Efecte protectoare ale ciupercii albe (Agaricus bisporus) împotriva steatozei hepatice în

Divizia de afiliere a biologiei celulelor tumorale, Institutul de Cercetare Beckman din Orașul Speranței, Duarte, California, Statele Unite ale Americii

Divizia de afiliere a bioinformaticii, Institutul de cercetare Beckman din City of Hope, Duarte, California, Statele Unite ale Americii

Departamentul de afiliere pentru patologie, Institutul de cercetare al orașului Hope, Duarte, California, Statele Unite ale Americii

Departamentul de afiliere pentru biologie moleculară și celulară; Institutul de cercetare Beckman din City of Hope, Duarte, California, Statele Unite ale Americii

Divizia de afiliere a biologiei celulelor tumorale, Institutul de cercetare Beckman al orașului Hope, Duarte, California, Statele Unite ale Americii, Divizia de bioinformatică, Institutul de cercetare Beckman al orașului Hope, Duarte, California, Statele Unite ale Americii, Departamentul de patologie, Institutul de Cercetare al Orașului Speranței, Duarte, California, Statele Unite ale Americii, Departamentul de Biologie Moleculară și Celulară; Institutul de cercetare Beckman din City of Hope, Duarte, California, Statele Unite ale Americii

Noriko Kanaya,
Makoto Kubo,
Zheng Liu,
Peiguo Chu,
Charles Wang,
Yate-Ching Yuan, Shiuan Chen

Cifre

Abstract

Citare: Kanaya N, Kubo M, Liu Z, Chu P, Wang C, Chen Y-CYS (2011) Efectele protectoare ale ciupercilor cu buton alb (Agaricus bisporus) împotriva steatozei hepatice la șoarecii ovariectomizați ca model al femeilor aflate în postmenopauză. PLOS ONE 6 (10): e26654. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0026654

Editor: Franky L. Chan, Universitatea chineză din Hong Kong, Hong Kong

Primit: 31 august 2011; Admis: 30 septembrie 2011; Publicat: 25 octombrie 2011

Finanțarea: Această activitate a fost susținută de subvenții obținute de SC de la Institutul Național de Sănătate (ES08258) și de la Consiliul SUA pentru Ciuperci și Asociația Australiană a Cultivatorilor de Ciuperci (SC). Finanțatorii nu au avut nicio regulă în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscriselor.

Interese concurente: Autorii au declarat că nu există interese concurente.

Introducere

Boala hepatică grasă nealcoolică (NAFLD) este cea mai frecventă boală hepatică la adulții din țările dezvoltate [1]. Se caracterizează prin acumularea excesivă de lipide hepatice și nu are legătură cu consumul de alcool. NAFLD include diverse patologii hepatice, de la steatoza hepatică la steatohepatita nealcoolică (NASH), fibroză și ciroză. NAFLD este asociat cu sindromul metabolic, care a fost caracterizat prin obezitate, diabet de tip 2, hipertensiune arterială și hipertrigliceridemie la șoareci [1], [2]. De asemenea, ciroza este un factor de risc pentru dezvoltarea hipertensiunii portale, a carcinomului hepatocelular și a insuficienței hepatice [1]. S-a sugerat că estrogenul oferă un efect protector asupra dezvoltării NAFLD la femei [3]. Prin urmare, femeile aflate în postmenopauză prezintă un risc mai mare de a dezvolta NAFLD datorită unui nivel mai scăzut de estrogen circulant [3]. Datorită duratei medii de viață crescute, generațiile actuale de femei se pot aștepta să își petreacă cel puțin o treime din viață în starea postmenopauză [4]. Liniile directoare dietetice și stilul de viață pentru a reduce greutatea corporală totală pot ajuta la evitarea NAFLD, cu toate acestea, nu există medicamente specifice pentru tratarea acestei boli hepatice [5].

