Identificarea și disecarea diverselor protocoluri de depozite adipoase de șoarece
rezumat
Adipocitele există în depozite discrete și au roluri diverse în cadrul micro-mediului lor unic. Deoarece diferențele regionale în caracterul și funcția adipocitelor sunt descoperite, identificarea standardizată și izolarea depozitelor sunt cruciale pentru avansarea câmpului. Aici, vă prezentăm un protocol detaliat pentru excizia diferitelor depozite adipoase de șoarece.
Abstract
Țesuturile adipoase sunt organe complexe cu o gamă largă de funcții, inclusiv stocarea și mobilizarea energiei ca răspuns la nevoile locale și globale, decuplarea metabolismului pentru a genera căldură și secreția de adipokine pentru a regla homeostazia întregului corp și răspunsurile imune. Cercetările emergente identifică diferențe regionale importante în profilurile de dezvoltare, moleculare și funcționale ale adipocitelor situate în depozite discrete din tot corpul. Diferitele proprietăți ale depozitelor sunt relevante din punct de vedere medical, deoarece bolile metabolice demonstrează adesea efecte specifice depozitului. Acest protocol va oferi investigatorilor un atlas anatomic detaliat și un ghid de disecție pentru identificarea reproductibilă și precisă și excizia diverselor țesuturi adipoase de șoarece. Disecția standardizată a depozitelor adipoase discrete va permite comparații detaliate ale caracteristicilor lor moleculare și metabolice și contribuțiile la condițiile patologice locale și sistemice în diferite condiții nutriționale și de mediu.
Introducere
În plus față de localizarea lor în marile depozite WAT și BAT, adipocitele există în nișe discrete din tot corpul 4, unde pot îndeplini funcții specializate în cadrul micro-mediului lor respectiv. De exemplu, țesutul adipos al măduvei osoase (BMAT) servește ca rezervor de lipide, este o sursă majoră de adiponectină circulantă și interacționează îndeaproape cu osteoblastele, osteoclastele și celulele hematopoietice 10, 11. Adipocitele cutanate contribuie la procesele pe scară largă, inclusiv vindecarea rănilor, răspunsul imun, termoreglarea și creșterea foliculilor de păr 12, 13. În plus, adipocitele epicardice pot produce mai multe adipokine și chemokine care exercită efecte locale și sistemice asupra dezvoltării și progresiei bolii coronariene 14. Extinderea WAT inter/intramusculară a fost corelată pozitiv cu adipozitatea crescută, rezistența sistemică la insulină și scăderea forței și mobilității musculare 15. În plus, adipocitele poplitee servesc ca rezervor de lipide pentru expansiunea limfatică în timpul infecției 16. În timp ce rolurile specifice ale diferitelor depozite articulare sunt în general necunoscute, depozitul Hoffa (infrapatelar) din interiorul genunchiului este acum considerat a contribui la patologii, incluzând durerea anterioară a genunchiului și osteoartrita 17 .
În timp ce diferențele regionale în caracterul și funcția adipocitelor sunt în curs de studiu intens, domeniul este în prezent limitat de lipsa unui protocol standardizat pentru identificarea și disecția diverselor depozite de șoareci. Metodele publicate anterior au descris de obicei izolarea unuia sau a două depozite specifice și nu au nivelul de detaliu necesar pentru excizia uniformă 18, 19. Protocolul descris în acest manuscris oferă un ghid cuprinzător pentru locațiile anatomice specifice și pașii de izolare a multor depozite diferite de adipos de șoarece. Deși depozitele WAT sunt centrul principal al acestui manuscris, excizia BAT interscapulară este, de asemenea, descrisă în detaliu. Țesuturile adipoase excizate utilizând acest protocol pot fi utilizate pentru o mare varietate de obiective experimentale, inclusiv studii de explant, histologie și analize ale expresiei genelor.
Scopul acestui manuscris este de a oferi anchetatorilor un protocol detaliat pentru a identifica în mod clar și precis și a izola atât depozitele proeminente, cât și cele mai puțin studiate, de adipos de șoarece (figura 1). Această resursă va facilita o investigație mai completă a caracteristicilor de dezvoltare, moleculare și funcționale ale adipocitelor în diverse nișe.
Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs.
Protocol
Toate procedurile la animale sunt efectuate cu aprobarea Comitetului instituțional pentru îngrijirea și utilizarea animalelor (IACUC) din cadrul Universității din Michigan.
NOTĂ: În scopul acestui protocol video, se folosesc șoareci C57BL/6J de 4-6 luni.