Potențialul anti-cancer al unui amestec specific de fitonutrienți în celulele canceroase osoase CM; NH Journal
M.W. Roomi, dr.,
B. Bhanap M.D.,
Dr. A. Niedzwiecki și M. Rath, M.D.
Dr. Rath Research Institute, CA, SUA
Dr. Aleksandra Niedzwiecki
Dr. Rath Research Institute, 1260 Memorex Drive, Santa Clara, CA 95050, SUA
E-mail: [email protected]
Abstract
Condrosarcomul, o tumoare malignă de origine cartilaginoasă, este cel mai frecvent dintre cancerele osoase primare la adulți. Patruzeci la sută din cancerele osoase primare sunt condrosarcom. Cu toate acestea, deoarece condrosarcomul nu răspunde de obicei la radiații și chimioterapie, intervenția chirurgicală este principala opțiune de tratament. Mortalitatea prin cancer rezultă de obicei din metastaze locale și îndepărtate. Pe baza prognosticului slab al condrosarcomului, am investigat efectele unui amestec de fitonutrienți (PB) care conține quercetină, Cruciferex ™, curcumină, resveratrol și extract de ceai verde pe mai mulți parametri asociați cu dezvoltarea acestui tip de cancer.
Celulele condrosarcomului SW-1353 expuse la concentrații de PB de 10, 25, 50 și 100 pg/ml au fost testate pentru proliferarea/viabilitatea celulară, morfologia, secreția de matrice metaloproteinază (MMP), precum și abilitățile lor invazive și de migrare. Proliferarea celulară a fost realizată prin testul MTT, secreția MMP-urilor prin zimografie, invazia celulară prin testul Matrigel, migrația celulară prin testul zgârieturilor și morfologia prin colorarea H&E. PB a inhibat proliferarea celulară într-o manieră dependentă de doză începând cu concentrația de 25 ug/ml. Zimografia a demonstrat două benzi corespunzătoare MMP-2 și MMP-9 cu o expresie îmbunătățită a MMP-9 la tratamentul cu PMA. PB a inhibat expresia ambelor MMP într-o manieră dependentă de doză atât în celulele stimulate de PMA, cât și în celulele non-stimulate. Invazia Matrigel a fost total blocată la 25µg/ml. Colorarea H&E a arătat că amestecul de PB la 25 ug/ml până la 100 ug/ml a indus modificări apoptotice în celulele SW-1353. Inhibarea semnificativă a semnelor importante ale progresiei cancerului de către amestecul PB sugerează că această compoziție nutritivă ar trebui explorată în continuare ca agent terapeutic în condrosarcom.
Text complet
Euntroducere
Condrosarcomul, o tumoare malignă a celulelor cartilajului, afectează în principal adulții cu vârsta cuprinsă între 30 și 60 de ani. Conform estimărilor Societății Americane de Cancer, condrosarcomul a devenit cel mai frecvent cancer primar osos, reprezentând mai mult de 40% din cazurile de tumori osoase primare la adulți 1. Se dezvoltă în condrocite sau celule cartilaginoase și afectează în principal picioarele, brațele superioare, scapula, coastele și oasele pelvine. Deși etiologia exactă a condrosarcomului nu este cunoscută, se postulează că indivizii cu anumite anomalii genetice sau cromozomiale prezintă un risc crescut. Gradul și stadiul sunt cei mai importanți și independenți factori de prognostic pentru supraviețuirea în condrosarcom. Mortalitatea prin cancer rezultă de obicei din invazia tumorii și metastazele locale sau la distanță la organele vitale. Condrosarcomul de grad înalt are un prognostic mult mai slab, cu un procent calculat de 38% dintre pacienți care au atins supraviețuirea de 10 ani Recurența se bazează pe margini tumorale neregulate și leziuni mai mari de 10 cm.
Chirurgia este, în general, principala opțiune de tratament pentru condrosarcom, deoarece chimioterapia sau radioterapia nu sunt foarte eficiente și sunt rareori administrate în cazurile de metastaze extinse 3. Potențialul metastatic ridicat și rezultatele slabe asociate cu terapiile actuale necesită dezvoltarea unor alternative de tratament mai eficiente și mai puțin toxice.