Materiale și metode

Pregătirea dietei WBM

WBM au fost liofilizate la un conținut de umiditate constant și apoi măcinate printr-o plasă fină. Măsurători microbiologice și alte măsurători analitice au fost efectuate pe probe/loturi combinate pentru a asigura calitatea pulberii WBM pentru cercetare. HFD martor (45% (greutate/greutate) dietă grasă) și HFD modificat pentru a conține pulbere WBM liofilizată au fost produse și achiziționate de la Research Diets, Inc. (New Brunswick, NJ) (Tabelul 1). Pentru un studiu de dovadă a conceptului pentru a furniza date definitive, dieta a fost compusă din 120 g de pulbere WBM/kg de HFD, o doză similară cu cea utilizată anterior pentru a evalua efectul dietei cu ciuperci Mukitake pentru NAFLD [9]. Mai mult, această doză terapeutică de WBM s-a dovedit că suprimă creșterea cancerului de sân dependent de estrogen și aromatază pozitivă în laboratorul nostru, utilizând un model de șoareci nud [10].

Design experimental pentru mouse

Toate procedurile de cercetare a animalelor au fost aprobate de comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor (IACUC) din City of Hope pentru evaluarea și acreditarea îngrijirii animalelor de laborator și au fost în conformitate cu orientările NIH. Tulpina de reproducție C57Bl/6J a fost obținută de la Jackson Labs. Toate animalele au fost adăpostite la Centrul de Resurse Animale City of Hope în rafturi cușcă ventilate, au avut acces gratuit la apă și au fost întreținute pe un ciclu de lumină/întuneric de 12 ore. Au fost respectate toate orientările instituționale pentru îngrijirea și utilizarea animalelor. Protocolul pentru acest studiu a fost aprobat de IACUC (numărul protocolului: 08047).

Pentru a crea un model de șoarece de femei aflate în postmenopauză, șoarecii C57B1/6J femele în vârstă de șapte săptămâni au fost ovariectomizate (OVX, n = 16). Acești șoareci OVX produc doar estrogen din situri extragonadale și sunt folosiți pe scară largă ca model al femeilor aflate în postmenopauză [4], [15]. Șoarecii martor (fals, n = 16) au fost supuși unei intervenții chirurgicale de supraviețuire. Șoarecii fals au fost supuși aceleiași proceduri chirurgicale generale ca șoarecii OVX, cu excepția îndepărtării ovarelor. Șoarecii au fost apoi împărțiți în două grupuri dietetice, cu opt șoareci per grup: HFD sau HFD + WBM. Dietele au fost începute la o săptămână după operație și au continuat timp de 3 luni. Proiectul de hrănire a perechii a fost utilizat pentru a controla aportul de alimente. Alimentele au fost cântărite zilnic, iar grupul de control a primit aceeași cantitate de alimente (în greutate) o zi mai târziu ca grupul WBM pentru a asigura un aport caloric identic între grupuri. La încheierea experimentului, șoarecii au fost posti timp de 4 ore înainte de sacrificiu. Sângele șoarecilor a fost colectat prin puncție cardiacă. După ce șoarecii au fost eutanasiați, s-au recoltat probe de ficat.

Analiza patologică

Ficăcii au fost recoltați de la șoareci și au fost măsurate greutățile umede. Țesuturile au fost fixate cu 10% formalină peste noapte și apoi încorporate în parafină. Secțiunile de cinci micrometri au fost tăiate și colorate cu hematoxilină și eozină și examinate cu microscopul luminos.

Măsurarea enzimelor hepatice

Probele de sânge au fost colectate la sfârșitul fiecărui experiment prin puncție cardiacă și centrifugate la 4000 rpm timp de 10 minute pentru a obține ser. Nivelurile serice de alanină aminotransferază (ALT) au fost măsurate de compania de diagnosticare Antech (Irvine, CA).

Test de toleranță la glucoză

Testele de toleranță la glucoză au fost efectuate la 2 luni după începerea dietei de tratament. Șoarecii au fost posti cu acces gratuit la apă potabilă timp de 18 ore înainte de test. Nivelurile inițiale de glucoză au fost înregistrate pentru fiecare șoarece. Șoarecii au fost provocați cu o cantitate de glucoză de 1,5 mg glucoză/g greutate corporală. Nivelurile de glucoză pre, 30, 60, 120 și 180 min după injectare au fost măsurate cu ajutorul unui glucometru (Bayer, Germania).