Articolul complet Extinderea rolului receptorului gustului amar în țesuturile orale suplimentare este exprimată TAS2R38

articol de cercetare

  • Articol complet
  • Cifre și date
  • Referințe
  • Citații
  • Valori
  • Licențierea
  • Reimprimări și permisiuni
  • PDF

ABSTRACT

Introducere

Capacitatea de a percepe amărăciunea PROP este o trăsătură ereditară, iar gena asociată cu percepția amară a PROP este TAS2R38 [7]. Trei izoforme alelice comune ale genei TAS2R38 identifică sub-degustători (PAV/PAV), degustători (PAV/AVI) și subiecți non-degustători (AVI/AVI) și prima variantă a site-ului (P49A) explică o mare parte a variației fenotipice în PROP percepție [7-10]. Cu toate acestea, mai multe date au demonstrat că polimorfismele genei TAS2R38 explică doar parțial varianța percepției amare la care pot contribui alți factori non-genetici [11, 12].

rolului

În ultimul deceniu, a devenit evident că receptorii gustativi sunt exprimați nu numai în papilele gustative ale suprafeței limbii, ci și în organele gustative suplimentare (cum ar fi: sistemele digestive, respiratorii, genito-urinare, inima, creierul, tiroida, pielea, placenta și celule imune) sugerând că diferite tipuri de celule, în afara cavității bucale, pot utiliza receptori ai gustului [13-15]. Rolul exact al TAS2R38 în afara sistemelor gustative este încă evaziv.

Dovezile că indivizii obezi exprimă mai multe celule imunoreactive TAS2R38 în mucoasa colonică decât subiecții slabi [16] și că la șoareci administrarea intragastrică de substanțe chimice amare modifică aportul alimentar și greutatea corporală prin eliberarea de grelină [17], susțin ipoteza că receptorii gustativi ar putea fi implicat în reglarea secreției hormonilor apetitului, a echilibrului energetic și a reglării greutății corporale. Receptorii gustului dulce și amar sunt exprimați în adipocite de șoareci și afectează adipogeneza, chiar dacă într-o direcție care nu este încă clară [18-21]. Nu sunt disponibile date privind prezența și funcția ipotetică a TAS2R38 în țesutul adipos uman/adipocite.

Am investigat aici expresia TAS2R38 în țesutul adipos subcutanat (SAT) și visceral uman (TVA) de la indivizi obezi și cu greutate normală și relația sa cu variantele P49A. În plus, am evaluat in vitro efectul a doi agoniști amari diferiți asupra metabolismului lipidelor.

Materiale și metode

Probele de țesut adipos

Comitetul de etică al IRCCS Istituto Auxologico Italiano (Milano, Italia) a aprobat studiul (https://www.auxologico.it/ricerca-formazione/comitato-etico, codul CE de aprobare: 2017_05_16_08) și toți subiecții și-au dat consimțământul scris în cunoștință de cauză după o explicație completă a studiului. Am colectat biopsii de țesut adipos subcutanat (SAT) și visceral (TVA) de la un total de 50 de subiecți non-diabetici: 32 de subiecți obezi (20 de femei, 12 bărbați, cu vârsta de 45,1 ± 10,9 ani, IMC 43,1 ± 9,2 kg/m 2) care au fost supuși procedurilor chirurgicale bariatrice (cum ar fi gastrectomia mânecii, trecerea intestinală, benzile gastrice) și 18 persoane cu greutate normală (11 femei și 7 bărbați, cu vârsta de 43,5 ± 14,1 ani, IMC 24,2 ± 2,3 kg/m 2) fără infecții sau boli neoplazice supuse procedurilor de chirurgie plastică estetică.

Extracția ADN și ARN și sinteza ADNc

Din fiecare biopsie colectată, am izolat ADN și ARN. Biopsiile au fost omogenizate printr-o etapă de întrerupere mecanică folosind IKA T10 Ultra Turrax (IKA) cu o etapă de liză folosind margele Bashing de înaltă densitate conform instrucțiunilor producătorului (cercetare Zymo), apoi ADN-ul total a fost apoi extras cu ADN Blood & Trusa de țesuturi urmând instrucțiunile producătorului (Qiagen). ARN-ul a fost extras cu mini-kit RNeasy urmând instrucțiunile producătorului (Qiagen). Setul de DNază fără RNază (Qiagen) a fost utilizat pentru digestia posibilului ADN rezidual în timpul purificării ARN folosind mini-truse RNeasy pentru a garanta o îndepărtare completă a ADN-ului din probele de ARN. Cantitățile și calitatea ADN/ARN extras au fost evaluate prin spectrofotometru NanoDropH ND-1000 (NanoDrop Technologies). ADNc a fost obținut prin transcriere inversă a ARN extras de 500 ng, folosind kitul de sinteză SuperScript VILO cDNA și Master Mix (Life Technologies).

PCR cantitativ în timp real (RTqPCR)

TAS2R38, acidul gras sintază (FASN), receptorul gamma activat cu proliferatorul peroxizomului (PPARγ) și nivelurile de expresie genică ale transportorului de glucoză 4 (GLUT4) au fost evaluate începând de la 10 ng de ADNc utilizând sonde TaqMan (test la cerere, Applied Biosystems). Gena de menaj RPLP0 (proteina ribozomală LP0 umană) a fost utilizată pentru normalizarea datelor datorită stabilității ridicate a expresiei. Datele au fost analizate cu software-ul SDS V.3 (Software Diversified Systems) și cuantificarea relativă, exprimată ca unități arbitrare (AU), a fost calculată folosind metoda 2 ^ -ΔΔCt.