Folosirea produselor naturale de sănătate pentru prevenirea, inhibarea și inversarea carcinogenezei a câștigat popularitate, deoarece dovezile științifice au demonstrat că consumul ridicat de fructe și legume este asociat cu un risc redus de diferite tipuri de cancer 4, 5. S-a raportat că diferiți polifenoli obținuți din plante oferă o gamă largă de proprietăți anticancerigene, cum ar fi modularea proliferării celulare, creșterea tumorii, angiogeneza, metastazele, în amonație și inducerea apoptozei. Cu toate acestea, majoritatea studiilor au fost efectuate cu polifenoli individuali, dintre care mulți au o biodisponibilitate slabă.
În studiul nostru, am folosit o combinație de mai mulți polifenoli pentru a obține efecte pleiotrope împotriva celulelor condrosarcom și pentru a modula biodisponibilitatea acestor compuși naturali prin interacțiunile lor. Potențialul anti-cancer al unui amestec de fitobiologice (PB) care conține quercetină, curcumină, ceai verde, cruciferex ™ și resveratrol a fost testat în celulele condrosarcomului uman SW-1353 prin evaluarea viabilității celulare, secreția MMP, invazia celulară, migrația și morfologia.
Metode și materiale
Liniile celulare canceroase și cultura
Linia de celule condrosarcom SW-1353 a provenit din American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) și a crescut în mediu modificat Dulbecco's Eagle suplimentat cu 10% ser fetal bovin, 100 U/ml penicilină și 100 μg/ml streptomicină (Gibco BRL, Long Island, NY) în plăci de cultură tisulară cu 24 de godeuri (Costar, Cambridge, MA). Celulele au fost incubate în 1 ml mediu la 37 ° C într-un incubator de culturi de țesut echilibrat cu 95% aer și 5% CO2. La aproape conflux, celulele au fost tratate cu PB dizolvat în mediu și testate în triplicat: 0, 10, 25, 50, 100 pg/ml. Celulele au fost, de asemenea, tratate cu acetat de mirorat de Phorbol (PMA) 100 ng/ml pentru a spori expresia MMP-9. Plăcile au fost apoi returnate la incubator.
Compoziția amestecului de fitonutrienți
Amestecul de substanțe nutritive (PB) a fost compus din următoarele cantități indicate: quercetin 400 mg; CruciferexTM 400 mg; curcumină 300 mg; resveratrol 50 mg și extract standardizat de frunze de ceai verde 300 mg, obținut de la US Pharma Lab. Certificatul de analiză a indicat următoarele caracteristici ale extractului de ceai verde: polifenol total 80%, catehine 60%, epigalocatechină galat (EGCG) 35% și cofeină 1,0%.
Testul MTT
Viabilitatea celulară a fost evaluată prin testul MTT, un test colorimetric bazat pe capacitatea celulelor viabile de a reduce o sare solubilă de tetrazoliu galben [3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) 2,5-difenil tetrazoliu bromură] (MTT) la un cristal albastru de formazan prin activitatea succinatului dehidrogenazei mitocondriale a celulelor viabile. Acest test este un bun indice de activitate mitocondrială și, prin urmare, de viabilitate celulară. După 24 de ore de incubație, celulele au fost spălate cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) și 500 pl de MTT (Sigma # M-2128); La fiecare godeu s-au adăugat 0,5 mg/ml în mediu. După adăugarea MTT (0,5 mg/ml) plăcile au fost acoperite și returnate la incubatorul la 37 o C timp de 2 ore, timpul optim pentru formarea produsului formazan. După incubare, supernatantul a fost îndepărtat cu grijă din godeuri, produsul formazan a fost dizolvat în 1 ml dimetil sulfoxid (DMSO) și absorbanța a fost măsurată la 570 nm în spectrometrul Bio Spec 1601, Shimadzu. OD570 al soluției DMSO din fiecare godeu a fost considerat a fi proporțional cu numărul de celule. OD570 al controlului (tratament fără supliment) a fost considerat 100%.