Administrarea pe termen scurt a unei diete bogate în fructoză, grăsimi și colesterol determină steatoza hepatică la șoareci

Annette Brandt

1 Departamentul de Științe Nutritive, Științe Nutriționale Moleculare, Universitatea din Viena, A-1090 Viena, Austria; [email protected] (A.B.); [email protected] (A.J.E.)

2 Institute of Nutritional Sciences, SD Model Systems of Molecular Nutrition, Friedrich-Schiller-University Jena, D-07743 Jena, Germania; moc.liamtoh@2002-ijiat (C.J.J.); ten.xmg@etloNajtaK (K.N.); ed.xmg@nnamlleSnirhtaC (C.S.)

Cheng Jun Jin

Katja Nolte

Cathrin Sellmann

Anna Janina Engstler

1 Departamentul de Științe Nutritive, Științe Nutriționale Moleculare, Universitatea din Viena, A-1090 Viena, Austria; [email protected] (A.B.); [email protected] (A.J.E.)

Ina Bergheim

1 Departamentul de Științe Nutritive, Științe Nutriționale Moleculare, Universitatea din Viena, A-1090 Viena, Austria; [email protected] (A.B.); [email protected] (A.J.E.)

Date asociate

Abstract

1. Introducere

Cu o prevalență variind de la

2% la 44% în populația europeană generală și

24% dintre adulții din America de Nord, boala hepatică grasă nealcoolică (NAFLD) este considerată a fi cea mai frecventă boală hepatică din lume până acum [1,2]. NAFLD cuprinde un spectru larg de boli, de la steatoza simplă la steatohepatită, ciroză și, în unele cazuri, chiar la carcinom hepatocelular [3]. Cu toate acestea, în ciuda eforturilor intense de cercetare, mecanismele moleculare care stau la baza dezvoltării NAFLD nu au fost încă clarificate. În consecință, opțiunile de tratament universal acceptate sunt, de asemenea, limitate, iar terapiile care vizează stilul de viață și tiparele dietetice cu rate de recidivă ridicate sunt în continuare strategiile de tratament la alegere [4].

Pornind de la acest context, scopul prezentului studiu a fost de a determina dacă o schimbare pe termen scurt a tiparului alimentar, de exemplu, aportul unei diete bogate în grăsimi, fructoză și colesterol (FFC) timp de doar patru zile, este suficientă pentru a provoca afectarea funcției barierei intestinale și apariția NAFLD. Studiul nostru urmărește în continuare să stabilească dacă un tratament cu doze terapeutice de antibiotice nerezorbabile paralele cu inducerea bolii protejează șoarecii de modificările barierei intestinale, de exemplu, pierderea proteinelor de joncțiune strânsă sau dacă protecția asociată tratamentului cu antibiotice este mai degrabă legată la eliminarea bacteriilor din intestin.

2. Materiale și metode

2.1. Animale și tratament

90% comparativ cu șoarecii tratați de vehicule. Consumul de dietă a fost evaluat zilnic și ajustat între grupuri astfel încât toate grupurile să primească aceeași cantitate de calorii. La sacrificare, șoarecii au fost anesteziați cu un amestec de ketamină (100 mg/kg greutate corporală) și xilazină (16 mg/kg greutate corporală) intraperitoneală. Sângele a fost obținut din vena portală. Porțiuni de ficat și intestin subțire (duoden și jejun) au fost fie înghețate imediat, fixate în formalină cu tampon neutru, înghețate fixate în mediul de montare cu temperatură optimă de tăiere (OCT) (Medite, Burgdorf, Germania) sau depozitate în RNAlater ® la -20 ° C (Sigma-Aldrich, Steinheim, Germania).

Rezumatul proiectării studiului. După adaptarea șoarecilor timp de 7 zile la aportul unei diete lichide urmată de 4 zile de pretratament cu antibiotice nerezorbabile (92 mg polimixină B/kg greutate corporală/zi și 216 mg neomicină/kg greutate corporală/zi) sau vehicul = apă) adăugate la dieta de control lichid, șoarecii (n = 6-8/grup) au fost fie hrăniți cu dieta de control lichid, fie cu o dietă bogată în grăsimi, fructoză și colesterol (FFC) ± antibiotice timp de încă 4 zile.

2.2. Evaluarea histologică a secțiunilor hepatice și a acumulării de lipide hepatice

Histologia ficatului a fost evaluată în secțiuni încorporate în parafină (4 μm) colorate cu hematoxilină și eozină (ambele Sigma-Aldrich, Steinheim, Germania) folosind scorul de activitate NAFLD (NAS) așa cum s-a descris anterior [16]. Secțiunile congelate de ficat fixate în OCT (10 µm) au fost colorate cu roșu ulei O (Sigma-Aldrich, Steinheim, Germania) așa cum s-a descris anterior [17]. Imagini reprezentative ale ambelor colorări au fost surprinse la o mărire de 200 × folosind un sistem încorporat într-un microscop (Leica DM4000 B LED, Leica, Wetzlar, Germania). Pentru a determina numărul de granulocite neutrofile din țesutul hepatic, secțiunile încorporate în parafină (4 μm) au fost colorate folosind un kit de nafthol AS-D cloracetat de esterază disponibil în comerț (Sigma-Aldrich, Steinheim, Germania). Numărul de neutrofile a fost cuantificat conform detaliilor anterioare [13]. Trigliceridele hepatice au fost extrase din întregul țesut hepatic și măsurate așa cum s-a descris anterior [13].