Transferul hepatocelular și recircularea Sorafenib-Glucuronidului este dependent de Abcc2, Abcc3,

  • Găsiți acest autor pe Google Scholar
  • Găsiți acest autor pe PubMed
  • Căutați acest autor pe acest site
  • Pentru corespondență: [email protected]

Abstract

Introducere

În acest studiu, ne-am propus să înțelegem procesele care stau la baza transferului hepatocitelor glucuronide sorafenib, excreția biliară și reciclarea intestinală utilizând modele in vitro și in vivo și, astfel, să elucidăm mecanismele care contribuie la variabilitatea farmacocinetică interindividuală a sorafenibului.

hepatocelular

Materiale și metode

Transportul vezicular in vitro

Veziculele din celulele Sf9 (Life Technologies) care exprimă șoarece Abcc2 (mAbcc2), șobolan Abcc2 (rAbcc2), ABCC2 uman (ABCC2), ABCC3 uman (ABCC3) sau ABCC4 uman (ABCC4) au fost incubate cu sorafenib (10 μmol/L; Chemie Tek) sau SG (10 μmol/L) timp de 5 minute în prezența sau absența ATP (4 mmol/L) sau rifampicină (100 μmol/L), apoi lizate cu 0,1 mol/L HCl și analizate prin cromatografie lichidă- spectrometrie de masă tandem (LC/MS-MS; ref. 20). Transportul dependent de ATP al sorafenibului și SG a fost determinat prin scăderea transportului dependent de AMP din transportul dependent de ATP, ambele exprimate în pmol/min/mg, după normalizarea transportului nespecific observat în veziculele martor. Experimentele de captare au fost efectuate la o concentrație de 10 μmol/L, care este echivalentă cu concentrațiile medii de starea de echilibru plasmatică de sorafenib realizabile la adulți și copii tratați cu 400 mg sau 200 mg/m2 de două ori pe zi (9, 21).

Animale

Șoarecii Abcc4 -/- pe un fundal C57BL/6 au fost generați și crescuți intern la St. Jude Children's Research Hospital (Memphis, TN) și șoareci Abcc2 -/- pe un fundal FVB au fost furnizate de Taconic. Toate celelalte tulpini knock-out pe un fundal FVB au fost generate și crescute intern la Institutul Olandez al Cancerului (Amsterdam, Olanda). Analizele PCR în timp real au demonstrat că expresia transportatorilor relevanți de medicamente nu s-a modificat substanțial în niciuna dintre aceste tulpini knock-out (Tabelul suplimentar S1). Prin urmare, a fost exclusă posibilitatea unor modificări compensatorii majore în expresia transportorului care afectează interpretarea rezultatelor. Șobolani Abcc2 -/- pe un fundal Sprague-Dawley au fost obținuți de la Sage Labs. Șoarecii și șobolanii au fost adăpostiți într-un mediu controlat de temperatură, cu un ciclu de lumină de 12 ore și li s-a dat o dietă standard și apă ad libitum. Experimentele au fost aprobate de Comitetele instituționale de îngrijire și utilizare a animalelor din St. Spitalul de cercetare pentru copii Jude și Institutul olandez al cancerului.

Studii farmacocinetice plasmatice

Farmacocinetica sorafenibului și SG la șoareci de tip sălbatic și Abcc2 -/-. Concentrația plasmatică - profiluri de timp (A și D) și raportul ficat-plasmă (B și E) ale sorafenibului și respectiv SG, la șoareci femele de tip sălbatic și Abcc2 -/-. Sorafenib a fost administrat pe cale orală la o doză de 10 mg/kg. Ficatele au fost luate la 2 și 7,5 ore după administrarea sorafenibului (n = 4 per grup). Concentrațiile în ficat (CL) au fost normalizate la concentrațiile corespunzătoare în plasmă (Cp). C și F, raporturi de concentrație bilă-plasmă ale sorafenibului și respectiv SG, la șoareci de tip sălbatic și Abcc2 -/-. Sorafenib (10 mg/kg) a fost administrat oral cu 30 de minute înainte de începerea colectării bilei (N = 3 de tip sălbatic; N = 2 șoareci Abcc2 -/-). Bilele au fost colectate timp de 2 ore. Datele reprezintă media ± SE.

ABCC2 mediază excreția biliară a SG

Pentru a determina dacă aceste fenotipuri au fost observate și la o altă specie, farmacocinetica sorafenibului a fost evaluată la șobolanii de tip sălbatic și Abcc2 -/-. Deficitul de Abcc2 la șobolani a dus la o creștere de aproximativ 2 ori a nivelului plasmatic atât al sorafenibului (Fig. 3A), cât și al sorafenib-N-oxidului (Fig. 3B). Totuși, în mod neașteptat, SG nu a fost detectat în plasmă sau bilă, nici de șobolan de tip sălbatic, nici de Abcc2 -/- (fig. 3C) Studiile de metabolism ex vivo au indicat faptul că, comparativ cu șoarecii și oamenii (9), microsomii ficatului de șobolan nu au o capacitate semnificativă de a forma SG (Fig. 3D). Aceste rezultate indică faptul că șobolanul este un model inadecvat pentru farmacocinetica umană a sorafenibului. Mai mult, implicarea ABCC2 în transportul sorafenibului nemodificat poate deveni din ce în ce mai importantă atunci când glucuronoconjugarea este defectă, posibilitate care este în concordanță cu datele clinice recente (10). Colectiv, datele indică faptul că excreția biliară a SG este mediată în principal de ABCC2 și, prin urmare, este un factor determinant important al farmacocineticii SG.

Transportul sinusoidal al SG este afectat de deficiența Abcc2 și Abcc3

Dispunerea sorafenibului a fost apoi evaluată la șoareci Oatp1a/1b; Abcc2 -/- și Oatp1a/1b; Abcc2; Abcc3 -/-. În conformitate cu constatările noastre la șoarecii unici Abcc2 -/-, am constatat că ștergerea Abcc2 în combinație cu ștergerea Oatp1a/1b a dus la o creștere foarte mare a expunerii plasmatice a SG în comparație cu șoarecii de tip sălbatic (909 ori), dar și în comparație cu șoarecii Oatp1a/1b -/- (de 12,7 ori; Fig. 4D; Tabelul suplimentar S2). La 2 ore, nivelurile hepatice ale SG au fost de 1,8 ori mai mari la șoarecii Oatp1a/1b; Abcc2 -/- în comparație cu șoarecii de tip sălbatic (Fig. 4E). Ca urmare a nivelurilor plasmatice crescute de SG, raporturile ficat-plasmă au scăzut la toți șoarecii knockout transportori, comparativ cu șoarecii de tip sălbatic (Fig. 4F). Aceste descoperiri susțin un rol important pentru Abcc2 în excreția biliară a SG și că ștergerea Abcc2 în plus față de deficiența de Oatp1a/1b duce la o creștere majoră a extruziunii sinusoidale a acestui metabolit înapoi în circulație.