Profilul chimic și activitatea antioxidantă a uleiului din semințe de bujor (Paeonia suffruticosa Andr
Xin Yang
1 Școală de chimie și inginerie chimică, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
Di Zhang
2 Școala de farmacie, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
Li-min Song
1 Școală de chimie și inginerie chimică, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
Qian Xu
2 Școala de farmacie, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
Hong Li
2 Școala de farmacie, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
Hui Xu
2 Școala de farmacie, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
3 Laborator cheie de farmacologie moleculară și evaluare a medicamentelor, Universitatea Yantai, Yantai 264005, China
4 Centrul colaborativ de inovare a sistemului avansat de livrare a medicamentelor și a medicamentelor biotehnologice în universitățile din Shandong, Ministerul Educației, Yantai 264005, China
Abstract
1. Introducere
Bujora erbacee (Paeonia suffruticosa Andr.) Este un fel de plantă ornamentală tradițională chineză cultivată pe scară largă în China, America, Europa și alte zone asiatice. În plus față de utilizarea ornamentală pentru florile lor atractive, majoritatea speciilor de bujor au fost folosite și ca plante medicinale, iar studiile s-au concentrat în principal pe paeonol, paeoniflorină și alte componente bioactive în corola, frunze și scoarță de rădăcină pentru o lungă perioadă de timp [1-3]. Coaja de rădăcină uscată a bujorului, denumită mudanpi în chineză, a fost înregistrată oficial în toate edițiile farmacopeei chineze (ChP) și utilizată pe scară largă în preparatele compuse din medicina tradițională chineză pentru promovarea circulației sângelui și îndepărtarea stazei de sânge. Semințele de bujor sunt principalul produs secundar al mudanpi cu un randament mediu anual de până la 3750 kg pe hectar. Cu toate acestea, aproape toate semințele de bujor au fost luate doar ca deșeuri industriale. În ultimul deceniu, această resursă vegetală atrage mari interese pentru dezvoltarea ulterioară, deoarece semințele de bujor, în special uleiul de semințe, au fost găsite bogate în acizi grași nesaturați, aminoacizi, stilbenoizi și alți nutrienți [4, 5].
2. Materiale și metode
2.1. Materiale și produse chimice
Eșantionul testat de PSO a fost un produs de la Heze Ruipu Peony Technology Development Corporation (Shandong, China) preparat printr-o metodă tradițională de presare la rece. Uleiul de măsline extravirgin (EVOO, Olivoila®, Italia) folosit ca control a fost achiziționat de la un supermarket local. Pentru ambele probe de ulei, principalii indici chimici, inclusiv valoarea acidului, valoarea iodului, valoarea peroxidului și valoarea saponificării au fost detectați pentru a măsura cerințele standardului național chinez pentru uleiul vegetal comestibil. S-au obținut de la Sigma-Aldrich Co. acid galic, α-tocoferol, 1,1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH), reactiv Folin-Ciocalteu, carboximetilceluloză (CMC) sodică și albumină serică bovină (BSA). (St. Louis, MO, SUA). Acidul salvianolic A (SAA), un fel de compus polifenolic natural, cu proprietăți antioxidante puternice [16], a fost furnizat cu amabilitate de Shandong Target Drug Co. Ltd. (Yantai, China) și capsula Xuezhikang a fost produsul Universității Beijing Peking WBL Biological Technology Co. Ltd., China. Toate celelalte substanțe chimice au fost de cea mai înaltă calitate disponibilă.
