Suplimentarea compusă a tabletei de α-cetoacizi ameliorează progresia bolii cronice a rinichilor prin
Abstract
fundal
Administrarea ceto-analogilor joacă un rol important în terapia complementară a bolii renale cronice cronice (CKD), cu toate acestea, studiile anterioare privind efectul lor reno-protector s-au concentrat în principal pe modificările patologice renale induse de nefrectomie. Acest studiu a fost conceput pentru a investiga mecanismele alternative subevaluate în prezent prin care comprimatele compuse α-cetoacide (KA) au influențat leziunile renale murine induse de ischemie - reperfuzie (IR) și pentru a testa starea actuală a administrării KA în ceea ce privește progresia CKD staving la pacienții cu CKD chinezi în diferite etape.
Metode
În experimentul pe animale, intervenția chirurgicală IR a fost efectuată pentru a imita leziunile renale cronice progresive, în timp ce KA a fost administrat pe cale orală. Pentru cercetarea clinică, a fost realizat un studiu de cohortă retrospectiv pentru a delimita utilizarea și efectele KA asupra atenuării exacerbării CKD. Evenimentul CKD al punctului final a fost definit ca o reducere cu 50% a ratei inițiale estimate de filtrare glomerulară (eGFR). Analiza Kaplan - Meier și modelul de regresie proporțională a pericolului COX au fost adoptate pentru a calcula probabilitatea cumulată de a atinge punctul final și raportul de pericol al deteriorării funcției renale.
Rezultate
Într-un studiu pe animale, KA a prezentat un efect protector asupra leziunilor renale și fibrozei induse de IR prin atenuarea infiltrării inflamatorii și a apoptozei prin inhibarea căilor factorului nuclear-kappa B (NF-κB) și a protein kinazei activate de mitogen (MAPK). În cercetările clinice, după ajustarea factorilor demografici de bază, pacienții din stadiile 4 și 5 din grupul KA au prezentat o incidență mult mai întârziată și mai lentă a scăderii eGFR comparativ cu cei din grupul fără KA (raport de risc (HR) = 0,115, interval de încredere de 95% (CI) 0,021-0,639, = 0,0134), demonstrând un efect pozitiv al KA asupra staving progresia CKD.
Concluzie
KA a îmbunătățit leziunea renală cronică indusă de IR și fibroza și a părut a fi un factor de protecție prospectiv în boala renală în stadiu final.
fundal
Boala renală cronică (CKD) a devenit o problemă crucială în domeniul sănătății publice datorită modificărilor și complicațiilor sale patologice progresive, ireversibile, inclusiv anemie, dislipidemie și hiperparatiroidism. Studiile anterioare au demonstrat că metabolismul proteinelor, care provine în principal din dieta zilnică, este implicat în majoritatea acestor modificări patologice adverse [1]. Astfel, intervenția dietetică cu aport restricționat de proteine a fost propusă ca o strategie terapeutică extrem de importantă pentru a întârzia declinul progresiv al funcției renale și dezvoltarea CKD.
Modelul de leziune a ischemiei-reperfuziei renale (IR) conferă avantajul observării reparației renale după leziuni renale acute, în timp ce imită ischemia renală tranzitorie în cazuri clinice, cum ar fi insuficiența multiplă de organ și transplantul pre-renal, oferind astfel o perspectivă asupra supraviețuirii alogrefelor după transplantul de rinichi [ 15, 16]. Terapia ceto-analogilor cu LPD asigură un aport suficient de aminoacizi esențiali fără risipa de proteine și excesul de producție și acumulare de toxine metabolice. Înțelegerea în continuare a mecanismului său de acțiune în CKD ar fi benefică pentru extinderea aplicațiilor sale.
În acest studiu, am adoptat un model IR pentru a investiga mecanismul molecular al tabletelor compuse α-cetoacide (KA) în bolile renale din unghiul inflamației și apoptozei. Suplimentarea cu KA a inhibat căile factorului nuclear-kappa B (NF-κB) și a protein-kinazei activate cu mitogen (MAPK), rezultând o ameliorare a inflamației și apoptozei, reducând astfel progresia CKD. Experimentul pe animale a oferit dovezi suplimentare pentru a susține efectele reno-protectoare ale KA în CKD, așa cum s-a văzut în cercetarea noastră clinică.
