Este posibil un conținut de chisturi endometriotice, în special concentrația ridicată de fier liber

Abstract

Scop: Se știe că chisturile endometriotice se transformă în cancere ovariene, cum ar fi carcinoamele cu celule clare și cele endometrioide. Am emis ipoteza că un mediu bogat în fier produs de repetarea hemoragiei în chisturile endometriotice în timpul perioadei de reproducere poate juca un rol crucial în carcinogeneza chisturilor prin stresul oxidativ persistent indus de fier.

Proiectare experimentală: Conținutul chisturilor ovariene umane, incluzând 21 de chisturi endometriotice, 4 carcinoame cu celule clare și 11 chisturi nonendometriotice, au fost analizate pentru concentrații de fier „catalitic” liber, lactoză dehidrogenază, potențial antioxidant, peroxid lipidic și 8-hidroxi-2′- deoxiguanozină (8-OHdG). Depunerea de fier și nivelurile de 8-OHdG au fost, de asemenea, analizate histologic. Speciile reactive de oxigen și mutagenitatea conținutului din chistul endometriotic au fost determinate in vitro.

Rezultate: Concentrația fierului liber în chisturile endometriotice (100,9 mmol/L) a fost semnificativ mai mare decât în chisturile nonendometriotice (0,075 mmol/L; P 10 ani) ale endometriozei ovariene (6). Endometrioza patologic atipică, care se caracterizează prin glande endometriotice cu atipie citologică și/sau arhitecturală (7), a fost raportată la 22,6% (7 din 31) endometrioide și 36,0% (18 din 50) adenocarcinoame cu celule clare ale ovarului, întrucât în doar 1,7% (4 din 255) din cazurile de endometrioză ovariană ordinală (8). Cancerul ovarian apărut în chistul endometriotic arată incidența predominantă a tipurilor de celule clare și endometrioide (> 40%), în timp ce adenocarcinomul seros și mucinos este predominant în cancerele ovariene care nu au legătură cu endometrioza (8), sugerând diferitele mecanisme de carcinogeneză între cancerul din chistul endometriotic ovarian și cancerul ovarian în general.

Caracteristicile bimoleculare ale cancerelor ovariene apărute în chistul endometriotic au fost, de asemenea, studiate pe larg, cum ar fi mutația genelor K-RAS și PTEN (9), modificarea BCL-2 și P53 (10), scăderea expresiei hMLH și PTEN (11) ).), și factor crescut de creștere endotelială vasculară (12). Se raportează, de asemenea, pierderea heterozigozității în regiunea oncosupresoare în endometrioză (7, 13) și pierderea obișnuită a heterozigoității în endometrioza și carcinomul concomitent (14). S-a raportat că modelul genetic al șoarecilor de endometrioză peritoneală se dezvoltă prin inducerea K-ras oncogenă și a adenocarcinomului ovarian endometrioid prin ștergerea ulterioară a Pten (15). Prin urmare, au fost identificate mai multe mecanisme moleculare implicate în carcinogeneza endometriozei. Cu toate acestea, mecanismul precis care poate explica unicitatea carcinogenezei în chistul endometriotic rămâne încă de elucidat.

Hemoragia repetată în chist în timpul ciclului menstrual și acumularea de componente sanguine în chist sunt caracterizate în chistul endometriotic. În acest studiu, ne-am concentrat asupra conținutului chisturilor endometriotice, în special a concentrației ridicate de fier liber, ca cauză a carcinogenezei chistului. Sub ipoteza că fluidul chisturilor endometriotice care conțin fier contribuie la modificări genetice prin stres oxidativ (16-18) și poate fi una dintre cauzele majore ale transformării maligne a chisturilor endometriotice, am examinat concentrația de fier din chistul endometriotic și alte chisturi. De asemenea, am examinat produsele stresului oxidativ din conținutul chisturilor. S-au făcut experimente in vitro dacă conținutul chisturilor endometriotice poate induce sau nu leziuni ale ADN-ului.

Materiale și metode

Mostre. Probele au fost obținute de la pacienți cu chisturi ovariene tratate chirurgical la Spitalul Universitar din Kyoto cu forme scrise de consimțământ. Conținutul chisturilor ovariene a fost depozitat la -80 ° C imediat după operație sau centrifugat la 3.000 sau 4.000 rpm timp de 10 minute; supernatanții au fost apoi depozitați la -80 ° C.

Cultură de celule. Celulele epiteliale ale suprafeței ovariene imortalizate stabilite de noi au fost menținute așa cum s-a descris anterior (19, 20). Celule glandulare endometriale imortalizate umane, oferite cu amabilitate de Dr. S. Kyo (Universitatea Kanazawa, Kanazawa, Japonia; ref. 21) și linia celulară de fibroblast pulmonar de hamster chinezesc (celule V79) achiziționate de la RIKEN BioResource Center Bank Cell, au fost cultivate în DMEM (Nikken Bio Medical Laboratory) conținând penicilină-streptomicină 100 unități/ml penicilină, 100 μg/ml streptomicină; Nacalai Tesque) și 10% ser fetal bovin (v/v; BioWest).

Detectarea fierului liber (ioni de fier) în lichidul chistic. Amestecul de reacție a fost adăugat în tuburi de unică folosință din plastic, fără ioni, în următoarea ordine: 0,5 ml de timus de vițel ADN sare de sodiu tip I (1 mg/ml; Sigma-Aldrich), 0,05 ml de clorhidrat de bleomicină (1 mg/ml; furnizate de Nippon Kayaku), 0,1 mL MgCl2 (50 mmol/L; Nacalai Tesque), 0,1 mL de probă, 0,05 mL HCl (10 mmol/L; Nacalai Tesque), 0,1 mL de apă ultrapură și 0,1 mL de 0,14% ascorbic soluție acidă (g/v; Nacalai Tesque). S-a preparat o curbă standard folosind Fe (NO3) 3 dizolvat în apă ultrapură. Probele de lichide chistice endometriotice au fost dizolvate în apă ultrapură de la 1 la 40.000 de ori pentru a obține concentrații de fier libere între 0 și 250 μmol/L. Conținutul tubului a fost amestecat înainte și după adăugarea de ascorbat și apoi incubat la 37 ° C timp de 2 ore cu agitare. Apoi, s-a adăugat 1 ml EDTA 0,1 mol/L (Dojindo) pentru a opri reacția, iar conținutul tubului a fost amestecat cu 1 ml acid tiobarbituric 1% (g/v; Merck) în NaOH 50 mmol/L (Nacalai Tesque ).) și 1 ml de HCI 25% (v/v; Nacalai Tesque). Soluțiile au fost încălzite la 100 ° C timp de 15 min și răcite, iar cromogenul a fost măsurat prin absorbanță la 532 nm.