid microbii prin capcane extracelulare (NET) compuse din proteine din cromatină, histonă și granule [18-21]. NET-urile au fost propuse ca punți pentru unirea răspunsurilor imune înnăscute și adaptive prin reducerea pragului de activare a celulelor T [22]. De asemenea, a descris generarea de NET cu stimuli inflamatori sterili din cristale de urat monosodic [23]. NET-urile au fost, de asemenea, implicate în tromboză, leziuni tisulare și autoimunitate [24-26]. Eliberarea NET-urilor poate fi „NEToză litică suicidă” atunci când derivă moartea PMN sau „NEToză vitală” în cazul PMN-urilor care sunt încă în viață [25,26]. Nu se găsește în literatura de specialitate care raportează formarea de NET în neutrofile cu nuclee în formă de inel.

Au fost descrise neutrofile care eliberează chemokine care atrag celulele T către locurile de inflamație și [27-29] citokine care influențează diferențierea și proliferarea crescând-o în unele cazuri și suprimând-o în altele [30,31]. Citokinele IL17A și IL17F secretate de celulele Th 17 induc o infiltrare rapidă și masivă a țesutului afectat de neutrofile [16]. În cazul infecțiilor parazitare, cum ar fi boala Chagas, rolul citokinelor familiale IL 17 este un domeniu de cercetare curentă [32].

Aici, acest studiu a fost realizat pentru a observa comportamentul și caracteristicile morfologice ale PMN ale culturii autologe și, pe de altă parte, distribuția sa sexuală la indivizi sănătoși (H) și cu serologie Chagas pozitivă (CH).

Probele de sânge uman heparinizat au fost colectate cu consimțământul etic conform procedurilor aprobate de comitetul de etică al Spitalului Național Clinicas R: 107/12, Minute Book I, Nº 110, 12/04/12. Eșantioane donate de Banca de Sânge, Institutul de Hematologie și Hemoterapie al Universității Naționale din Cordoba în anonimat, cu serologie negativă: Hudleson (Wiener), VDRL (Wiener), Chagas HAI (Wiener) Chagas EIE (Biomerieux), HBs EIE (Biomerieux) ), HBc (Biomerieux), HCV EIE (Murex), HIV Ac EIE (Biomerieux), HIV Ag EIE (Biomerieux), HTLV EIE (Murex). Persoanele considerate „sănătoase” (H) n = 30, 22 bărbați și 8 femele, cu vârsta cuprinsă între 20 și 63 de ani; și numai cei cu serologie pozitivă pentru Chagas (CH) n = 10 HAI (+) și EIE (+), 6 bărbați și 4 femele, interval de vârstă: 37-50.

Am efectuat frotii extinse sau de sânge integral, în toate cazurile și în probe de culturi autologe. Frotiurile au fost fixate în alcool etilic 96º, colorare de 15 minute: hematoxilină/eozină (H/E). Neutrofilele cu nucleul inelar au fost vizualizate prin microscopie optică și procentul de celule inelare într-o citopreparare dată a fost calculat numărând 100 de neutrofile. Rezultatele sunt exprimate ca medie ± deviație standard.