Oxidul nitric mediază feedbackul tubuloglomerular anormal la șobolanii hrăniți cu dietă bogată în NaCl după subtotal

Divizia de Nefrologie-Hipertensiune, VA San Diego Healthcare System și Universitatea din California, Școala de Medicină din San Diego, La Jolla, California

Adresa pentru cereri de reimprimare și alte corespondențe: S. C. Thomson, Div. de Nefrologie-Hipertensiune, VASDHS, 3350 La Jolla Village Dr., 9111H, San Diego, CA 92161 (e-mail: [e-mail protejat]).

Abstract

Protocoale de micropunctură.

În experimentele menite să testeze rolul macula densa NOS în TGF anormal, TGF a fost testat la unele nefroni folosind ATF standard și la alte nefroni unde blocantul NOS, N-monometil l-arginina (L-NMMA; 10-4 M) a fost adăugat la ATF. Astfel, au existat două perfuzii/colecții pe nefron în aceste experimente.

În experimentele concepute pentru a testa rolul cTGF în TGF anormal, răspunsurile TGF au fost măsurate în fiecare nefron înainte și în timpul adăugării de benzamil la perfuzat. Prin urmare, au existat patru perfuzii/colecții pe nefron. Acest lucru a fost realizat prin introducerea a două pipete de microperfuzie în aval de blocul de ceară. Una dintre aceste pipete conținea numai ATF, iar cealaltă conținea ATF plus benzamil (10 -5 M). Benzamilul este un puternic blocant ENaC (1) și răspunsurile TGF îmbunătățite în timpul microperfuziei benzamilului sunt testul obișnuit utilizat pentru a demonstra cTGF în rapoartele publicate (5, 8, 21, 22). După ce s-au făcut colectări de control al răspunsului TGF, bucla lui Henle a fost perfuzată cu benzamil și pipetele ATF s-au setat fiecare la 15 nl/min timp de 3-4 minute. În timpul stimulărilor TGF maxime și minime, pipeta benzamil a fost setată la 15 sau respectiv 8 nl/min, iar pipeta ATF a fost ajustată pentru a da rata de perfuzie totală adecvată. Pentru microanaliză, fiecare colecție de fluid tubular a fost transferată într-o pipetă de sticlă cu foraj constant pentru a măsura debitul proximal târziu (VLP). Apoi, proba a fost numărată pentru radioactivitate pentru a determina SNGFR.

Statistici.

Analiza statistică a fost efectuată de ANOVA, analiza covarianței (ANCOVA) și măsuri repetate ANOVA, după caz. Tratamentele administrate și animalele individuale au fost incluse ca variabile independente în regresii. Gradul de libertate de eroare a fost numărul de nefroni mai mic decât gradele de libertate model. Acest lucru este mai riguros decât ceea ce se face de obicei cu datele de micropunctură, care este de a atribui un grad de libertate fiecărui nefron și de a ignora posibila influență a eterogenității între animale. În cazul de față, ANOVA a confirmat absența efectelor între animale în ambele seturi de experimente, astfel încât același rezultat statistic ar fi putut fi obținut ignorând efectul animal. Analiza a fost efectuată utilizând software proprietar (Systat, Evanston, IL).

Efectele LNMMA asupra SNGFR și a răspunsului TGF.

Seria LNMMA a inclus 210 colecții de fluide tubulare proximale târzii de la șase animale STN HS și șase animale HS simulate. Toate animalele au fost hrănite cu o dietă HS din prima zi postoperatorie. Micropunctura s-a făcut în postoperator zilele 8-10. Polii rinichiului infarctați anterior au fost scarificați. Suprafața porțiunii neinfarctate a apărut sănătoasă, cu tuburi mărite și turgor bun pentru a facilita micropunctura. Histologia în acest stadiu al STN prezintă hipertrofie și hiperplazie tubulară și glomeruloscleroză ușoară (11).

Datele SNGFR sunt prezentate în Tabelul 1 și Fig. 1. Răspunsurile TGF au fost relativ omogene între animalele din fiecare grup ( = 0,87 din testarea ANOVA pentru diferența dintre animale în răspunsul TGF). În timpul stimulului TGF minim, SNGFR nu a fost semnificativ diferit între STN HS și Sham HS. În timpul stimulului TGF maxim, SNGFR a fost de două ori mai mare în STN HS decât în HS simulat (

Tabelul 1. Rezultatele SNGFR pentru experimentele LNMMA

Valorile sunt exprimate ca medii ± SE. (+) și (-) se referă la stimulul TGF maxim și minim. Avg- SNGFR la mijlocul punctului TGF. Răspuns TGF - schimbare în SNGFR atunci când stimulul TGF s-a redus de la maxim la minim.

* = 0,054 pentru răspunsul mediu TGF fiind negativ cu o coadă t-Test.

† = 0,0007 pentru efectul LNMMA în STN HS de către Student’s t-Test.

FIG. 1.Graficele liniare prezintă răspunsuri de feedback tubuloglomerular (TGF) pentru nefroni individuali atunci când bucla Henle este perfuzată cu sau fără LNMMA. TGF (+) denotă stimul maxim TGF. TGF (-) denotă un stimul minim al TGF. Graficele casetei Tukey arată cum se distribuie răspunsurile TGF în cadrul fiecărui grup. Modificarea ratei de filtrare glomerulară cu un singur nefron (ΔSNGFR) este diferența în SNGFR între TGF (-) și TGF (+). Un răspuns TGF este anormal dacă ΔSNGFR

Efectele benzamilului asupra SNGFR și a răspunsului TGF.

Seria benzamil a inclus 132 de colecții de fluide tubulare proximale târzii de la patru animale STN HS și patru animale Sham HS (patru colecții pe nefron). Datele SNGFR sunt prezentate în Tabelul 2 și Fig. 2. O matrice de corelație Pearson pentru cele patru măsurători SNGFR în cadrul fiecărui nefron este prezentată în tabelul 3. Efectele benzamilului asupra SNGFR nu au fost diferite între animale ( = 0,99 și = 0,97 pentru eterogenitatea între animale în STN HS sau Sham HS). Cele patru colecții pe nefron din aceste experimente au inclus răspunsuri TGF înainte și în timpul benzamilului în fiecare nefron pentru a optimiza puterea statistică pentru a detecta efectele benzamilului prin asociere. ANOVA bidirecțional cu design pentru măsuri repetate a fost făcut pentru a testa efectele asupra răspunsului TGF al STN HS față de Sham HS (porțiunea ANOVA între subiecți) și pentru efectele benzamilului (porțiunea ANOVA din cadrul subiectului). Efectul între subiecți al STN HS a confirmat că TGF a fost suprimat sau paradoxal în STN HS în raport cu Sham HS ( = 0,002). Pentru porțiunea subiecților din ANOVA, nu a existat niciun efect semnificativ al benzamilului asupra răspunsului global TGF ( = 0,3) și niciun efect semnificativ al benzamilului asupra diferenței în răspunsul TGF între STN HS și Sham HS ( = 0,4).

Tabelul 2. Rezultatele SNGFR pentru experimentele cu benzamil

Valorile sunt exprimate ca medii ± SE. (+) și (-) se referă la stimulul TGF maxim și minim. Avg- SNGFR la punctul mediu TGF. Răspuns TGF - schimbare în SNGFR atunci când stimulul TGF s-a schimbat de la maxim la minim.