HOTAIR lncRNA cu reglare descendentă atenuează sindromul ovarelor polichistice la șobolani prin reducerea expresiei
Bin Jiang
1 Departamentul de ginecologie, al treilea spital Xiangya al Universității Centrale de Sud, Changsha China,
Min Xue
1 Departamentul de ginecologie, al treilea spital Xiangya al Universității Centrale de Sud, Changsha China,
Dabao Xu
1 Departamentul de Ginecologie, Al Treilea Spital Xiangya al Universității Centrale de Sud, Changsha China,
Jiayu Song
1 Departamentul de Ginecologie, Al Treilea Spital Xiangya al Universității Centrale de Sud, Changsha China,
Shujuan Zhu
1 Departamentul de ginecologie, al treilea spital Xiangya al Universității Centrale de Sud, Changsha China,
Abstract
1. INTRODUCERE
Sindromul ovarului polichistic (SOP) este cea mai frecventă tulburare endocrină la femei în timpul vârstei reproductive, care este asociată cu hiperinsulinemie, hiperandrogenemie și producție aberantă de adipokine din țesutul adipos. calitatea vieții pacienților.2 Incidența SOP este de 6% -10% conform criteriilor Institutului Național de Sănătate, care atinge 15% pe baza criteriilor mai largi de la Rotterdam. 3 SOP se caracterizează prin creșterea stromei ovariene și a foliculilor antrali, în în plus față de îngroșarea corticală ovariană și hiperplazia celulelor theca.4 Femeile cu SOP sunt extrem de vulnerabile la anovulație și infertilitate și chiar și acești factori de risc (obezitate, sângerări uterine anormale și diabet) contribuind la dezvoltarea cancerului endometrial.5 Studii multiple au furnizat dovezi pentru rolul țintelor moleculare în tratamentul SOP, care includ ARN-uri lungi necodificate (ARNc), m icroARN (miARN) și genele țintă corespunzătoare.6, 7, 8
2. MATERIALE ȘI METODE
2.1. Animale experimentale
2.2. Stabilirea modelului și identificarea SOP
De la vârsta de 23 de zile, șobolanii PCOS au fost injectați subcutanat cu sulfat de dehidroepiandrosteron (DHEA) și sulfat de prasteronă de sodiu (9 mg/100 g greutate corporală) și 0,4 ml apă pentru injecție, care a durat 20 de zile. Șobolanii din grupul normal au fost injectați cu 0,4 ml de apă pentru injecție în același moment în fiecare zi. La 20 de zile mai târziu, șobolanii au fost lipsiți de hrană timp de 12 ore. Apoi ovarele au fost extrase. Prin frotiul vaginal s-a determinat ciclul estru. Nivelurile hormonale serice, colorarea hematoxilinei-eozinei (HE), microscopul electronic de transmisie (TEM) și testul terminal de marcare a deoxinucleotidil transferazei (TUNEL) au fost adoptate pentru identificarea modelelor. Când modelele au fost determinate ca având succes, șobolanii fiecărui grup au fost tratați în mod corespunzător a doua zi, iar injecția continuă a durat 7 zile.
2.3. Test imunosorbent legat de enzime (ELISA)
Șobolanii din toate grupurile au fost lipsiți de hrană, dar nu de apă după ultima injecție. După recoltarea de sânge din inimă, serul a fost izolat. ELISA a fost utilizat pentru a determina nivelurile serice de hormon foliculostimulant (FSH), hormon luteinizant (LH), teststeronă (T) și estradiol (E2) (Institutul de Bioinginerie Nanjing Jiancheng, Nanjing, Jiangsu, China). Șobolanii au fost eutanasiați prin dislocare cervicală, cu ambele ovare extrase. S-au observat morfologia și culoarea ovarelor. Greutatea a fost măsurată și înregistrată.
2.4. Colorarea hematoxilinei și a eozinei
O parte a ovarului a fost pregătită și fixată în 10% formaldehidă pentru mai mult de 24 de ore. Apoi ovarul a fost deshidratat în etanol cu gradient, permeabilizat de xilen și încorporat în parafină după scufundare în ceară. Ovarul a fost tăiat în secțiuni cu o grosime de 4 μm. Ulterior, secțiunile au fost depilate și hidratate, urmate de colorarea HE. După tratamentul gradientului de etanol, secțiunile colorate au fost permeabilizate cu xilen și montate în balsam neutru. Structurile morfologice ale foliculilor ovarieni au fost observate la microscopul cu lumină.
2.5. Microscop electronic cu transmisie (TEM) pentru a observa ultrastructura foliculilor ovarieni
O parte a ovarului a fost preparată și fixată în glutaraldehidă 2% timp de 24 de ore, urmată de felierea în blocuri (1 mm 3). Blocurile ovariene au fost scufundate peste noapte după clătiri repetate cu 0,1 mol/L soluție salină tamponată cu fosfat (PBS). Apoi blocurile au fost fixate în acid osmic 1% la 4 ° C timp de 2 ore, urmate de spălare cu apă deionizată de trei ori (5 min pe spălare). La 4 ° C, blocurile ovariene au fost deshidratate în gradină de acetonă și încorporate, urmate de polimerizare la 70 ° C timp de 36 de ore. Apoi, blocurile au fost tăiate în secțiuni semi-subțiri, care au fost colorate cu azur - albastru de metilen și localizate la microscopul luminos. Apoi, secțiunile au fost realizate în secțiuni ultra subțiri, tratate cu o pată dublă de electroni de acetat de uranil - citrat de plumb. În cadrul TEM, au fost observate și fotografiate ultrastructurile celulelor granuloase ovariene, ale celulelor theca și ale celulelor luteinice.