Un decoct din plante antice din China care conține Angelicae Sinensis Radix, Astragali Radix, Jujuba

1 Departamentul de Bioinginerie, Universitatea Medicală Zunyi, Campusul Zhuhai, Zhuhai, Guangdong, 519041, China

2 Gansu Institute for Drug Control, Lanzhou, Gansu, 730070, China

3 Laboratorul cheie Shenzhen pentru resurse comestibile și medicinale, SRI, Universitatea de Știință și Tehnologie din Hong Kong, Shenzhen, 518057, China

4 Divizia de Științe ale Vieții, Centrul de Medicină Chineză, Universitatea de Știință și Tehnologie din Hong Kong, Clear Water Bay, Hong Kong

5 Departamentul de biologie, Universitatea Hanshan Normal, Chaozhou, Guangdong 521041, China

Abstract

1. Introducere

Obezitatea este caracterizată ca țesuturi adipoase anormale sau excesiv acumulate, despre care se crede că sunt induse de mai mulți factori, inclusiv genetic și ecologic. Incidența obezității crește și devine un fenomen normal atât în țările în curs de dezvoltare, cât și în țările dezvoltate, ceea ce reprezintă o mare provocare pentru profesioniștii din domeniul sănătății. Persoanele obeze ar putea suferi riscuri ridicate de anomalii metabolice, diabet și mai multe tipuri de boli de cancer [1, 2]. Tratamente terapeutice anti-obezitate au fost propuse de zeci de ani. Limitarea aportului de carbohidrați se credea cea mai eficientă strategie pentru antiobezitate; cu toate acestea, sa raportat că acest tratament are un impact negativ asupra dezvoltării mentale [3, 4]. Pe de altă parte, efectele secundare ale medicamentelor sintetice populare pentru slăbit, de exemplu, fentermină-topiramat și lorcaserin, ameliorează în mod obișnuit riscurile sindromului hepatorenal și duc la reducerea calității vieții pacientului [5].

Există două tipuri de țesuturi adipoase găsite în corpul uman, adică țesuturile adipoase albe (WAT) și țesuturile adipoase maronii (BAT). Funcțiile majore ale WAT sunt încălzirea izolației, tamponarea pernei mecanice și, în cele din urmă, stocarea energiei. WAT acționează ca combustibil pentru dezechilibrele energetice atunci când energia de intrare este mai mică decât producerea de energie; prin urmare, WAT este considerat o componentă crucială în contribuția obezității [6]. BAT, pe de altă parte, accelerează cheltuielile de energie și combate în cele din urmă obezitatea [7, 8]. Exercițiul fizic este una dintre rutinele tipice de a pierde în greutate și de a remodela corpul grăbind rumenirea WAT și stimulând oxidarea acizilor grași [9]. Nivelul ridicat de expresie a proteinei de decuplare mitocondrială 1 (UCP1) este un semn distinctiv al rumenirii WAT [9]. Mai mult, receptorul activat cu proliferatorul peroxizomului (PPARγ) și receptorul activat cu proliferatorul peroxizomului-coactivatorul gamma 1 (PGC1α) sunt doi factori transcripționali în modularea expresiilor genelor legate de adipogen, care sunt foarte exprimate în BAT [10]. Pe de altă parte, carnitina palmitoil transferaza I A (CPT1A) și genele lipazei sensibile la hormoni (HSL) pot spori activitățile mitocondriale și pot stimula oxidarea acizilor grași și, prin urmare, sunt clasificate drept semnătura oxidării acizilor grași [11].

Un amestec de plante vechi, scris de Chen Suan din dinastia Song (1155 d.Hr.) în „Chensuan Fuke Buji”, se știe că îmbunătățește „Qi” și „Blood”, denumite Danggui Buxue Tang (DBT1155). DBT1155 compune patru ierburi: Angelicae Sinensis Radix (ASR), Astragali Radix (AR), Jujuba Fructus (JF) și Zingiberis Rhizoma Recens (ZRR) într-un raport de greutate de 36: 30: 15: 20. Funcțiile antioxidante ale curcuminei ZRR îmbogățit au fost raportate pe scară largă, iar această formulă pe bază de plante sa dovedit a avea acumularea de antilipide în studiul nostru preliminar. Astfel, funcțiile antiobezității DBT1155 în adipocite 3T3-L1 cultivate au fost testate aici.

