Baicalin atenuează obezitatea indusă de dietă bogată în grăsimi și disfuncția hepatică Răspunsul la doză și potențialul
Departamentul de Farmacologie, Facultatea de Medicină, Universitatea Sud-Est
87 Dingjiaqiao Road, Nanjing, Jiangsu, P. R. China, 210009
Tel. + 86-25-83272525, E-mail [email protected]
Articole similare pentru „”
- Stare de nervozitate
Abstract
Introducere
Excesul de greutate și obezitatea au devenit o epidemie și afectează peste 2,1 miliarde de persoane din întreaga lume [1]. Dintre factorii predispozanți la dezvoltarea fiziopatologică a obezității, aportul excesiv de energie din dietă este cea mai frecventă cauză [2]. Când aportul de energie depășește cheltuielile de energie, acumularea excesivă de lipide celulare are loc nu numai în țesutul adipos, ci și în țesuturile ectopice, cum ar fi ficatul [3,4]. Depunerea excesivă de lipide ectopice perturbă adesea funcția fiziologică celulară normală, care, dacă este permisă, procedează necontrolat va duce la progresia patologică [3,4]. Odată cu progresul obezității, creșterea lipogenezei hepatice și a acizilor grași serici neesterificați duc la acumularea excesivă de lipide hepatice, ceea ce duce la ficat gras (cunoscut și sub numele de steatoză hepatică), afectarea funcției hepatice și, în cele din urmă, insuficiență hepatică [5,6]. S-a estimat că 28,8 milioane sau aproximativ 19% din S.U.A. adulții au afecțiuni hepatice grase [7]. Deoarece ficatul este un organ vital care participă la reglarea digestiei, metabolismul nutrienților și al multor medicamente, detoxifiere și homeostazie din sânge (cum ar fi coltting), dezvoltarea agenților anti-obezitate cu proprietăți hepatoprotectoare a devenit de un interes semnificativ atât pentru cercetătorii biomedici, cât și pentru clinicieni.
Materiale și metode
Materiale
Baicalin (conținut de HPLC 98%) a fost achiziționat de la Guanghan Bio-Tech (Sichuan, China). Anticorpii primari împotriva fosfo-AMPKα (Thr172), AMPKα, fosfo-ACC (Ser79), ACC, fosfor-CaMKKβ (Ser511), GAPDH, scări de proteine biotinilate și anticorpi secundari marcați cu peroxidază de hrean au fost achiziționați de la Cell Signaling Technology (Beverly, STATELE UNITE ALE AMERICII). Anticorpul CaMKKβ provine de la Proteintech Group (Chicago, IL, SUA). Membranele de difluorură de poliviniliden și reactivi de detectare a Western blot de chemiluminescență îmbunătățită (ECL) au fost achiziționați de la Millipore (Billerica, MA, SUA). Setul de colorare roșu ulei, kitul de hematoxilină și eozină, tamponul de liză RIPA și tamponul de încărcare a probei 5X au fost procurate de la Nanjing sunshine Biotechnology (Nanjing, China). Carboximetilceluloza sodică provine din reactivul chimic Sinopharm (Sanghai, China). Trusa de testare BCA a fost de la Pierce Biotechnology (Rockford, IL, SUA).
Studiu pe animale
Analize biochimice serice
Nivelurile serice ale trigliceridelor, colesterolului total, cantitatea de colesterol conținută în lipoproteinele cu densitate mică sau înaltă (LDL-c și respectiv HDL-c), aspartat transaminază (AST) și alanină transaminază (ALT) au fost măsurate folosind UniCel DxC 800 de sisteme clinice sincronizate (Beckman Coulter, Pasadena, CA, SUA) și truse de diagnostic clinic comercial (Shanghai Fuxing Changzheng Medical Co. Ltd.; Shanghai, China).
Colorarea hematoxilinei și eozinei și scorul steatozei hepatice
Țesuturile congelate din ficat au fost secționate (5 μm) folosind un microtom (Leica Microsystems; Buffalo Grove, IL, SUA). Colorarea hematoxilinei și a eozinei a fost efectuată conform protocolului producătorului. Steatoza hepatică a fost evaluată pe baza sistemului de notare dezvoltat de Comitetul de patologie al Rețelei de cercetare clinică NASH [19] și de un patolog certificat de consiliu.
Roșu de ulei O colorare
Secțiunile hepatice au fost colorate cu un kit de colorare roșu ulei și contracolorate cu hematoxilină pentru a detecta acumularea de lipide hepatice în conformitate cu protocoalele producătorului. Imaginile au fost capturate într-un mod orbit folosind un microscop cu lumină Olympus BX51 (Olympus America, Melville, NY, SUA) la mărire de 400 ×.
Analiza Western blot
Proteinele hepatice au fost extrase dintr-o proporție de țesut pulverizat folosind tampon de liza RIPA. Concentrația de proteine a fost determinată folosind un kit de testare BCA. Proteinele au fost fierte în tamponul de încărcare a probei 5X timp de 5 minute pentru teste de imunoblotare [20]. Cantitatea egală de proteine hepatice din fiecare probă a fost rezolvată cu 8% SDS-PAGE, transferată pe membranele de difluorură de poliviniliden și supusă procedurii standard de imunoblotare, inclusiv incubarea cu anticorp primar peste noapte la 4 ° C. Imunocomplexele au fost vizualizate prin chemiluminescență îmbunătățită și scanate pentru analize ulterioare de densitometrie.
Analize statistice
Rezultatele sunt prezentate ca medie ± SEM. Efectele dietei bogate în grăsimi și ale tratamentului cu baicalină au fost analizate prin analiza unică a varianței (ANOVA). Au fost efectuate comparații multiple folosind testul Tukey pentru a determina diferențele dintre grupuri. Nivelul de semnificație acceptat a a priori a fost ≤ 0,05.
Rezultate
Baicalin atenuează obezitatea și greutatea ficatului induse de diete bogate în grăsimi
FIG. 1
Baicalin atenuează obezitatea și greutatea ficatului induse de diete bogate în grăsimi. A. Greutatea corporală a șoarecilor masculi C57BL/6J hrăniți cu dietă normală servind drept control slab (LC), dietă bogată în grăsimi (HF) sau dietă bogată în grăsimi, împreună cu administrarea orală a trei concentrații diferite de baicalină (100, 200 sau 400 mg baicalină/kg greutate corporală/zi timp de 14 săptămâni, respectiv). Intervenția Baicalin a fost inițiată la vârsta de 25 de săptămâni (după 16 săptămâni de tratament cu diete bogate în grăsimi). Șoarecilor LC și HF li s-a administrat zilnic o cantitate egală de soluție sodică de carboximetilceluloză de sodiu (300 pl) ca șoarecii tratați cu baicalină. B. Raportul dintre tamponul de grăsime epididimal și greutatea corporală (BW). C. Raportul dintre ficat și greutatea corporală. D. Imagini reprezentative ale cavității abdominale, tamponului de grăsime și ficatului. abc: Grupurile fără aceeași literă sunt semnificativ diferite (P ≤ 0,05).