Efectul de reglementare al chemerinei și eficacitatea terapeutică a chemerinei - 9 în diabetul pancreatogen

  • Journal Home
  • Problemă actuală
  • Numărul următor
  • Cele mai citite
  • Cele mai citate (dimensiuni)
    • Ultimii doi ani
    • Total
  • Cele mai citate (CrossRef)
    • Anul trecut 0
    • Total
  • Rețele sociale
    • Luna trecuta
    • Anul trecut
    • Total
  • Arhiva
  • informație
  • Trimiterea online
  • Informații pentru autori
  • Editarea limbii
  • Informații pentru recenzori
  • Politici editoriale
  • Bord editorial
  • Obiective și domeniu de aplicare
  • Abstractizare și indexare
  • Informații bibliografice
  • Informații pentru bibliotecari
  • Informații pentru agenții de publicitate
  • Reimprimări și permisiuni
  • Contactați editorul
  • Informatii generale
  • Despre Spandidos
  • Conferințe
  • Oportunități de muncă
  • a lua legatura
  • Termeni si conditii
  • Autori:
    • Jianfeng Tu
    • Yue Yang
    • Jingzhu Zhang
    • Guotao Lu
    • Lu Ke
    • Zhihui Tong
    • Maimaitijiang Kasimu
    • Dejun Hu
    • Qiuran Xu
    • Weiqin Li

  • Acest articol este menționat în:

    Abstract

    Introducere

    Materiale și metode

    Studii la pacienți

    Pacienții cu T2DM (n = 110) sau PDM (n = 113) au fost recrutați între ianuarie 2016 și decembrie 2019 în Departamentul de endocrinologie și Centrul pentru pancreatită acută severă (SAP) de la Spitalul Jinling, Facultatea de Medicină a Universității Nanjing. Probele de sânge de la populații sănătoase, care sunt dificil de colectat, nu au fost incluse, deoarece scopul acestui studiu a fost de a investiga rolul chemerinei-9 în DM. Pacienții cu T2DM au fost 69 de bărbați și 41 de femei cu o vârstă medie de 48,6 ± 2,1 ani. Pacienții cu PDM au fost 82 bărbați și 31 femei cu o vârstă medie de 45,3 ± 1,8 ani. Diagnosticul T2DM sau PDM a fost verificat în conformitate cu Comitetul de experți pentru diagnosticul și clasificarea diabetului zaharat (12). Cauza principală a PDM a fost fie pancreatita acută, fie cea cronică. Pentru a evalua asocierea dintre nivelurile de chemerină și starea IR, pacienții cu T2DM sau PDM au fost împărțiți în două grupuri, cu (IR> 1) și fără (IR≤1) IR, iar probele de ser (10 ml) au fost colectate pentru ulterior Analiza ELISA. Consimțământul informat scris pentru utilizarea probelor de ser a fost obținut de la toți pacienții înscriși în acest studiu. Studiul a fost aprobat de Comitetul de Etică al Spitalului Jinling (Nanjing, China).

    eficacitatea

    Test ELISA

    Nivelurile serice de chemerină (ml063020 pentru șoareci, ml058526 pentru om) și glucoză serică (ml057865 pentru șoareci, ml063205 pentru om) și insulină (DCM076-8) au fost analizate folosind kitul ELISA de la Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd IL-1 (SEA057Mu) și TNF-α (SEA133Mu) au fost analizate kituri ELISA de la Cloud-Clone Corp.

    Studii pe animale

    Tabelul I.

    Compoziția dietei normale (martor) și bogată în grăsimi pentru șoarecii C57BL/6.

    Tabelul I.

    Compoziția dietei normale (martor) și bogată în grăsimi pentru șoarecii C57BL/6.

