Mediul conceput statistic cu text complet gratuit pentru biomolecule relevă interacțiunile dintre metabolism

Schema pentru construirea vectorului de albumină serică umană în două copii (HSA) (regiunea roșie indică caseta de expresie HSA). Dimensiunile afișate nu sunt la scara reală.

text

(a) Analiza electroforezei pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă (SDS-PAGE) a proteinei extracelulare totale produse în condiții neoptimizate (Invitrogen standard), banda 1: scara de proteine. Supernatant de cultură (20 uL) din Clona # 52 (HSA cu o singură copie): Banda 2 și Clona # 14 (HSA cu două copii): Banda 3. Săgeata indică banda HSA. (b) Spectrul peptidic de desorbție/ionizare-timp-de-zbor (MALDI/TOF) asistat de matrice a benzii proteice din Clona # 14.

(a) Diagrama Pareto obținută din proiectul Plackett-Burman reprezentând ordinea și contribuția procentuală a fiecărui parametru la producția de HSA stabilă. Culoarea albastră și portocalie reprezintă contribuția negativă și respectiv pozitivă. (b) Efectele estimate ale variabilelor independente asupra producției de HSA de către Clona # 14. Roșu indică cel mai semnificativ, în timp ce albastru indică parametri nesemnificativi.

Grafice de suprafață de răspuns tridimensional și grafice de contur care indică efectul parametrilor individuali și interacțiunea dintre doi parametri. Efectul efectului combinat al temperaturii și metanolului (a), peptonei și temperaturii (b) și al metanolului și peptonei asupra producției de HSA (c). Corelația dintre răspunsul prezis și cel observat (Y ca HSA produs în mg/L) (d).

(a) Producția totală de proteine ​​extracelulare, ELISA, analiza densitometriei pe gel a HSA secretată în două copii ale Clonei nr. 10, 14 și în copia singură a Clonei # 52 în condiții de mediu optimizate (O) și neoptimizate (U). (b) Analiza SDS-PAGE a culturii filtrate din clonele menționate la litera (a). Lane1- Protein Ladder, Lanes 2, 4- Clone #s 10, 14, în condiții optimizate și Lanes 3, 5 pe mediu neoptimizat. Căile 6, 7 arată profilul proteic extracelular al Clonei # 52 în condiții optimizate și, respectiv, neoptimizate.

(a) Test de viabilitate celulară (MTT) cu linii celulare Vero. Variația de ori a proliferării a fost măsurată în absența oricărui ser fetal bovin (FBS) (▲), 5% FBS (■) sau 10% FBS (●), 5% FBS + 1 g/L HSA comercial (▼), 5 % FBS + HSA purificat 0,5 g/L (○) sau 5% FBS + HSA purificat 1 g/L ((). (b) Analiza SDS-PAGE a HSA purificată din Clona # 14 cultivată pe mediu optimizat. Banda 1: Marker, Banda 2: HSA comercială (4 µg), Banda 3: 4 µL fracție de cromatografie lichidă cu proteine ​​rapide (FPLC). (c) Semnificația statistică a diferenței a fost determinată de testul t asociat, luând 5% FBS ca referință standard pentru experimentele de proliferare celulară.