Hipertiroidismul experimental scade expresia genică și nivelurile serice ale adipokinelor în obezitate
1 Departamentul de Medicină Internă, Școala de Medicină Botucatu, Universitatea din statul São Paulo, 18618-000 Botucatu, SP, Brazilia
2 Departamentul Sport, Centrul de Educație Fizică și Sport, Universitatea Federală din Espirito Santo (UFES), 29075-910 Vitória, ES, Brazilia
Abstract
1. Introducere
Hormonii tiroidieni influențează metabolismul energetic [1] și joacă un rol central în reglarea metabolismului țesutului adipos [2]. Perturbările acestor hormoni sunt asociate cu modificări ale greutății corporale și ale cheltuielilor de energie [3]. Deși este bine cunoscut faptul că hipertiroidismul duce la scăderea în greutate, iar hipotiroidismul este asociat cu creșterea în greutate, modificările funcției tiroidiene sunt discutate controversat în obezitate [4].
Hormonii tiroidieni sunt implicați în reglarea țesutului adipos, în timp ce hormonii produși de țesutul adipos, cum ar fi rezistina, adiponectina și leptina, sunt implicați în reglarea echilibrului energetic [18]; cu toate acestea, relația dintre acești hormoni în obezitate este controversată și abia abordată. În acest context, obiectivul nostru în acest studiu a fost de a analiza influența dozei suprafiziologice de T3 asupra expresiei genice și a concentrației serice de leptină, rezistină și adiponectină la animalele obeze.
2. Materiale și metode
2.1. Animale și protocol experimental
Acest studiu a folosit bărbați Wistar șobolani, cu o greutate de aproximativ 150 g, furnizate de Centrul pentru animale al Laboratorului Experimental de Medicină Clinică de la Universitatea de Stat „Júlio de Mesquita Filho” Paulista din Botucatu, Sao Paulo, Brazilia. Animalele au fost inițial împărțite în două grupuri: martor (C) - alimentat cu chow comercial ad libitum - și obez (OB) - alimentat cu o dietă hipercalorică, așa cum s-a descris anterior [19], pentru a induce obezitatea. După inducerea obezității, animalele OB au fost randomizate în două grupe: animale obeze (OB,
) și animalelor obeze li s-a administrat o doză suprafiziologică de T3 (OT) la o concentrație de 25 μg/100 g greutate corporală (BW) [20]. T3 a fost administrat prin injecții subcutanate, o dată pe zi, în ultimele 2 săptămâni [21, 22]. Volumele adecvate de ser fiziologic au fost administrate, prin injecții subcutanate, grupurilor OB și C. Animalele au fost adăpostite în cuști individuale sub temperatură ambiantă controlată (22-26 ° C) și iluminare (ciclu lumină-întuneric de 12 ore). Consumul dietetic a fost controlat zilnic și greutatea a fost evaluată săptămânal. Protocolul experimental a fost aprobat de Comisia pentru Etică în Experimentarea Animalelor de la Botucatu - Școala de Medicină UNESP și a urmat „Liniile directoare pentru îngrijirea și utilizarea animalelor experimentale”.
2.2. Grăsime corporală totală
Grăsimea corporală totală a fost măsurată ca suma depozitelor de grăsime epididimală, retroperitoneală și viscerală [23]. Acest punct de date a fost utilizat pentru a confirma obezitatea la animale. În plus, a fost calculat indicele de adipozitate (grăsimea corporală totală împărțită la greutatea corporală finală înmulțită cu 100, adaptat de Boustany și colab. [24]).
2.3. Analiza biochimică a serului
Animalele au fost postite timp de 12 până la 15 ore, anesteziate cu pentobarbital de sodiu, 50 mg/kg/ip și sacrificate prin decapitare. Sângele a fost colectat în tuburi uscate și centrifugat la 3000 rpm timp de 10 minute. Serul a fost depozitat la -80 ° C. Concentrațiile serice de glucoză și triacilglicerol (TG) au fost testate folosind truse specifice (CELM, São Paulo, Brazilia). Acizii grași liberi (FFA) au fost determinați utilizând un kit comercial (WAKO, WAKO Pure Chemical Industries Ltd., Osaka, Japonia). Dozarea a fost analizată prin metoda enzimatică colorimetrică automată (Technicon, RA-XT System, Global Medical Instrumentation, Minnesota, SUA).
