Păstrăvul curcubeu selectat genetic pentru un conținut mai mare de grăsime musculară prezintă o activare crescută a

Unité Mixte de Recherches 1067 Nutrition Aquaculture and Génomique, Institutul Național al Căutării Agronomice, Pôle d'hydrobiologie, 64310 Saint Pée-sur-Nivelle, Franța

Adresa pentru cereri de reimprimare și alte corespondențe: S. Skiba-Cassy, UMR 1067 Nutrition, Aquaculture & Génomique, Institutul Național al Cercetării Agronomice, Pôle d'hydrobiologie, 64310 Saint-Pée-sur-Nivelle, Franța (e-mail: [e-mail protejat]).

Unité Mixte de Recherches 1067 Nutrition Aquaculture and Génomique, Institutul Național al Căutării Agronomice, Pôle d'hydrobiologie, 64310 Saint Pée-sur-Nivelle, Franța

Abstract

gestionarea depunerii de grăsime este o provocare semnificativă atât pentru sănătatea umană, cât și pentru creșterea animalelor de fermă. La om, obezitatea exprimată ca supraexpansiune a țesutului adipos este adesea asociată cu dezvoltarea tulburărilor metabolice, care devine din ce în ce mai răspândită la nivel mondial și se preconizează că va crește semnificativ în următorii 10 ani (50). Gestionarea depunerii de grăsime la animalele de fermă, inclusiv peștii, a devenit, de asemenea, extrem de semnificativă, mai ales în ceea ce privește calitatea cărnii, deoarece depozitarea lipidelor în mușchiul scheletic afectează valoarea nutrițională și proprietățile senzoriale ale cărnii (49).

Selecția genetică a fost frecvent utilizată la animalele de fermă pentru a gestiona conținutul de grăsime corporală (7a, 24), dar a fost rareori folosită în acvacultură. Două linii experimentale de păstrăv curcubeu au fost recent dezvoltate prin selecție divergentă pentru un conținut scăzut sau ridicat de grăsime musculară cu utilizarea unei metode nedistructive de măsurare pe pești vii (36). Selecția genetică pentru un conținut ridicat de grăsime musculară nu afectează aportul de hrană și au fost înregistrate conținuturi similare de grăsime din corpul întreg în două linii de pești de 80 g hrăniți cu aceeași dietă (20). Caracterizarea metabolică a liniilor i-a determinat pe autori să sugereze că liniile prezintă diferențe în utilizarea surselor de energie, cu o reducere a oxidării acizilor grași hepatici și o utilizare îmbunătățită a glucozei atât în ficat, cât și în mușchiul peștilor din linia musculară grasă (FL) comparativ cu linia musculară slabă (LL) (20, 21). Deoarece insulina controlează metabolismul glucozei și lipidelor, am emis ipoteza că căile insulinei ar fi putut fi afectate de selecția genetică pentru conținutul de grăsime musculară.

Procedura experimentală și de eșantionare.

Tabelul 1. Formula și compoziția analitică a dietei

Nivelurile metabolitului plasmatic.

Nivelurile de glucoză plasmatică, triacilglicerol (TG) și acid gras gratuit (FFA) au fost măsurate cu glucoză RTU (BioMerieux, Marcy l'Etoile, Franța), PAP 150 (Biomérieux, Marcy-l'étoile, Franța) și kituri NEFA C (Wako Chemicals, Neuss, Germania), respectiv, conform recomandărilor fiecărui producător.

Extracția proteinelor și Western blot.

Analiza expresiei genelor: RT-PCR în timp real.

Eșantioanele totale de ARN au fost extrase din ficatul înghețat de -80 ° C al peștilor la post și peștele refinat la 8 și 24 de ore folosind reactiv Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA) conform recomandărilor producătorului. O microgramă din ARN-ul total rezultat a fost transcris invers în ADNc folosind kitul SuperScript III RNaseH- revers transcriptază (Invitrogen) și primeri aleatori (Promega, Charbonnières, Franța) conform instrucțiunilor fiecărui producător. Nivelurile de exprimare a genei țintă au fost determinate prin RT-PCR cantitativă în timp real folosind primerii specifici PCR în timp real (Tabelul 2). Pentru a evita amplificarea ADN-ului genomic, perechile de primer au inclus o oligonucleotidă care se întinde pe intron atunci când este posibil. Diferitele produse PCR au fost verificate inițial prin secvențiere pentru a confirma natura ampliconului.

Tabelul 2. Exemple de secvențe

F, exemplu înainte; R, grund invers; nt, nucleotide. Nr. De acces GenBank nr. sau aderarea Sigenae nr. este după cum urmează: factor de alungire-1α (EF1α), AF498320; glucocinază (GK), AF135403; piruvat kinază (PC), AF246146; fosfoenolpiruvat carboxicinază (PEPCK), AF246149; glucoză 6-fosfatază 1 (G6Pase1), tcay0019b.d.18_3.1.s.om.8.1-1693; G6Pase2, AF120150; serina dehidratază (SD), tcay0007b.b.13_3.1.s.om.8; acizi grași sintaza (FAS), tcab0001c.e.06_5.1.s.om.8; ATP-citrat liasă (ACLY), CA349411.1; glucoză-6-fosfat dehidrogenază (G6PDH), CA351434; carnitina palmitoiltransferază 1a (CPT1a), AF 327058; CPT1b, AF606076.

Eficiența PCR (E) a fost măsurată ca panta unei curbe standard utilizând diluarea în serie a ADNc și toate valorile au fost peste 1,9.