Leaner Mutant Mouse - o prezentare generală Subiecte ScienceDirect

Șoarecii mai slabi prezintă ataxie cerebelară, epilepsie de absență și diskinezie paroxistică și atrofie cerebelară severă, rezultată din degenerarea a aproximativ jumătate din granulele cerebeloase, celulele Purkinje și Golgi.

mouse

Termeni asociați:

  • Factor al necrozei tumorale alfa
  • Macrofage de țesut adipos
  • Fenotip
  • Microflora
  • Flora intestinului
  • Țesut adipos
  • Mouse Mutant
  • Rezistenta la insulina
  • Țesut adipos alb
  • Ob/Ob Mouse

Descărcați în format PDF

Despre această pagină

Modele de șoarece de distonie

b. Tulburare motorie (segment video 2)

Șoricel Leaner

Caracteristicile șoarecilor mai slabi heterozigoți

Rapoartele timpurii au sugerat că șoarecii mai slabi heterozigoți nu s-au putut distinge comportamental și morfologic de șoarecii de tip sălbatic, dar acum știm că nu este cazul. Studiile funcționale au arătat o reducere de ~ 30% a conductivității Ca 2+ în celulele Purkinje mai slabe heterozigoțe. Șoarecii heterozigoți mai slabi prezintă o afectare dependentă de vârstă pe testul rotarodului și a firului agățat și învățarea spațială și tulburările de memorie în labirintul de apă Morris. Disfuncția progresivă a reflexelor de evadare este observată și la șoarecii mai slabi heterozigoți și prezintă afectarea învățării motorii în reflexul vestibulo-ocular, sugerând că întreruperea subtilă a curenților Cav2.1 Ca 2+ este suficientă pentru a perturba funcția motorie.

Măsurarea răspunsurilor biologice cu microscopie automată

Ralph J. Garippa,. Achim Kirsch, în Methods in Enzymology, 2006

Pregătirea țesuturilor

Se folosesc trei creiere obeze induse de dietă (DIO) și trei șoareci slabi (C57Bl/6J) (Van Heek și colab., 1997). Folosind condiții libere de RNază, creierul este îndepărtat rapid, plasat într-un criomold, acoperit cu compus OCT (țesut înghețat Tissue Tek care încorporează mediul Sakura Finetek, Torrance, CA), înghețat în azot lichid și secționat în serie la 7-10 μm în un criostat. Secțiunile sunt montate pe diapozitive de microscop simple (neacoperite) și plasate imediat pe gheață uscată. Secțiunile sunt stocate la –70 °. Lamele sunt fixate în etanol 70%, clătite în apă distilată fără RNaază, colorate în acetat de crezil violet (pentru a identifica nucleele de interes) și deshidratate în etanol gradat (95% și absolut) cu un ultim 5 minute în xilen ca ultimul pas al procedurii. Lamele sunt apoi plasate într-un desicator pentru uscare. Diapozitivele complet uscate sunt utilizate pentru microscopie cu captare cu laser.

În conformitate cu protocolul producătorului, nucleele din următoarele regiuni hipotalamice sunt microdisecate pentru studii ulterioare: nucleu arcuat, girus dentat, hipotalamus dorsomedial, hipotalamus lateral, amigdala mediană, eminență mediană, nucleu paraventricular și hipotalamus ventromedial. Aceste regiuni hipotalamice sunt identificate ca fiind menționate în Franklin și Paxions (1997). După efectuarea microdisecției de captare cu laser, capacul (cu celulele captate) este plasat într-un tub de reactiv conținând 200 μl tampon de denaturare ARN (GITC) și 1,6 μl β-mercaptoetanol. Tubul este apoi inversat timp de 2 minute pentru a permite digerarea țesutului de pe capac. Reactivul care conține nuclee microdisecate este apoi gata pentru extracția ARN, izolarea, amplificarea etc.

Metode de biologie a țesutului adipos, partea B

Qinghui Xu,. David A. Bernlohr, în Methods in Enzymology, 2014

2.1.1 Pregătirea extractelor din țesut adipos alb epididim

Un gram de țesut adipos alb epididimal (EWAT) de la șoareci slabi sau obezi este incubat pe gheață în 1 ml tampon biotină hidrazidă pH 5,5 (100 mM acetat de sodiu; 20 mM NaCl; 0,1 mM EDTA, suplimentat cu inhibitori de protează; și 0,25 mM butilat hidroxitoluen (BHT)) și omogenizat timp de 30 s folosind un omogenizator electronic (PowerGen 125). Probele sunt agitate scurt și centrifugate la

1200 rpm timp de 10 minute la 4 ° C într-o microcentrifugă pentru a pluti tortul lipidic. Faza apoasă inferioară și orice peletă sunt transferate într-un nou tub de centrifugă și suplimentate cu SDS la o concentrație finală de 2%. Probele sunt apoi încălzite la 65 ° C timp de 5 minute și supuse ultracentrifugării la 100.000 × g timp de 1 oră la 4 ° C pentru a elimina reziduurile insolubile. Concentrația de proteină solubilizată cu detergent este determinată utilizând testul acidului bicinchoninic (Sigma-Aldrich, St Louis, MO).

Modele de șoarece de distonie

27.2.2.2.2 Tulburare motorie (după cum observă autorii)

Cacna1a-mutanți nuli prezintă o tulburare motorie similară cu cea a mutanților mai slabi juvenili, cu unele diferențe minore. În comparație cu mutanții mai slabi, mutanții Cacna1a-nuli sunt mult mai mici pe parcursul dezvoltării, au deficiențe motorii mai profunde și prezintă o activitate mult mai puțin spontană. Ei pier aproape uniform la vârsta de 3-4 săptămâni când trecerea de la alăptare la consumul de alimente solide are loc la șoareci normali. Cu hidratare parenterală zilnică și nutriție, un procent foarte mic de mutanți α1A-nuli supraviețuiesc până la maturitate. Mutanții adulți Cacna1a-null seamănă din nou cu șoarecii adulți mai slabi, dar au tulburări motorii mai severe, caracterizate prin akinezie, bradikinezie, mișcări rigide și tonus muscular crescut. Nu pot mânca și bea singuri, necesitând suplimentări parenterale zilnice pentru supraviețuire. Tulburarea motorie a eliminărilor Cacna1a, precum cea a șoarecilor mai slabi, este în concordanță cu distonia generalizată.

Gust dulce și Umami

Leptină endogenă, endocannabinoizi și obezitate

Administrarea exogenă de leptină sau endocannabinoizi inhibă sau îmbunătățește răspunsurile la gustul dulce al șoarecilor slabi. Cu toate acestea, contribuția leptinei endogene și a endocannabinoizilor la sensibilitatea la gustul dulce nu a fost elucidată în aceste studii. Prin administrarea unui antagonist al leptinei sau antagonistului CB1, s-a investigat efectul leptinei endogene și al endocanabinoizilor asupra gustului dulce (Niki și colab., 2015).