Exerciții fizice și efecte de pierdere în greutate asupra factorilor de risc cardiovascular la bărbații supraponderali
Departamentul de Științe Biomedice, Facultatea de Sănătate și Științe Medicale, Universitatea din Copenhaga, Copenhaga, Danemarca
Adresa pentru cereri de reimprimare și alte corespondențe: M. Rosenkilde, Dept. de Științe biomedicale, Univ. din Copenhaga, Blegdamsvej 3, 2200 Copenhaga N, Danemarca (e-mail: [email protected]).
Departamentul de Științe Biomedice, Facultatea de Sănătate și Științe Medicale, Universitatea din Copenhaga, Copenhaga, Danemarca
Departamentul de Științe Biomedice, Facultatea de Sănătate și Științe Medicale, Universitatea din Copenhaga, Copenhaga, Danemarca
Departamentul de Științe Biomedice, Facultatea de Sănătate și Științe Medicale, Universitatea din Copenhaga, Copenhaga, Danemarca
Departamentul de Medicină Clinică, Facultatea de Sănătate și Științe Medicale, Universitatea din Copenhaga, Copenhaga, Danemarca
Rigshospitalet, Copenhaga, Danemarca
Departamentul de Științe Biomedice, Facultatea de Sănătate și Științe Medicale, Universitatea din Copenhaga, Copenhaga, Danemarca
Abstract
FIG. 1.Fluxul de participanți. C, control; D, dietă; T, instruire; T-iD, dieta crescută în antrenament.
Mostre de sânge.
Probele de sânge arterializate au fost colectate în tuburi cu gheață și centrifugate imediat (4.000 rpm la 4 ° C timp de 10 minute), iar plasma a fost izolată și depozitată la -80 ° C până la analiză. Tuburile pentru măsurarea TC, LDL-C, HDL-C, apoA1, apoB și TG conțineau heparină (10 μl/ml) și tuburi pentru măsurarea oxidării pre-β-HDL și LDL-C conțineau EDTA (10%, 15 μl/ml).
Lipide și lipoproteine plasmatice.
Nu s-au efectuat adăugări de inhibitori LCAT și niciun alt pretratament. Plasma TC, LDL-C, HDL-C și TG au fost analizate enzimatic (Cobas; Roche Diagnostics, Mannheim, Germania). apoA1 și apoB au fost testate utilizând o procedură imunoturbidimetrică determinată de un modul P Roche Modular Analytics (SWA) Modul P (Roche Diagnostics) în conformitate cu specificațiile producătorului și folosind reactivi corespunzători.
Pentru a izola lipoproteinele, 1 ml de plasmă a fost supusă ultracentrifugării pentru a obține VLDL-C (d 2+ și măsurată prin monitorizarea formării dienelor conjugate. Cinetica oxidării LDL-C a fost determinată prin monitorizarea modificării absorbanței. O sută cincizeci de microlitri de LDL-C (100 μg/ml) a fost plasat într-o microplacă cu 96 de godeuri (Costar UV-Transparent Microplates; A. Daigger, Vernon Hills, IL), iar oxidarea a fost inițiată prin adăugarea a 16,7 μl de CuSo4 (25 μmol/l). Absorbanța fiecărei godeuri a fost monitorizată continuu la 234 nm la intervale de 2,5 min timp de 10 ore la 26 ° C folosind un cititor de plăci cu software-ul KC 4 (Bio-Tek Instruments, Copenhaga, Danemarca). Toate probele au fost efectuate cu dublă determinare și probele de la fiecare subiect au fost efectuate în același test.
Absorbanta vs. profilul de timp a fost împărțit în trei faze, faza de întârziere, faza de propagare și faza de descompunere (10), iar oxidabilitatea LDL-C este descrisă de diferiții parametri ai profilului. Cantitatea maximă de diene conjugate formate în LDL-C a fost estimată ca valoarea maximă a absorbanței (10). Rata maximă de oxidare a fost calculată ca panta curbei în timpul fazei de propagare liniară. Timpul de întârziere a fost estimat trasând o linie perpendiculară pe X-axă de la intersecția celor două linii drepte trasate prin fazele de întârziere și propagare ale curbei de absorbție (9). CV-urile dintre determinările duble au fost de 3,8, 4,3, 2,4, pentru timpul de întârziere, rata maximă de oxidare și, respectiv, absorbția maximă.
