Articolul complet Rezerva ovariană diminuată indusă de stresul cronic imprevizibil la șoarecii C57BL6

Rezerva cronică de stres imprevizibil și ovariană la șoareci

  • Articol complet
  • Cifre și date
  • Referințe
  • Suplimentar
  • Citații
  • Valori
  • Licențierea
  • Reimprimări și permisiuni
  • PDF

Abstract

（的 心理 压力 被 认为 是 卵巢 储备 减少 OR DOR） 的 重要 原因。 缺乏, 心理 心理 压力 诱发 的 DOR 模型 模型。 我们 旨在 周 8 慢性 慢性 不可 预测 压力 （US CUS 模式 对 57 C57BL/6 小鼠 卵巢储备 US 生殖 生殖 分泌 的 影响。 我们 在, 在 CUS 暴露 8 后 后, CUS 模型 小鼠 的 原始 卵泡 、 前 卵泡 以及 黄 体 的 数量 显 著 减少。 与 对照 组 模型, 模型 小鼠 的 血清 卵泡 刺激素 、 、 更高 酮 水平 更高, 黄 黄 体 生成 素 、 雌二醇 、 雄 激素 和 抗 苗 勒 管 激素 水平 更低。 此外, 我们 发现 FSH 受体 和 AMH 蛋白 在 模型 小鼠 卵巢 中 被 下调。 尽管 两组 之 US 产仔 数 未 发现 明显 但, 但 暴露 于 CUS 6 后 后, 组 组 的 卵巢 储备 量 显 著 降低 这些 结果 结果 证实 以下 假设 ： 我们 采用 周 8 周 CUS 可以 可以 诱导 C57BL/6 小鼠 的 DOR 模型, 可能 可能 对 卵巢 储备 造成 长期 不利 影响。 因此, 我们 的 结果 表明 我们 已经 成功 建立 了 心理 应激 诱导 的 DOR 动物 模型, 可 用于 进一步 研究。

ovariană

Rezumatele chinezești sunt traduse de Prof. Dr. Xiangyan Ruan și echipa ei: Spitalul de obstetrică și ginecologie din Beijing, Universitatea Medicală Capitală, Beijing 100026, China.

Introducere

Rezerva ovariană diminuată (DOR) este definită ca o stare intermediară între fiziologia reproductivă normală și insuficiența ovariană prematură și se caracterizează printr-o scădere a numărului sau a calității stocului de ovocite disponibile. Biomarkerii DOR utilizați în practica clinică includ, dar nu se limitează la AMH mai scăzut, FSH mai mare, FSH/LH și număr de foliculi antrali (AFC) [1]. Literatura existentă indică faptul că factorii psihogeni au apărut ca unul dintre elementele majore asociate cu DOR și cu reproducerea afectată a femeilor [2-5]. Cu toate acestea, din cauza lipsei unui model animal adecvat care să poarte simptomele similare ale DOR, mecanismul cauzalității este încă neclar.

Stresul cronic imprevizibil (CUS) este una dintre paradigmele cele mai frecvent utilizate pentru a induce un comportament anxios în modele animale și pentru a studia bolile asociate stresului cronic. CUS constă în expunerea continuă a animalelor la situații stresante sau stimuli stresanți care imită stresul vieții de zi cu zi. Acest model este aplicat pe scară largă studiului proceselor neurobiologice care mediază efectele stresului cronic [6]. Există doar câteva studii care utilizează acest tip de model pentru a studia modificările biologiei ovariene după expunerea la stres [7-9]. Din câte știm, niciunul dintre aceste studii nu a indus un fenotip tipic DOR sau a explorat atât rezerva foliculului ovarian, cât și modificările hormonilor serici asociate cu DOR.

Prezentul studiu a fost întreprins pentru a dezvălui o schimbare a fenotipului DOR la ​​șoarecii C57BL/6 folosind o paradigmă de stres cronică imprevizibilă. De asemenea, au fost prezentate o serie de modificări ale hormonilor de reproducere și factori legați de dezvoltarea foliculului pentru a valida deteriorarea cronică a stresului asupra funcțiilor biologice ovariene. O scurtă sondă a efectului pe termen lung al CUS asupra morfologiei ovariene a fost efectuată prin experimente de împerechere cu o analiză histologică ovariană.