Metode
Animale
Șoareci masculi C57BL/6 în vârstă de 2 luni (cântărind 25 g) au fost cumpărați de la Beijing Huafukang Laboratory Animal Technology Co., Ltd, Beijing, China și au fost aclimatizați timp de 1 săptămână. Șoarecii au fost anesteziați cu pentobarbital de sodiu 1% (0,01 mL/g, Sigma, SUA) prin injecție intraperitoneală. Chirurgie IR: rinichii bilaterali ai șoarecilor au fost strânși în 26 de minute (Roboz Surgical Instrument Co, Germania). Fluxul sanguin renal a fost restabilit în câteva secunde după îndepărtarea clemei de arteră murină. Operații întregi au fost efectuate la 36,6 ° C - 37,2 ° C folosind o mașină de control al temperaturii (FHC, SUA). Animalele au fost împărțite în trei grupe: Sham, IR + Nacl, IR + KA, n = 4-6/grup. Șoarecii din grupul fals au fost supuși aceleiași intervenții chirurgicale, cu excepția clampării vaselor renale. Șoarecii din grupul IR + Nacl au fost supuși unei intervenții chirurgicale IR și au fost tratați cu Nacl. Șoarecii din grupul IR + KA au fost operați cu intervenție chirurgicală IR și tratați cu KA (FreseniusKabi, Germania). Ambii rinichi au fost recoltați la 28 de zile după operația IR. Toate experimentele au fost aprobate de Comitetul de îngrijire și utilizare a animalelor din Spitalul Tongji (numărul IACUC: S851) și efectuate în conformitate cu orientările NIH.
Pregătirea și administrarea KA și LPD
Tabletele α-cetoacide compuse au fost confecționate printr-un amestec de 0,375 g α-cetoacid la 6 mL 0,9% Nacl, la o concentrație finală de 62,5 mg/mL și au fost administrate prin gavaj gastric. Concentrația de administrare a fost de 1000 mg per kg de greutate de șoarece pe zi. LPD a fost furnizat de WQJX BIO-Technology (Wuhan, China). Dieta a fost compusă din cazeină (6,5%), amidon (66,45%), glucoză (10%), ulei de soia (7%), fibrină (5%), sare minerală (3,5%), vitamină (1%), l -cistină (0,3%) și clorură de colină (0,25%) în conformitate cu dieta de rozătoare a Asociației Dietetice Americane, cu o calorie de 3,5 kcal/g pentru a satisface necesarul de energie. În grupul IR + KA, șoarecii au fost tratați cu KA și LPD. În comparație, șoarecii din grupul IR + Nacl au fost tratați cu 0,9% Nacl și LPD.
Detectare BUN, TC și TG
Azotul uree din sânge (BUN), colesterolul total (TC) și trigliceridele (TG) au fost testate folosind kituri (Changchunhuili, China) conform instrucțiunilor producătorului.
Colorare histologică, imunocitochimică și imunofluorescentă
Rinichii bilaterali ai șoarecilor au fost fixați în paraformaldehidă 4% și încorporați în parafină. Rinichii încorporați cu parafină au fost secționați la 3 μm. Colorarea patologică pentru colorarea periodică cu acid-Schiff (PAS) și roșu Sirius au fost efectuate pentru a evalua gradul de leziune tubulară renală și fibroza interstițială. Pentru colorarea imunofluorescentă (IF), secțiunile au fost colorate cu anticorp primar Kim-1 (1: 800; R&D), lectină tetragonolobus de lotus (LTL, 1: 100, Vector Lab), actină musculară alfa-netedă (α-SMA, 1: 100, Abcam), Colagen I (1: 100, Abcam), CD45 (1:50, Biolegend), CD3 (1:50, Guge, Wuhan) și Ly6G (1:50, Biolegend) la 4 ° C peste noapte și fluorescente anticorpi secundari marcați. Nucleii au fost colorați cu 4'-6-diamidino-2-fenilindol (DAPI). Datele au fost analizate de software-ul Image Pro Plus (Media Cybemetics, Rockville, MD, SUA) într-un mod orbit.