Efecte hepatoprotectoare ale extractului Orthosiphon stamineus asupra cirozei hepatice induse de tioacetamidă
1 Departamentul de Medicină Moleculară, Facultatea de Medicină, Universitatea din Malaya, Kuala Lumpur 50603, Malaezia
Abstract
1. Introducere
2. Materiale și metode
2.1. Materiale vegetale și produse chimice
O. stamineus frunzele plantelor au fost obținute de la Ethno Resource Sdn Bhd. Planta a fost identificată, iar specimenul de voucher a fost păstrat în laboratorul nostru pentru referințe viitoare. Frunzele uscate și pudrate (100 gm) au fost extrase cu 900 ml de etanol 95% timp de 48 de ore, iar extractul de etanol a fost filtrat și evaporat sub presiune scăzută utilizând un evaporator rotativ de tip Buchi pentru a da extractul uscat brut. Randamentul procentual al extractelor de etanol sa dovedit a fi de 8,1% (g/g). Extractul uscat a fost apoi dizolvat în Tween 20 (10% g/v) și administrat oral șobolanilor în concentrații de 100 și 200 mg/kg greutate corporală.
Thioacetamida din (Sigma-Aldrich, Elveția) și toate celelalte substanțe chimice utilizate au fost de calitate analitică și au fost achiziționate mai ales de la Sigma-Aldrich și Fisher. Produsul chimic a fost dizolvat în apă distilată sterilă și injectat intraperitoneal șobolanilor în concentrații de 200 mg/kg greutate corporală [18]. Silimarina (Laboratorul Internațional, SUA) ca medicament standard și a fost dizolvată în Tween 20 (10% g/v) și administrată oral șobolanilor în concentrații de 50 mg/kg greutate corporală [19].
2.2. Determinarea totală fenolică și flavonoidă
O. stamineus extractul a fost evaluat pentru conținutul lor fenolic total utilizând reactiv Folin-Ciocalteu și a fost calculat ca echivalenți de acid galic în mg (GAE)/g de extract conform metodei colorimetrice Folin-Denis [20]. Cu toate acestea, flavonoidele totale au fost determinate utilizând metoda colorimetrică a clorurii de aluminiu și exprimate ca echivalenți de quercetină în mg (QE)/g de extract, așa cum este descris de Dowd [21]. Ambele teste au fost efectuate în trei exemplare.
2.3. Animale
Bărbat adult sănătos Sprague Dawley Șobolani (SD) cu o greutate de 200-250 gm au fost obținuți de la Animal House Unit, Facultatea de Medicină, Universitatea din Malaya, Malaezia. Au fost ținute în cuști cu fund de sârmă la temperatura de 25 ± 3 ° C, 50-60% umiditate și un ciclu de lumină-întuneric de 12 ore timp de cel puțin o săptămână înainte de experiment. Acestea au fost menținute în condiții standard de cazare și acces gratuit la dieta standard și apă ad libitum în timpul experimentului. Protocolul experimental a fost aprobat de Comitetul de etică a animalelor; cu un etic nr. (PM 28/08/2009/MAA (R). Pe parcursul experimentelor au fost aplicate toate criteriile de îngrijire a animalelor pregătite de Academia Națională de Științe și prezentate în „Ghidul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator”.
2.4. Proiectare experimentală
Animalele au fost împărțite aleatoriu în cinci grupuri de câte opt șobolani fiecare și au fost tratați după cum urmează.
Grupa 1
10% Tween 20 (5 ml/kg, po) zilnic timp de 2 luni + apă distilată sterilă (1 ml/kg, i.p) de trei ori pe săptămână timp de 2 luni (grup de control normal).
Grupa 2
10% Tween 20 (5 ml/kg, po) zilnic timp de 2 luni + TAA (200 mg/kg, i.p) de trei ori pe săptămână timp de 2 luni (grup hepatotoxic cu control pozitiv).
Grupa 3
Silimarina (50 mg/kg, po) zilnic timp de 2 luni + TAA (200 mg/kg, i.p) de trei ori pe săptămână timp de 2 luni (bine cunoscut grup de medicamente standard hepatoprotectoare).
Grupa 4O. stamineus (200 mg/kg, po) zilnic timp de 2 luni + TAA (200 mg/kg, i.p) de trei ori pe săptămână timp de 2 luni (grup de tratament, doză mare).