Pre-β-HDL.
Pre-β-HDL a fost cuantificat în fracțiile HDL-C prin imunoelectroforeză încrucișată (31). În prima dimensiune a electroforezei, lipoproteinele cu mobilitate α și β au fost separate. Electroforeza a fost efectuată în gel de agaroză 1% (în greutate/vol) (Agarose HSA Litex, Glostrup, Danemarca), dimensiunea 10 × 20 cm și tampon barbital (pH 8,6; Regiunea Hovedstadens Apotek, Herlev, Danemarca). Plasma a fost diluată de 10 ori cu H2O și aplicată la 7,5 μl/godeu. Prima dimensiune a rulat 5,5 cm timp de 45 de minute la 300 V. Urmărirea lipoproteinelor din primul gel a fost excizată în felii de 1 cm și mutată în film GelBond (Cambrex, East Rutherford, NJ), dimensiunea 10 × 10 cm. Șaizeci de mililitri de gel de agaroză 1% au fost amestecați la maximum 56 ° C cu 250 pl de apoA1 anti-uman policlonal de iepure (Dako, Glostrup, Danemarca). Banda de gel a fost recoaptă cu gelul de agaroză topită care conține anticorpul. A doua electroforeză de dimensiune a fost condusă la echilibru la 4 ° C la 80 V în tampon barbital (pH 8,6). Antigenii lipoproteinici separați din primul gel de agaroză au migrat în al doilea gel de agaroză și au precipitat cu anticorpul. Gelul a fost spălat în H2O și presat, iar complexele apoA1-imunoglobulină au fost colorate cu Brilliant Blue Coomassie (5%, Region Hovedstadens Apotek) înainte de uscare.
Toate probele au fost rulate în duplicat. Probele de pre și postintervenție de la fiecare subiect au fost efectuate în același timp. CV între determinările duble a fost de 19,0% pentru pre-β-HDL. Orbite pentru intervenție, zonele de sub curbele imunoprecipitate au fost măsurate de trei ori după colorare utilizând software-ul Leica IM50 Image Manager (Leica Microsystems, Wetzlar, Germania). CV-ul mediu pentru măsurători triple a fost de 3,4%. CV-ul pentru vârfurile α a fost de 0,8%, iar CV-ul pentru vârfurile pre-β a fost de 6,2%. Zonele pre-β-HDL sunt exprimate ca procent din suma apoA1 prezentă în zonele pre-β-HDL și α-HDL. Concentrațiile pre-β-HDL sunt, de asemenea, date în cantități absolute (grame de apoA1 prezent în particulele pre-β-HDL pe litru de plasmă) calculate ca g/l.
Analize statistice.
Datele descriptive de pre și postintervenție sunt descrise ca medii ± SD. Diferențele în cadrul grupurilor sunt descrise ca medii cu intervale de încredere 95% (CI) pe două fețe și între grupuri ca mijloace pătrate cel mai mic ajustate cu CI 95% pe două fețe. Modificările din interiorul grupului au fost evaluate utilizând o pereche t-test, și pentru a evalua efectele principale ale intervenției, diferențele între grupuri au fost evaluate utilizând analiza covarianței cu valori postintervenție ca variabile dependente și valori de bază și atribuirea grupului ca covariabile. Toate comparațiile în perechi au fost ajustate folosind procedura Tukey. Asocierile dintre scorurile de bază și scorurile de modificare au fost evaluate utilizând analiza corelației Pearson. O subanaliză neajustată a fost efectuată folosind un instrument nepereche t-test pentru a compara modificările TC, LDL-C, HDL-C și TG pe parcursul intervenției pentru persoanele cu dislipidemie vs. concentrațiile normolipidemice la momentul inițial (22). Nivelul de semnificație a fost ales ca −1 · kg −1) a crescut ca o consecință a antrenamentului atât în T, cât și în T-iD comparativ cu C