2. Materiale și metode

2.1. Pregătirea extractului de plante

Ierburile crude ale rădăcinii de Astragali membranaceus var. mongholicus (AR), rădăcină de Angelica sinensis (Măslin) Diels. (ASR), rod al Ziziphus jujuba CV. Jinsixiaozao (JF) și rizomul Zingiber officinale Roscoe (ZRR; ghimbir) au fost colectate și identificate în 2013. Specimenul de voucher de AR, ASR, JF și ZRR a fost păstrat în Centrul pentru Medicină Chineză din HKUST. AR, ASR, JF și ZRR într-un raport de greutate de 36: 30: 15: 20 au fost utilizate pentru a pregăti decoctul DBT1155. Amestecul a fost fiert în 8 volume de apă de două ori. Cincizeci de grame de ZRR au fost, de asemenea, fierte în apă de două ori, fiecare cu 8 volume de apă. Această pregătire a fost verificată în studiile anterioare [20, 21]. Toate probele au fost uscate prin liofilizare și resuspendate în apă la o concentrație finală de 100 mg/ml, care au fost menținute la -80 ° C.

2.2. Analiza HPLC și cuantificări chimice

2.3. Culturi celulare

Celulele fibroblaste de șoarece 3T3-L1 (CL-173) au fost obținute de la ATCC (Manassas, VA) și menținute la 37 ° C într-un incubator saturat cu apă conținând 5% CO2 și în DMEM suplimentat cu 4,5 g/L glucoză, 10% FBS, 100 U/ml penicilină și 100 μg/mL streptomicină. Inducerea diferențierii lipogene a fost detaliată într-un studiu anterior [24]. Pe scurt, celulele cultivate au fost tratate cu dexametazonă (1 μM, Sigma-Aldrich, St Louis, MO), insulină (1,8 μM, Sigma-Aldrich) și dibutril-cAMP (300 μM, Sigma-Aldrich) timp de 72 de ore pentru a induce lipogeneza. Culturile au fost stabilite ca ziua 0 și înlocuite cu mediul de cultură care conține insulină (1,8 μM) la fiecare două zile. În ziua 10, aproximativ 80% din culturi au fost induse să conțină trigliceride. Tratamente, inclusiv control negativ (doar 0,02% DMSO), cocktail (1,8 μM de rosiglitazonă și triiodotironină), concentrație scăzută de DBT (DBT-L, 0,125 mg/mL) și concentrație mare de DBT (DBT-H, 1,0 mg/mL) au fost date culturilor diferențiate (în ziua 10) timp de 72 de ore . Dacă nu se descrie altfel, toți reactivii de cultură au fost cumpărați de la Invitrogen Technologies (Waltham, MA).

2.4. Viabilitatea celulei

Viabilitatea celulară a fost măsurată prin testul MTT. Pe scurt, celulele au fost cultivate într-o placă cu 96 de godeuri. După tratamentele medicamentoase pentru duratele indicate, soluția MTT a fost adăugată în culturi în concentrația finală de 0,5 mg/ml; după incubare timp de 2 ore, producția de cristal purpuriu a fost dizolvată prin solvent DMSO. A fost măsurată absorbanța la 570 nm.

2.5. Ulei Roșu O colorare

Uleiul roșu O la 0,2% în izopropanol a fost filtrat. Celulele experimentale cultivate au fost spălate cu PBS, fixate cu paraformaldehidă (4% în PBS, Sigma-Aldrich) timp de 5 min, incubate cu colorare Oil Red O timp de 30 min și spălate de două ori cu PBS. Triglicerida colorată (TG) a fost rezolvată în izopropanol și măsurată la absorbția de 490 nm [24].