2.2. Analiza acizilor grași și a problemelor insaponificabile
PSO (5 g) a fost hidrolizat cu 20 ml de KOH 2 M în metanol la 60 ° C timp de 30 min. Fracția nesaponificabilă a fost extrasă folosind metoda lui Wang și colab. [17]; între timp, fracțiunea saponificabilă a fost convertită în esteri metilici ai acizilor grași (FAME) și extrasă în hexan conform metodei Zhou și colab. [9]. Pentru ambele fracții, reziduurile au fost uscate sub vid și cântărite după îndepărtarea solvenților de extracție. Procentul de greutate al substanțelor nesaponificabile (rom) și al acizilor grași (Rfa) în PSO a fost calculat ca Wuf/Woil × 100% și (1 - Wuf/Woil) × 100%, respectiv, unde Wuf a însemnat greutatea fracției nesaponificabile și Woil greutatea PSO. Apoi ambele reziduuri au fost redizolvate în hexan și supuse analizei prin cromatografie de gaz-spectrometrie de masă (GC-MS) utilizând un sistem Shimadzu QP2010 Plus GC-MS (Kyoto, Japonia) în conformitate cu condițiile raportate anterior [9, 17]. Analiza calitativă a fost efectuată prin potrivirea modelelor de fragmentare a masei de vârf cu cele din bibliotecile de spectru de masă NIST05, iar analiza cantitativă a fost efectuată prin normalizarea zonelor de vârf pentru a obține conținutul procentual al fiecărei componente, Pep, din care rata sa în PSO (R) ar putea fi calculată prin înmulțirea cu Rum sau Rfa.
2.3. Testul total al tocoferolilor și al fenolicii totale
După extracție prin metoda lui Li și colab. [18], tocoferolii totali din PSO au fost testați utilizând un spectrofotometru de fluorescență Hitachi F7000 (Tokyo, Japonia) cu α-tocoferol ca referință. Lungimea de undă de 280 nm a fost utilizată pentru excitație și 324 nm pentru emisie. Fenolicii totali din PSO au fost extrasați cu metanol și apoi determinați utilizând reactivul Folin-Ciocalteu conform metodei Xie și colab. [19]. Acidul galic a fost utilizat ca standard de referință, iar rezultatele au fost exprimate ca echivalenți de acid galic (GAE) în PSO.
2.4. Determinarea activităților antioxidante in vitro
2.4.1. Test DPPH Scavenging
DPPH este un fel de radical liber stabil cu o bandă puternică de absorbție centrată la aproximativ 520 nm, ducând la o culoare violetă profundă a radicalului DPPH în soluție. Va deveni incolor sau galben pal atunci când este neutralizat, ceea ce permite monitorizarea concentrației radicale pentru a evalua activitatea de eliminare a radicalilor din schimbarea absorbției optice [20]. Activitatea de curățare în ceea ce privește radicalii liberi DPPH a fost determinată printr-o metodă descrisă de Wang și colab. [21] cu ușoare modificări. Pe scurt, 4,6 ml alicote de probe testate dizolvate în DMSO la concentrații de 0-50 mg · mL -1 au fost amestecate cu 0,4 ml soluție etanolică proaspătă de DPPH (1 mM) și apoi lăsate să stea la temperatura camerei timp de 30 min. În același timp, amestecul fără probă de testare a fost preparat ca martor martor. Apoi absorbanța a fost măsurată la 517 nm folosind un spectrofotometru Shimadzu UV2550 (Kyoto, Japonia). Procentul de activitate de eliminare a DPPH exprimat ca% eliminare a fost calculat prin ecuația (1 - AA/AB) × 100%, în care AA și AB au fost valorile absorbantei probei de testare și, respectiv, golul.
2.4.2. Test hidroxil de eliminare radicală
Pentru ambele modele, EVOO și α-tocoferolul au fost utilizate ca martori pozitivi, iar concentrația pentru 50% din efectul maxim de eliminare, EC50, a fost calculată pentru comparație cantitativă.
2.5. Determinarea activităților antioxidante in vivo
2.5.1. Experimentare pe animale
Activitățile antioxidante in vivo au fost investigate folosind modelul șoarecelui de leziuni hepatice acute induse de șobolani CCl4 și hiperlipidemie induse de o dietă bogată în grăsimi conform metodelor raportate anterior cu unele modificări [15, 23]. Animalele, inclusiv șoarecii adulți Kunming masculi sănătoși și șobolanii Sprague-Dawley (SD), au fost furnizați de Centrul Experimental pentru Animale din Shandong Luye Pharmaceutical Co. Ltd. (Yantai, China), găzduit sub un ciclu de lumină/întuneric de 12 ore într-o unitate de animale aprobată menținută la 22 ± 2 ° C și 40% până la 60% umiditate relativă, având acces ad libitum la alimente și apă și permisă se aclimatizează timp de o săptămână înainte de experimentare. Toate protocoalele și experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru etica experimentelor pe animale de la Universitatea Yantai și au respectat ghidurile Institutelor naționale de sănătate pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator.