Quercetina ameliorează hiperalgezia generalizată la șoarecii cu adenomioză indusă
Jichan Nie
Departamentul de Ginecologie, Obstetrică și Ginecologie Spitalul Universității Fudan, Universitatea Fudan, Shanghai 200011, P.R. China
Xishi Liu
Departamentul de Ginecologie, Obstetrică și Ginecologie Spitalul Universității Fudan, Universitatea Fudan, Shanghai 200011, P.R. China
Abstract
Introducere
Adenomioza este o tulburare ginecologică frecventă caracterizată prin glande endometriale heterotopice și stroma în miometru. Afectează frecvent femeile cu vârsta cuprinsă între 30-50 de ani (1) și cauzează adesea dismenoree, menoragie, metroragie, uter mărit difuz și dispareunie, precum și infertilitate (2,3). Cu toate acestea, mecanismele exacte ale durerii induse de adenomioză sunt încă necunoscute. Prin urmare, tratarea adenomiozei este o provocare majoră. În prezent, terapiile chirurgicale și medicale sunt tratamentul obișnuit al adenomiozei. Pentru adenomioza severă, simptomatică, histerectomia este alegerea tratamentului (4), care poate fi traumatică pentru femeile care doresc să conceapă. În consecință, terapiile medicale, cum ar fi danazolul și agonistul de eliberare a gonadotropinei, sunt importante pentru pacienții care doresc să rămână gravide. Cu toate acestea, dovezile au arătat că există mai multe limitări ale acestor tratamente, inclusiv perioada lungă de tratament, evenimentele adverse severe și recurența frecventă (5). Prin urmare, sunt necesare studii suplimentare privind dezvoltarea unor terapii medicale mai eficiente.
Quercetina (3,3 ′, 4 ′, 5,7-pentahidroxiflavona; greutate moleculară, 302 g/mol), un flavonoid bioactiv este prezent pe scară largă în diverse fructe și legume, inclusiv ceapa, iar cele mai studiate surse primare de quercetină sunt broccoli, mere, culturi de boabe și struguri, și este, de asemenea, în anumite plante, ceai și vin (6,7). Dovezile emergente au demonstrat că quercetina are beneficii potențiale pentru tratamentul cancerului și endometriozei fără acțiuni adverse evidente, cu activități anti-cancerigene, antiinflamatoare, antivirale, anti-oxidante și psiho-stimulante, precum și capacitatea de a inhiba lipidele. peroxidarea, agregarea trombocitelor și permeabilitatea capilară și pentru stimularea biogenezei mitocondriale (8,9). Cu toate acestea, mecanismul de bază al quercetinei care atenuează hiperalgezia generalizată a adenomiozei rămâne slab înțeles. Prin urmare, sunt necesare studii bine concepute pentru a evalua efectul quercetinei asupra adenomiozei.
Obiectivul acestui studiu este de a evalua efectul quercetinei la șoarecii cu regiune de control a amprentării (ICR) cu adenomioză. S-a urmărit investigarea dacă tratamentul cu quercetină a îmbunătățit durerea și a suprimat infiltrarea miometrială a implanturilor endometriale. Am emis ipoteza că quercetina poate reduce hiperalgezia și, de asemenea, poate suprima infiltrația miometrială a endometrului ectopic la șoareci cu adenomioză indusă. Pentru a elucida mecanismul molecular al tratamentului cu quercetină, nivelurile anumitor mediatori importanți în durere, inclusiv receptorul tranzitoriu potențial canal cationic subfamilia V membru 1 (Trpv-1), fosfo (p) -p38 proteină kinază activată cu mitogen (MAPK) și kinaza p-extracelulară reglementată de semnal (ERK), au fost determinate. Studiul nostru anterior a demonstrat că acidul valproic (VPA), un inhibitor al histonei deacetilazei, a îmbunătățit hiperalgezia generalizată și a redus infiltrarea miometrială (10). Prin urmare, VPA a fost utilizat ca indicator pozitiv în prezentul studiu.
Materiale și metode
Produse chimice
Quercetina și VPA (sare de sodiu VPA, nr. Cod P4543) au fost achiziționate de la Sigma-Aldrich (Merck KGaA, Darmstadt, Germania). Toate aceste medicamente au fost dizolvate în 2% dimetil sulfoxid în 0,1 M Na2S04 ajustat la pH 5,0. Citratul de tamoxifen a fost achiziționat de la Fudan Forward Pharmaceutical Company (Shanghai, China).
Animale și tratamente
Șoarecii ICR nou-născuți (ziua 1 după naștere; n = 43) și șoarecii mama lor de naștere (n = 10) au fost cumpărați de la Shanghai Laboratory Animal Corporation (Shanghai, China). Fiecare șoarecă mamă și descendenții ei au fost adăpostiți într-o cușcă în condiții controlate (
20 ° C, ciclu de lumină/întuneric 12:12) și avea acces gratuit la alimente și apă proaspătă.
În urma protocolului Green și colab. (11) și Parrott și colab. (12), șoarecilor nou-născuți li s-a administrat oral 1 mg/kg tamoxifen suspendat în amestec de ulei de arahide/lecitină/lapte condensat (2: 0,2: 3, în volum) la un volum de doză de 5 pl/g greutate corporală din ziua 2 până în ziua 5 după naștere. Șoarecii neonatali de control femele (n = 9), desemnați aleatoriu, au fost hrăniți cu cantitatea echivalentă de solvent, fără tamoxifen. Când șoarecii aveau vârsta de 3 săptămâni, au fost înțărcați și separați de mame, iar șoarecii femele au continuat ca parte a studiului.
Toate experimentele au fost efectuate în conformitate cu ghidurile Consiliului Național de Cercetare Ghidul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator (13) și aprobate de comisia instituțională de examinare a animalelor experimentale din Spitalul de obstetrică și ginecologie din Shanghai, Universitatea Fudan (Shanghai, China).
Protocol de experiment
Șoarecii neonatali dozați cu tamoxifen așa cum s-a descris (n = 34) și 9 șoareci martori au fost dozați numai cu solvent. Începând de la 4 săptămâni după naștere, un șemineu a fost administrat tuturor șoarecilor la fiecare 4 săptămâni, iar greutatea corporală a fost, de asemenea, măsurată și înregistrată. La 16 săptămâni după naștere, toți șoarecii cărora li s-a administrat tamoxifen au fost împărțiți în mod aleatoriu în 4 grupuri, fiecare primind un anumit tratament prin administrare intragastrică zilnică timp de 3 săptămâni după cum urmează: Grupul L (n = 9) a primit o doză mică (25 mg/kg) greutate corporală) tratament cu quercetin; Grupul H (n = 9) a primit un tratament cu quercetină cu doze mari (50 mg/kg greutate corporală); Grupa V (n = 8) a primit tratament VPA (160 mg/kg greutate corporală); Grupul U (n = 8), sau grupul netratat, a primit numai vehiculul. Grupul de șoareci (n = 9) care au fost administrați neonatal numai cu solventul, au fost desemnați ca grup C, nu au primit deloc tratament și au servit drept martor gol. Dozele acestor medicamente au fost determinate pe baza studiilor noastre anterioare și a altor studii (10,14-18).
După cele 3 săptămâni de tratament medicamentos, s-a efectuat testul final al plăcii fierbinți pentru toți șoarecii cu adenomioză indusă și s-a înregistrat și greutatea corporală. Toți șoarecii au fost anesteziați și perfuzați prin aorta ascendentă cu soluție salină caldă (37 ° C) urmată de o soluție caldă compusă din 4% paraformaldehidă și 0,2% acid picric în tampon fosfat 0,1 M. Perfuzia a fost apoi imediat urmată de același fixator (4 ° C). Uterele au fost apoi excizate și au fost post-fixate peste noapte la temperatura camerei în aceeași soluție de fixare, apoi încorporate în parafină pentru examen histopatologic și analiză imunohistochimică. Ganglionii rădăcinii dorsale L6 și S1 (DRG) au fost disecați și țesuturile au fost post-fixate în același fixator timp de 90 de minute la 4 ° C și apoi au fost scufundate în zaharoză 10% în tampon fosfat 0,1 M peste noapte.