Intervenția cu flavonoide citrice inversează obezitatea și îmbunătățește sindromul metabolic și
Amy C. Burke
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Robarts Research Institute, Departamente de Biochimie † Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Brian G. Sutherland
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Dawn E. Telford
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Medicină, § Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Marisa R. Morrow
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Cynthia G. Sawyez
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Medicină, § Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Jane Y. Edwards
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Medicină, § Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Maria Drangova
Laboratoare de cercetare imagistică, ** Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Murray W. Huff
Medicină moleculară * Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Institutul de Cercetare Robarts, Departamentele de Biochimie † Universitatea din Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Medicină, § Universitatea Western Ontario, Londra, Ontario, Canada, N6A 5B7
Date asociate
Abstract
În studiul de față, arătăm, la șoareci Ldlr -/- cu obezitate indusă de dietă, dereglare metabolică și ateroscleroză în stadiu intermediar, că intervenția prin adăugarea de naringenină sau nobiletin la o dietă HFHC nu numai că a împiedicat obezitatea continuă și deteriorarea simptomelor sindromului metabolic, dar și masă redusă semnificativ a țesutului adipos, homeostazie normalizată a glucozei și atenuare atât a hiperlipidemiei, cât și a steatozei hepatice. Corectarea parametrilor metabolici a fost însoțită de o reducere a monocitelor sanguine circulante. Colectiv, aceste îmbunătățiri metabolice nu au rezolvat dimensiunea leziunilor aterosclerotice ale sinusului aortic, dar plăcile la șoarecii tratați cu flavonoide au fost caracterizate prin conținut redus de macrofage și colesterol, în concordanță cu regresia leziunii (21, 22).
MATERIALE ȘI METODE
Animale și diete
Colectarea sângelui și a țesuturilor
Cuști metabolice
Tomografie micro-computerizată
Teste de toleranță la glucoză și insulină
Un test de toleranță la glucoză a fost efectuat după 6 ore de repaus prin injecție intraperitoneală cu 15% glucoză în 0,9% NaCI (1 g/kg greutate corporală) (15). Probele de sânge pentru măsurarea glucozei (sistemul de monitorizare a glicemiei conturului Bayer; Bayer Healthcare) au fost prelevate până la 120 de minute după injectare. Un test de toleranță la insulină a fost efectuat după o repaus de 5 ore prin injecție intraperitoneală cu insulină (0,6 UI/kg greutate corporală; Novolin GE Toronto, Novo Nordisk, Cooksville, ON, Canada) (15). Probele de sânge pentru măsurarea glucozei au fost obținute până la 60 de minute după injectare. Toleranța la glucoză și insulină a fost calculată ca o modificare procentuală a glicemiei față de valoarea inițială.
Lipidele tisulare
Lipidele din ficat, cvadriceps, gastrocnemii și solei și aortele de lungime întreagă disecate fără grăsime și țesut conjunctiv au fost extrase folosind metoda Folch din probe stocate la -80 ° C, așa cum s-a descris anterior (14, 25). [Olesterul de colesteril-1,2-3 H (N)] colesteril (PerkinElmer, Guelph, Canada; # NET746L) a fost adăugat pentru a evalua recuperarea. Un standard combinat de 200 μg/ml trioleină și 200 μg/ml colesterol standard a fost preparat în izopropanol și alicotat pentru curbele standard (0-20 μg). Probele și etalonurile au fost uscate sub N2 și s-a adăugat o soluție 1% Triton X-100 în cloroform și s-au lăsat la temperatura camerei timp de 1 oră pentru a se solubiliza. Probele și etaloanele au fost uscate sub N2, urmate de adăugarea de apă deionizată și incubare la 37 ° C timp de 15 min. Probele au fost analizate folosind reactivi enzimatici pentru trigliceride (TG) (Roche Diagnostics, Laval, Canada; TGs/glicerol acoperit, # 11877771 216), colesterol total (TC) (WAKO Diagnostics, Richmond, VA; colesterol E (metoda CHOD-DAOS), # 439-17501) și colesterolul liber (WAKO Diagnostics; metoda colesterolului liber (COD-DAOS), # 435-35801). Esterul colesteril (CE) a fost determinat ca diferența dintre TC și colesterolul liber.
Măsurători plasmatice
Plasma TG și TC au fost măsurate pe un autoanalizator Cobas Mira S (Roche Diagnostics) folosind calibratoare și controale de la Roche Diagnostics (15). S-au utilizat reactivi enzimatici pentru TG (Roche Diagnostics; TGs/glicerol înlăturat, # 11877771 216) și colesterol (Roche Diagnostics; Cholesterol CHOD-PAP, # 11491458-216). Plasma EDTA proaspătă (50 μl) a fost separată prin LC cu proteină rapidă (FPLC) folosind un purificator AKTA și o coloană Superose 6 (14). S-a folosit un debit constant de 0,4 ml/min pentru a colecta fracțiuni de 500 pl. O alicotă din fiecare fracție a fost utilizată pentru măsurarea enzimatică a colesterolului și a TG-urilor atât în probe, cât și în standarde pe o placă de microtitrare cu reactivi enzimatici adăugați [TG: Roche Diagnostics, TGs/glicerol blanked, # 11877771 216 și TC: WAKO Diagnostics, Colesterol E:( Metoda CHOD-DAOS), # 439-17501]. Glicemia a fost măsurată în sângele integral utilizând sistemul de monitorizare a glicemiei conturului Bayer (Bayer Healthcare, Etobicoke, Canada) (15). Insulina plasmatică (ALPCO Diagnostics, Salem, NH; ELISA # 80-INSMSU-E01 cu ultrasunete de șoarece) a fost determinată în probe de plasmă EDTA, depozitate la -80 ° C, printr-un ELISA specific șoarecelui. Evaluarea modelului de homeostazie a rezistenței la insulină (HOMA-IR) a fost calculată folosind următoarea formulă, așa cum a fost descris anterior pentru șoareci: HOMA-IR = 26 × nivelul de insulină în post (ng/ml) × nivelul de glucoză în post (mg/dl)/405 26 ).
Beta oxidarea ficatului
Pentru oxidarea acizilor grași hepatici, ficatul proaspăt (250 mg) a fost omogenizat în tampon fosfat 0,1 M (pH 7,2) conținând 0,25 M zaharoză, 1 mM EDTA, 1 mM ditiotreitol și 10 μl/ml inhibitor de protează (Sigma-Aldrich; # P8340). Omogenatele au fost centrifugate la 1.000 g la 4 ° C timp de 10 min. Douăzeci de microlitri de supernatant au fost incubați timp de 30 min la 37 ° C cu agitare constantă în tampon fosfat 0,1 M (pH 7,2) conținând 150 mM KCl, 10 mM HEPES, 5 mM Tris malonat, 10 mM MgCl2, 1 mM carnitină, 5 mM ATP și 2 μCi de [9,10-3 H (N)] acid palmitic (PerkinElmer; # NET043001MC) per 50 μM acid palmitic nemarcat complexat cu 0,15% BSA fără acizi grași. Reacțiile au fost oprite cu 200 μl de acid percloric 0,6 N și acizi grași nereacționați extrasați cu hexani. Cei 3 H2O în faza apoasă au fost măsurați prin numărarea scintilației lichide (15, 27).