2.4. Măsurători hormonale
Concentrațiile serice de insulină, leptină, rezistină, adiponectină, T3 liber, T4 liber și TSH au fost măsurate la toate animalele. Măsurătorile au fost efectuate prin imunoanaliză, măsurată cu un cititor de microplăci (Spectra Max 190 - Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SUA). Kituri comerciale au fost utilizate pentru măsurarea leptinei, insulinei, adiponectinei (kit ELISA-Millipore, St. Charles, MO, SUA), rezistină (kit ELISA-B-Bridge International Inc., Mountain View, CA, SUA) și tiroidă hormoni (kit ELISA-USCN Life Science & Technology Company, Wuhan, China).
2.5. Expresia genelor
ARN întreg a fost extras din țesutul adipos retroperitoneal folosind reactivul Trizol (Invitrogen, Sao Paulo, Brazilia), conform instrucțiunilor producătorului. Sistem de sinteză First-Strand SuperScript II pentru RT-PCR Kitul (Invitrogen, Sao Paulo, Brazilia) a fost utilizat pentru sinteza a 20 μL de ADN complementar (ADNc) de la 1000 ng de ARN întreg. Nivelurile de ARNm de leptină (test Rn 00565158_mL - Applied Biosystems), rezistină (test Rn 00595224_mL - Applied Biosystems) și adiponectin (test Rn 00595250_mL - Applied Biosystems) au fost determinate de PCR în timp real. Măsurătorile cantitative au fost făcute cu kitul comercial TaqMan qPCR (Applied Biosystems), conform instrucțiunilor producătorului, în sistemul de detectare Applied Biosystems StepOne Plus. Condițiile de ciclism au fost după cum urmează: activarea enzimei la 50 ° C timp de 2 min, denaturarea la 95 ° C timp de 10 min, produsele ADNc au fost amplificate pentru 40 de cicluri de denaturare la 95 ° C timp de 15 s și recoacere/extensie la 60 ° C timp de 1 min. Expresia genică a fost cuantificată în raport cu valorile grupului C după normalizare printr-un control intern (test de ciclofilină Rn 00690933_mL - Biosisteme aplicate) prin metodă
, după cum s-a descris anterior [25].
2.6. Analize statistice
Modificările greutății corporale au fost evaluate cu un interval de încredere de 95%. Expresia genelor, biochimia și datele hormonale au fost analizate folosind analiza varianței (ANOVA) completată de testul lui Bonferroni. Datele sunt exprimate ca medie ± deviație standard. A fost adoptat un nivel de semnificație de 5%.
3. Rezultate
3.1. Evoluția greutății corporale
Toate animalele aveau BW similar la începutul studiului. Până în săptămâna 13, animalele OB erau mai grele decât grupul C. După 30 de săptămâni de experiment, BW al grupului OB (604 g ± 36 g) a fost statistic mai mare decât cel al grupului C (488 g ± 11 g). BW al grupului OB + T3 (489 g ± 16 g) a fost semnificativ mai mic decât grupul OB, dar nu semnificativ diferit de grupul C (Figura 1).
), și obezi cu 25 μg T3/100 g BW (OT,
3.2. Grăsime corporală totală
Dieta hipercalorică a crescut depunerile de grăsimi și indicele de adipozitate. Administrarea de T3 a scăzut depunerile de grăsime retroperitoneală, viscerală și epididimală. În mod similar, administrarea T3 a scăzut indicele total de grăsime corporală și adipozitate (Tabelul 1).
g T3/100 g BW. Date exprimate ca medie ± deviație standard. A fost utilizată ANOVA, completată de testul lui Bonferroni. Utilizarea acelorași litere reprezintă
; diferite litere reprezintă