    Compoziție Alimente normale (%) Alimente bogate în grăsimi (%)
    Amidon 52.4 0
    Zaharoza 4.9 45,0
    Proteină 18.9 23.0
    Gras 6.0 20.0
    Celuloză 3.8 5.0
    Vitamine 5.8 1.5
    Minerale 8.2 5.5

    Pentru a evalua impactul agonistului CMKLR1, chemerin-9, asupra PDM, injecții peritoneale de soluție tampon fosfat (PBS, 200, l, grup de control, n = 8) sau chemerin-9 (4 µg în 200 µl PBS, n = 8) sau au fost efectuate în fiecare zi timp de 42 de zile, după cum s-a descris anterior (17). Probele de sânge au fost colectate în zilele 0 și 42. Protocoalele experimentale in vivo pe animale au fost aprobate de Comitetul de etică al spitalului Jinling (Nanjing, China).

    Extracția ARN și transcrierea inversă-PCR cantitativă (RT-qPCR)

    ARN-ul total din probele de țesut pancreatic (40 mg) a fost extras folosind reactiv TRIzol® (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), conform protocolului producătorului. qPCR a fost efectuat ulterior utilizând amestecul SYBR Green PCR Master, inclusiv transcriptază inversă, tampon, dNTP (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.), conform protocolului producătorului. Ciclarea termică a RT-qPCR a fost stabilită ca: 95 ° C timp de 5 minute, 95 ° C timp de 10 sec și 60 ° C timp de 20 sec, repetat timp de 40 de cicluri. Grundurile au fost obținute de la compania Tiangen Biotech. Următoarele perechi de exemple au fost utilizate pentru qPCR: PDX1 înainte, 5'-GCGAGATGCTGGCAGACCTCT-3 'și invers, 5'-GGCAGACCTGGCGGTTCACAT-3'; GLUT2 înainte, 5′-CAATTTCATCATCGCCCTCT-3 ′ și invers, 5′-TGCAGCAATTTCGTCAAAAG-3 ′; și β-actină înainte, 5'-TCACTGAGGATGAGGTGGAAC-3 'și inversă, 5'-TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG-3'. Metoda 2-CQ a fost utilizată pentru a analiza expresia relativă a ARNm (18). β-actina a fost utilizată ca control intern de referință. Nivelurile relative ale ARNm au fost normalizate la gena de referință internă β-actină.

    Colorarea H&E

    Țesuturile pancreatice au fost fixate în soluție de formalină 10% timp de 24 de ore la temperatura camerei și au fost prelucrate prin prepararea histologică de țesut de rutină. Toate exemplarele au fost încorporate în ceară și secționate la 4 µm. Secțiunile au fost colorate cu hematoxilină (0,5%, 5 minute la temperatura camerei) și eozină (0,5%, 1 min la temperatura camerei) pentru examen histologic patologic.

    FPG și nivelurile de insulină, glucoza postprandială și modelul homeostatic de evaluare a rezistenței la insulină (HOMA-IR)

    Nivelurile de glucoză și insulină au fost măsurate la șoareci în ziua 21 și 42 după post de 16 ore. Pentru glucoza postprandială, șoarecii de post au fost injectați cu 1-1,5 mg/g de glucoză, iar probele de sânge au fost colectate după 120 de minute. Concentrațiile de glucoză și insulină serice au fost determinate folosind teste ELISA. După obținerea nivelului de glucoză și insulină în repaus alimentar, HOMA-IR a fost calculat conform următoarei formule: HOMA-IR = [glucoză în repaus alimentar (nmol/l) × insulină în repaus alimentar (µU/l)]/22,5.

    analize statistice

    Analizele statistice au fost efectuate folosind software-ul SPSS versiunea 22.0 (IBM Corp.) și GraphPad Prism versiunea 5.0 (GraphPad Software, Inc.). Datele cantitative sunt prezentate ca medie ± SEM cu cel puțin trei repetări independente. Semnificația statistică între grupuri a fost determinată folosind testul t Student sau ANOVA unidirecțional cu testul Tukey HSD (Diferența semnificativă sincer) post hoc. P1 a prezentat un nivel semnificativ redus de chemerină (P1 a avut un nivel semnificativ mai scăzut de chemerină în comparație cu cei cu IR ≤1 (P