Potența anticandidă in vitro a extractelor Syzygium aromaticum (cuișoare) împotriva candidozei vaginale
Abstract
fundal
Candida vaginită este un risc global pentru sănătate care crește morbiditatea în rândul femeilor aflate la vârsta fertilă. Studii recente au relevat o incidență ridicată a rezistenței la medicamente Candida tulpini. În plus, tratarea candidei vulvovaginitei în timpul sarcinii este dificilă, deoarece terapia antifungică este asociată cu anomalii fetale. Prin urmare, este important să se dezvolte noi strategii terapeutice pentru tratarea candidozei vulvovaginale.
Metode
În acest studiu, am folosit metoda de difuzie a discului pentru a evalua activitatea anticandidă a diferitelor Syzygium aromaticum extracte (metanol, acetat de etil, n-hexan și dietil eter) împotriva C. albicans, C. glabrata, și C. tropicalis. Mai mult decât atât, analiza cromatografiei cu spectrometrie de masă (GC-MS) a diferitelor S. aromaticum extractele au fost efectuate pentru a determina componentele active care prezintă activitate anticandidă. A fost evaluată citotoxicitatea diferitelor extracte de cuișoare împotriva liniei celulare HUH7.
Rezultate
Extractul de acetat de etil a prezentat cea mai mare activitate antifungică împotriva C. albicans, C. glabrata, și C. tropicalis cu diametre ale zonei de inhibiție de 20,9, 14,9 și respectiv 30,7 mm. Concentrația minimă inhibitoare a S. aromaticum extractul de acetat de etil a fost de 250 μg/disc împotriva C. tropicalis, și 500 μg/disc împotriva C. albicans și C. glabrata, în timp ce concentrația fungicidă minimă a fost de 0,5 mg/disc împotriva C. tropicalis și 1 mg/disc împotriva C. albicans și C. glabrata. Analiza GC-MS a extractului de acetat de etil a relevat principalul compus bioactiv ca eugenol (58,88%), urmat de acetat de eugenil (23,86%), trans-cariofilenă (14,44%) și α-humulenă (1,88%). Testul de citotoxicitate a indicat faptul că extractul de dietil eter a demonstrat cel mai mic efect toxicologic împotriva liniei celulare HUH7, cu un IC50 relativ de 62,43 μg/ml; extractul metanolic a demonstrat o toxicitate mai mare (IC50, 24,17 μg/ml).
Concluzie
Dupa cum S. aromaticum extractul prezintă activitate antifungică ridicată la concentrații scăzute, poate fi o sursă potențială de medicamente antifungice naturale.
fundal
Metode
Pregătirea extractelor de plante
Procedura de extracție a fost efectuată utilizând diferiți solvenți organici (metanol, acetat de etil, dietil eter și n-hexan), demonstrând polarități diferite pentru a permite extragerea tuturor compușilor bioactivi hidrofili și lipofili. Mugurii florali ai S. aromaticum au fost obținute de pe o piață locală din Riyadh, Arabia Saudită. Am identificat materialul vegetal, iar identificarea a fost confirmată de ierbarul saudit, Departamentul de Botanică, Colegiul de Științe, Universitatea King Saud. Materialul vegetal a fost depus la ierbar cu un număr de voucher (KSU-14682). Mugurii de cuișoare au fost dezinfectați utilizând soluție de hipoclorit de sodiu 0,5% (NaOCl), spălați de trei ori succesiv folosind apă distilată sterilă și lăsați să se usuce. Materialul vegetal uscat a fost pulverizat omogen folosind un mortar mecanic. Proba sub formă de pulbere (15 g) a fost adăugată la 200 ml de diferiți solvenți organici și incubată pe un agitator magnetic timp de 48 de ore. Apoi, amestecul a fost centrifugat la 9000 rpm timp de 10 min pentru a îndepărta reziduurile. Supernatantul a fost filtrat folosind o hârtie de filtru Whatman pentru a obține un filtrat clar. Filtratul a fost concentrat utilizând un evaporator rotativ și depozitat la 4 ° C până la utilizare. Randamentul extractului a fost calculat folosind următoarea formulă:
unde R este greutatea reziduului extractului vegetal; S este greutatea probei de plante brute.
Candida izolează
Trei Candida specii, C. albicans, C. tropicalis, și C. glabrata au fost obținute de la spitalul King Khalid, Riyadh, Arabia Saudită. Inoculul proaspăt a fost preparat prin subcultivarea fiecăruia Candida specii pe mediu Agar dextroză Sabouraud (SDA) la 35 ° C timp de 48 de ore.
Pregătirea inoculului candidal
Slanturile SDA au fost preparate și inoculate cu diferite Candida specii. Ciuperca a fost recoltată folosind 5 ml soluție salină sterilă. Absorbanța suspensiei fungice a fost măsurată la 560 nm folosind un spectrofotometru și numărul de celule a fost ajustat pentru a obține un număr de celule viabil de 10 7 CFU/mL pentru fiecare Candida specii.
Bioanaliză anticandidă
Determinarea concentrației inhibitoare minime (MIC)
CMI a fost definit ca fiind cea mai mică concentrație de extract de plante care prezintă activitate antifungică. MIC a fost evaluat numai pentru extractul de acetat de etil al S. aromaticum ca cel mai eficient extract de cuișoare. Mediul SDA (15 ml) a fost turnat într-o cutie Petri sterilă ca strat bazal, urmat de adăugarea de 10 ml mediu însămânțat (așa cum s-a descris mai sus) și lăsat să se solidifice. Discuri de hârtie de filtru sterile (diametru 8 mm) încărcate cu concentrații diferite de S. aromaticum extract de acetat de etil (0,125, 0,25, 0,50, 1,0, 2,0 și 4,0 mg/disc) au fost plasate peste mediul însămânțat. Plăcile au fost incubate la 5 ° C pentru a permite difuzia extractului. Plăcile au fost apoi incubate la 35 ° C timp de 48 de ore și diametrul zonei de inhibare a fost măsurat folosind un etrier Vernier. Cea mai mică concentrație care a prezentat activitate antifungică împotriva Candida specia a fost înregistrată ca MIC.