USP18 (D4E7) Rabbit mAb

Analiza Western blot a extractelor din celule THP-1, netratate sau tratate cu LPS (1 µg/ml, 24 ore), utilizând USP18 (D4E7) Rabbit mAb.

Imunoprecipitarea USP18 din extracte de THP-1 tratate cu TPA (12-O-Tetradecanoilforbol-13-Acetat) # 4174 (80nM peste noapte) și Lipopolizaharide (LPS) # 14011 (1μg/mL peste noapte). Banda 1 este 10% intrare, banda 2 este USP18 (D4E7) Rabbit mAb, iar banda 3 este Rabbit (DA1E) mAb IgG XP ® Isotype Control # 3900. Analiza Western blot a fost realizată utilizând USP18 (D4E7) Rabbit mAb. IgG anti-iepure, anticorpul legat de HRP # 7074 a fost utilizat ca anticorp secundar.

USP18 (D4E7) Rabbit mAb 4813

USP18 D4E7 Rabbit

Analiza Western blot a extractelor din celule THP-1, netratate sau tratate cu LPS (1 µg/ml, 24 ore), utilizând USP18 (D4E7) Rabbit mAb.

Imunoprecipitarea USP18 din extracte de THP-1 tratate cu TPA (12-O-Tetradecanoilforbol-13-Acetat) # 4174 (80nM peste noapte) și Lipopolizaharide (LPS) # 14011 (1μg/mL peste noapte). Banda 1 este 10% intrare, banda 2 este USP18 (D4E7) Rabbit mAb, iar banda 3 este Rabbit (DA1E) mAb IgG XP ® Isotype Control # 3900. Analiza Western blot a fost efectuată utilizând USP18 (D4E7) Rabbit mAb. IgG anti-iepure, anticorpul legat de HRP # 7074 a fost utilizat ca anticorp secundar.

  • Reprezentantul local
  • Informațiile dvs. locale de cumpărare
  • Garantează anticorpii
  • FAQ
  • Suport tehnic
  • Date suport
  • produse asemanatoare
  • Utilizarea produsului
  • Protocoale
  • fundal
  • Căi și proteine
  • Referințe și recenzii

Date suport

REACTIVITATE H
SENSIBILITATE Endogen
MW (kDa) 34, 39
Sursă/izotip Iepure IgG

Cheie de aplicare:

  • W-Occidental
  • IP-Imunoprecipitare
  • IHC-Imunohistochimie
  • CIP-Imunoprecipitarea cromatinei
  • DACĂ-Imunofluorescența
  • F-Citometrie în flux
  • E-P-ELISA-peptidă

Cheia de reactivitate încrucișată a speciilor:

  • H-Uman
  • M-Șoarece
  • R-Război
  • Hm-Hamster
  • Mk-Maimuţă
  • Noi-Nurcă
  • C-Pui
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • -Bovin
  • Dg-Câine
  • Pag-Porc
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • HR-Cal
  • Toate-Toate speciile așteptate
ISG15 Anticorp # 2743
Phospho-Stat1 (Tyr701) (58D6) Rabbit mAb # 9167
ISG15 (22D2) Rabbit mAb # 2758
Stat1 (9H2) Mouse mAb # 9176
Stat1 Anticorp # 9172
Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb # 72604
Kitul ELISA FastScan ™ Phospho-Stat1 (Tyr701) # 40716
Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb # 88410
Rig-I (D14G6) Rabbit mAb # 3743
Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb # 14994

Informații despre utilizarea produsului

Diluarea aplicației
Western Blotting 1: 1000
Imunoprecipitare 1:50

Depozitare

Livrat în 10 mM sodiu HEPES (pH 7,5), 150 mM NaCI, 100 μg/ml BSA, 50% glicerol și mai puțin de 0,02% azidă de sodiu. A se păstra la –20 ° C. Nu alicotați anticorpul.

Protocol

Protocolul Western Blotting

Pentru Western blots, incubați membrana cu anticorp primar diluat în 5% greutate/volum BSA, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 la 4 ° C cu agitare ușoară, peste noapte.

NOTĂ: Vă rugăm să consultați pagina web a produsului anticorp primar pentru diluarea recomandată a anticorpilor.

A. Soluții și reactivi

De la pregătirea eșantionului până la detectare, reactivii de care aveți nevoie pentru Western Blot sunt acum într-un singur kit convenabil: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

NOTĂ: Pregătiți soluții cu osmoză inversă deionizată (RODI) sau apă de calitate echivalentă.

B. Blotarea proteinelor

Un protocol general pentru prepararea probei.

  1. Tratați celulele prin adăugarea de medii noi care conțin regulator pentru timpul dorit.
  2. Aspirați mass-media din culturi; spălați celulele cu 1X PBS; aspirat.
  3. Lizați celulele adăugând 1X tampon de probă SDS (100 perl per godeu de placă cu 6 godeuri sau 500 (l pentru o placă de 10 cm diametru). Îndepărtați imediat celulele de pe placă și transferați extractul într-un tub de microcentrifugă. Păstrați pe gheață.
  4. Sonicați timp de 10-15 secunde pentru a finaliza liza celulară și tăiați ADN-ul (pentru a reduce vâscozitatea probei).
  5. Se încălzește un eșantion de 20 de probe la 95-100 ° C timp de 5 minute; rece pe gheață.
  6. Microcentrifuga timp de 5 min.

Încărcați 20 de ontol pe gelul SDS-PAGE (10 cm x 10 cm).

NOTĂ: Se recomandă încărcarea markerilor de greutate moleculară preconizați (# 13953, 5 µl/bandă) pentru a verifica electrotransferul și scara de proteine ​​biotinilate (# 7727, 10 µl/bandă) pentru a determina greutățile moleculare.

  • Electrotransfer la membrana de nitroceluloză (# 12369).

    • C. Blocarea membranei și incubațiile de anticorpi

    NOTĂ: Volumele sunt pentru membrană de 10 cm x 10 cm (100 cm 2); pentru membrane de dimensiuni diferite, reglați volumele în mod corespunzător.

    I. Blocarea membranei

    1. (Opțional) După transfer, spălați membrana de nitroceluloză cu 25 ml TBS timp de 5 minute la temperatura camerei.
    2. Se incubează membrana în 25 ml de tampon de blocare timp de 1 oră la temperatura camerei.
    3. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.

    II. Incubația primară a anticorpilor

    1. Incubați membrana și anticorpul primar (la diluarea și diluantul adecvat, așa cum se recomandă în pagina web a produsului) în 10 ml tampon de diluare a anticorpului primar cu agitare ușoară peste noapte la 4 ° C.
    2. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    3. Incubați membrana cu IgG anti-iepure, anticorp legat de HRP (# 7074 la 1: 2000) și anti-biotină, anticorp legat de HRP (# 7075 la 1: 1000–1: 3000) pentru a detecta markeri de proteine ​​biotinilate în 10 ml de tampon de blocare cu agitare ușoară timp de 1 oră la temperatura camerei.
    4. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    5. Continuați cu detectarea (secțiunea D).