Acidul tanic ca polifenol derivat din plante exercită vasoprotecție prin îmbunătățirea expresiei KLF2 în

Subiecte

Abstract

Factorul de transcripție Kruppel-like factor 2 (KLF2) este o moleculă antiinflamatorie și anti-aterogenă critică din endoteliul vascular. Îmbunătățirea expresiei și activității KLF2 îmbunătățește funcția endotelială și previne ateroscleroza. Cu toate acestea, regulatorii farmacologici și moleculari pentru KLF2 sunt puțini. Folosind testul reporterului cu luciferază de mare viteză pentru a depista activatorii KLF2, am identificat acidul tanic (TA), un compus polifenolic, ca un activator puternic KLF2 care atenuează inflamația endotelială. Studiile mecaniciste au sugerat că TA a indus expresia KLF2 în parte prin calea ERK5/MEF2. Funcțional, TA a redus semnificativ aderența monocitelor la EC prin reducerea expresiei moleculei de aderență VCAM1. Folosind EC pulmonare izolate din Klf2 +/ + și Klf2 +/ - șoareci, am arătat că efectul antiinflamator al TA este dependent de KLF2. Colectiv, rezultatele noastre demonstrează că TA este un puternic activator KLF2 și TA atenuată inflamația endotelială prin reglarea în sus a KLF2. Descoperirile noastre oferă un mecanism nou pentru efectele cardiovasculare benefice bine stabilite ale TA și sugerează că KLF2 ar putea fi o țintă terapeutică nouă pentru bolile vasculare aterosclerotice.

derivat

Introducere

Pe baza acestor studii, modularea expresiei sau funcției KLF2 ar putea fi o strategie nouă pentru prevenirea și tratamentul bolilor inflamatorii, inclusiv ateroscleroza 2, 6, 9. Astfel, scopul acestui studiu este de a selecta activatorii cu molecule mici care modulează expresia KLF2. Pe baza testului pe bază de luciferază, am identificat că o moleculă mică acid tanic (TA) a fost un activator KLF2 nou. TA este o formă comercială specifică de tanin (un tip de polifenol vegetal). Studiile anterioare au arătat că TA a redus formarea leziunii aortice în Apo E -/- șoareci 19. Cu toate acestea, acțiunea antiinflamatorie a TA în EC nu a fost încă investigată. În prezentul studiu, oferim dovezi că TA induce expresia endotelială KLF2 și astfel atenuează inflamația endotelială vasculară. Colectiv, constatările noastre nu numai că au identificat TA ca un activator KLF2 nou, dar au demonstrat și că KLF2 ar putea servi drept țintă terapeutică promițătoare pentru tratamentul aterosclerozei.

Materiale și metode

Cultură de celule

Celulele COS-7 (ATCC, Rockville, MD) au fost cultivate în DMEM (Corning, Cellgro®, SUA) conținând 10% ser fetal bovin (FBS) (Gibco). HCAEC (# 300K-05A, Cell Applications Inc., San Diego, CA) au fost cultivate în mediul de creștere celulară Meso Endo (Cell Applications Inc.) conținând 10% FBS și supliment de creștere (# 212K-500, Cell Applications Inc.) 20 . Pasajul 4-6 al celulelor HCAEC au fost utilizate pentru experimente. Celulele endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEC) au fost izolate din cordoanele ombilicale de la femeile cu sarcină normală, în conformitate cu procedurile consiliului de revizuire a subiecților umani de la Universitatea din Rochester care prescriu Declarația de la Helsinki 20 Miezurile ombilicale umane sunt obținute sub consimțământul informat al tuturor participanților și sunt conforme cu standardele HIPAA pentru a proteja confidențialitatea informațiilor personale de sănătate ale donatorului. HUVEC au fost cultivate în mediu 200 (# M-200-500, Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA) conținând 10% FBS și supliment de creștere cu ser redus (LSGS) (# S-003-10, Thermo Fischer Scientific). Pasajele 3-6 din HUVEC au fost utilizate pentru experimente. Celulele THP-1 (ATCC) au fost crescute în RPMI 1640 conținând 10% FBS. EC pulmonare au fost menținute în DMEM conținând 20% FBS, penicilină/streptomicină și heparină. Toate celulele au fost cultivate la 37 ° C cu 5% CO2 într-un incubator de celule.

Transfecția celulară și activitatea genei raportoare de luciferază

Biblioteca de medicamente a fost obținută de la University of Rochester Pathway Discovery Resource (NCI Spectrum Compound Library) conținând 2400 de compuși chimici, 1 mM pentru fiecare compus). -1,7-kb KLF2-Plasmida reporter luciferază (KLF2-luc) condusă de promotorul luc, plasmidele mutante promotor KLF2 -221bp de tip sălbatic (WT) și promotorul KLF2 -221bp au fost înzestrate de Prof. Mukesh Jain 21. Plasmida KLF2 -221 conține situs de legare MEF2 în timp ce în plasmida mutantă KLF2 -221, situsul de legare MEF2 a fost mutat.