Materiale și metode

Animale

Șoarecii C57BL/6 de sex feminin supuși paradigmei stresului au avut vârsta cuprinsă între 6 și 8 săptămâni. Treizeci de șoareci au fost împărțiți în mod aleator și în mod egal în grupul model și grupul martor. Experimentul de paradigmă CUS a fost repetat de trei ori. Șoarecii masculi de cincisprezece săptămâni au fost împerecheați cu șoareci femele pentru a evalua rata sarcinii. Experimentul de împerechere a fost repetat de două ori. Toate procedurile experimentale pe animale au fost aprobate de Comitetul Etic Experimental Animal de la Universitatea Fudan. Greutatea corporală a șoarecilor din fiecare grup a fost măsurată în fiecare săptămână. Indicele greutății ovarului a fost calculat folosind următoarea formulă: indicele greutății ovarului = greutatea ovariană/greutatea corporală.

Stres cronic imprevizibil (CUS)

Procedura CUS s-a bazat pe rapoartele anterioare cu câteva modificări [10]. Au fost administrați doi factori de stres la fiecare model de șoarece timp de opt săptămâni. Pentru a evita toleranța, puterea anumitor factori de stres a fost crescută în fiecare săptămână. În mod specific, factorii de stres au fost după cum urmează: stres de reținere, suspensie la coadă, înot epuizant, scuturare orbitală, înclinare a cuștii la 45 °, așternut umed, cușcă goală, stres de zgomot, lumină flash, izolare socială, aglomerare socială, schimbare lumină-întuneric, lipsă de hrană, și privarea de apă. Stresorii au fost programați aleatoriu pe o perioadă de o săptămână și au fost repetați pe parcursul celor 8 săptămâni. Privarea de hrană sau apă și așternutul umed au fost aplicate evitând în a șaptea zi a fiecărei săptămâni pentru a preveni abaterea greutății corporale. Șoarecii martor nestresați au fost adăpostiți în grupuri fără intervenție. Un exemplu al programului CUS săptămânal este furnizat în Tabelul 1 din Materialul suplimentar. Șoarecii au fost sacrificați după CUS de 8 săptămâni. Prelevarea probelor a fost efectuată între orele 8-10, când corticosteronul seric (CORT) a fost la nivelul de bază al fluctuației zilnice.

Ciclism estru

Frotiurile vaginale au fost luate în fiecare dimineață timp de 3 săptămâni înainte de sacrificiu pentru a evalua ciclul estru. Experimentul a fost repetat de trei ori cu fiecare replică conținând 6 șoareci în fiecare grup. Etapa ciclului estru a fost definită printr-o analiză microscopică ușoară a tipului celular predominant în probele de frotiu vaginal [11].

Testul hormonului seric

Hormonul seric a fost măsurat prin test imunosorbent legat de enzime (ELISA) urmând instrucțiunile producătorului. Kituri ELISA comerciale au fost utilizate pentru a evalua CORT, LH, FSH, hormonul anti-Müllerian (AMH), testosteron (T) și E2.Pentru fiecare test, au existat 6-12 probe în fiecare grup cu trei replici. Informațiile despre kiturile ELISA utilizate sunt listate în Tabelul S2 din Materialele suplimentare.

Secțiunea serială a ovarului și numărarea foliculilor

Pentru analiza histologică, ovarele fixe au fost încorporate în parafină, secționate în serie și colorate pentru numărarea foliculilor pe baza metodelor anterioare [12]. Numărul total de foliculi și corp galben per ovar a fost calculat prin adăugarea numărului fiecărei secțiuni a cincea pe întregul ovar. Foliculii au fost clasificați în patru etape în conformitate cu sistemul Oktay modificat [13]. Numărarea a fost repetată de trei ori cu fiecare replică conținând 6-8 ovare stângi de la 6-8 șoareci din fiecare grup.

Experimente de împerechere

După 8 săptămâni de paradigmă a stresului, zece șoareci femele din fiecare grup au fost selectați pentru reproducere pentru a-și evalua fecunditatea. Șoarecii femele au fost împerecheați cu șoareci masculi C57BL/6 la aceeași vârstă timp de 1 săptămână la un raport de 2: 1 pe cușcă. După încheierea perioadei de împerechere, femelele au fost cântărite în serie și examinate pentru semne de sarcină. Au fost numărate numărul de șoareci F1 din două grupuri. După înțărcare, șoarecii materni au fost sacrificați. Ovarele au fost colectate și fixate ca mai sus și examinate pentru modificări histologice. Experimentul a fost repetat de două ori, fiecare replică conținând 5 șoareci în fiecare grup.