Receptorul NLRP3 contribuie la protecția împotriva colangitei experimentale mediată de antigen
- Ecran divizat
- Pictogramă Vizualizări Vizualizări
- Conținutul articolului
- Cifre și tabele
- Video
- Audio
- Date suplimentare
- Link PDF PDF
- Pictogramă Partajare Acțiune
- Stare de nervozitate
-
Marisol Ibet González, Danielle Vannan, Bertus Eksteen, José Luis Reyes; Receptorul NLRP3 contribuie la protecția împotriva colangitei experimentale mediată de antigen. Biosci Rep 28 august 2020; 40 (8): BSR20200689. doi: https://doi.org/10.1042/BSR20200689
Descărcați fișierul de citare:
Abstract
Introducere
Aici, descriem că NLRP3 este necesar pentru a limita imunopatologia observată în boala inflamatorie biliară experimentală specifică antigenului. Șoarecii lipsiți de inflammasomul NLRP3 au prezentat o distrugere mai severă a căilor biliare, care a fost agravată atunci când șoarecii au fost expuși la o dietă obezogenă.
Materiale și metode
Inducerea șoarecilor și colangitei
Am modelat colangita acută utilizând un protocol ușor modificat din modelul OVAbil [15], după cum sa raportat anterior [16]. Experimentele pe animale au fost efectuate la Institutul Snyder pentru Boli Cronice (Universitatea din Calgary), iar protocolul de studiu M11025 a fost aprobat de Comitetul de îngrijire a animalelor de la Universitatea din Calgary și a fost în conformitate cu Ghidurile pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator. Pe scurt, șoarecii masculi C57BL/6 care exprimă fragmentul 139-285aa de proteină de ovalbumină legată de membrană (OVAbil) au fost folosiți ca animale primitoare și în comparație cu șoareci cu vârstă și sexe care nu au senzorul NLRP3 (OVAbilxNLRP3 -/-). Ambele grupuri au fost hrănite fie cu un chow standard (SC), fie cu o dietă bogată în grăsimi (HFD) timp de 12 săptămâni, după cum s-a descris anterior [16]. Ambii șoareci hrăniți cu SC și HFD au primit 1 × 10 7 limfocite splenice obținute de la șoareci transgenici OVA I și II (OTI și OTII), prin injecții intraperitoneale (ip.).
Histologie
Zece zile după transferul șoarecilor celulelor OTI și OTII (inducerea colangitei) șoarecii au fost uciși uman sub anestezie inhalatorie profundă (izofluran), urmată de luxația cervicală și probe de ficat recoltate. Țesutul a fost încorporat în parafină și secționat (5 µM grosime) înainte de a proceda la colorare cu H&E pentru analiza histopatologică. La microscopul cu lumină, 5 căi portale alese la întâmplare au fost punctate pentru arhitectura căilor biliare după cum urmează: 0; canal biliar bine conservat, 1; canal biliar dezorganizat 2; celulele infiltrante care deplasează colangiocitele, 3; duct biliar absent. Pentru evaluarea inflamației 0; fără celule infiltrante, 1; celule infiltrante moderate, 2; celule inflamatorii masive numai în tractul portal 3; celule inflamatorii masive, inclusiv parenchimul ficatului.
Citometrie în flux
La sacrificiu, ficatul din grupurile experimentale a fost recuperat și omogenizat în PBS conținând FBS folosind un disociator de țesut gentilMACS (Miltenyi Biotec Inc, Germania). Probele au fost stratificate pe gradienți de percoll de 33/77% (Percoll, GE Healthcare Bio-Sciences AB, Uppsala Suedia) și centrifugați timp de 20 min la 200 g, la temperatura camerei pentru a realiza separarea celulelor. Suspensiile celulare recuperate din gradienți au fost ajustate (1 × 106/ml) și colorate în tampon de citometrie în flux (5% FBS, 5 mM EDTA și 0,1% azidă de sodiu). Colorarea a fost efectuată utilizând următorii anticorpi conjugați cu fluorocrom: PO-CD11b, PECy7-F4/80, APC-Cy7-Ly6C și PE-Ly6G. Datele au fost achiziționate pe un citometru de flux Aria II (BD Biosciences) și analizate cu software-ul Kaluza (Beckman Coulter, S.U.A.).
Testele serice
Sângele integral a fost colectat prin puncție cardiacă de la șoareci sub anestezie profundă la sacrificiu (izofluran, produse halocarbonate). Probele de sânge au fost centrifugate și serurile din grupurile experimentale au fost testate pentru nivelurile de alanină aminotransferază (ALT) de către Calgary Laboratory Services (Calgary, AB, Canada) și mediatori imuni solubili cu citokina de șoarece 31-plex Discovery Assay (Eve Technologies, Calgary, AB, Canada) după cum sa raportat [16]. Concentrațiile de citokine și chemokine sunt prezentate ca pg/ml.