Opistorhiaza cu citokine proinflamatorii (IL-1β și TNF-α) polimorfismele influențează riscul de
Abstract
fundal
Inflamație cronică și infecție repetată cu Opisthorchis viverrini (O. viverrini) induce colangiocarcinom intrahepatic (ICC). Citokinele inflamatorii precum interleukina (IL) și factorul de necroză tumorală (TNF) sunt substanțe din sistemul imunitar care promovează inflamația și determină progresul bolii. Genele care ajută la exprimarea citokinelor proinflamatorii pot afecta susceptibilitatea unui individ la boli, în special în inflamația cronică legată de cancer. Acest studiu a avut ca scop investigarea factorilor de risc pentru ICC, cu accent pe opistorhiază și polimorfisme ale citokinelor proinflamatorii (IL-1β și TNF-a).
Metode
Acest studiu a fost un studiu de caz-control imbricat în cadrul unui studiu de cohortă. 219 de subiecți care au dezvoltat o CPI primară au fost identificați și asortați cu două controale non-canceroase din aceeași cohortă pe baza sexului și vârstei la recrutare (± 3 ani). Un O. viverrini-Anticorpul IgG a fost evaluat utilizând testul imunosorbent legat de enzime. IL-1β și TNF-a polimorfismele au fost analizate folosind o reacție în lanț a polimerazei cu analiză de topire de înaltă rezoluție. Asocierile între variabile și ICC au fost evaluate utilizând regresia logistică condițională.
Rezultate
Subiecții cu o intensitate mare a infecției au avut un risc mai mare de ICC decât cei care au avut un nivel scăzut (OR = 2,1; IC 95%: 1,2-3,9). Subiecți cu toate genotipurile de TNF-a (GG, GA, AA) și intensitatea mare a infecției au fost semnificativ legate de un risc crescut de ICC (
fundal
Rata de incidență a colangiocarcinomului intrahepatic (ICC) în nord-est - cea mai mare incidență din Thailanda - din ultimul raport, Cancer in Thailand, Vol. VII, 2007–2009, a arătat că este cel mai frecvent cancer la bărbați (rata de incidență standardizată în funcție de vârstă, ASR = 67,1 la 100.000) și al treilea cancer cel mai frecvent la femei (ASR = 30.9). În Khon Kaen, situat în nord-estul Thailandei, incidența CPI este de 57,4 ASR la bărbați și de 23,1 la femei la 100 000 [1].
Metode
Design de studiu
Acest studiu a făcut parte dintr-un studiu mai amplu cunoscut sub numele de Khon Kaen Cohort Study (KKCS), care a fost efectuat anterior [17,18,19,20]. Aceasta a fost o platformă adecvată pentru a testa ipoteza asupra riscului de influență a interacțiunii gazdă-mediu a ICC. Pe scurt, subiecții pozitivi ai ICC (ICD-10: 22.1) și un eșantion de controale neafectate care au fost participanți înscriși la KKCS au fost folosiți în aceste experimente.
Subiecte de studiu
Dintre cei 23.584 de subiecți admiși în KKCS (bărbați 32,6%: femei 67,4%), au fost identificați 219 participanți la cohortă (0,9%) care au dezvoltat o malignitate primară a canalelor biliare intrahepatice ale ficatului (C22.1) femeie 43,0%). Deoarece ICC este rar diagnosticată prin biopsie hepatică și histopatologie (6,9%), criteriile de includere ca caz au inclus diagnostic cel puțin prin ultrasunete, cu sau fără radiologie de contrast (9,6%) și markeri tumorali precum CA19-9 (83,5%) . Starea vitală și data decesului pentru potențialele cazuri au fost stabilite prin legătura cu dosarul deceselor din Thailanda, în baza de date a Oficiului Național pentru Securitate în Sănătate (NHSO), împreună cu baza de date demografice a Ministerului de Interne. Toate cazurile ICC au murit în decurs de 2 ani de la diagnostic. Două controale non-canceroase din aceeași populație de cohortă au fost selectate aleatoriu pentru potrivirea cu fiecare caz în funcție de sex și vârstă la recrutare (± 3 ani).
Detectarea O. viverrini-Anticorpi IgG
Detectarea O. viverrini-Anticorpul IgG a fost evaluat la laboratorul parazitologic, Facultatea de Medicină, Universitatea Khon Kaen, Thailanda. Enzima indirectă legată de testul imunosorbent (ELISA) a fost utilizată pentru a analiza un ser de cazuri și controalele corespunzătoare ale acestora, după cum sa raportat anterior [21, 22]. Probele au fost analizate ca duplicate cu densitatea optică (DO) la 620 nm sub cititorul ELISA. OD medie a fost utilizată ca valoare limită, OD ≤0.24 și OD> 0.24.
Analiza IL-1β și TNF-a polimorfisme
ADN-ul genomic a fost extras din fracțiuni de acoperire cu tampon de 170 de cazuri (77,6%) din 219 de cazuri ICC eligibile și 355 (81,0%) din 438 de controale potrivite utilizând protocoalele standard ale mini-kitului de ADN genomic cu proteineza K (Geneaid Biotech).
Amplificarea IL-1β C-511 T s-a realizat utilizând doi grunduri, [F]: 5'- AATTTCTCAGCCTCCTACTTC-3 'și [R]: 5'- GTTTGGTATCTGICCGTTTC-3'. TNF-a Gena G308A a fost amplificată utilizând [F]: 5'- TAGGTTTTGAGGGGCATG -3 'și [R]: 5'- CTGGGICCCTGACTGATTT-3' într-o reacție PCR. Ambele polimorfisme genetice au fost efectuate într-un sistem LightCycler® 480 Real-Time PCR System cu un volum final de 20 μl conținând 10 μl amestec master, 4,4 μl H2O, 3 mM MgCl2, 0,3 μM din fiecare primer și 200 ng ADN șablon. Datele analizei de topire de înaltă rezoluție au fost analizate folosind LightCycler 480® Gene Scanning Software versiunea 1.5 (Roche). Curbele de topire normalizate și vârfurile de topire ale variației secvenței au fost evaluate și comparate cu eșantionul de tip sălbatic. Diferite parcele de vârfuri de topire sunt ilustrate în Fig. 1a pentru IL-1β C-511 T și Fig. 1b pentru TNF-a G-308A. Variațiile secvenței s-au distins prin forma diferită a curbelor de topire (Fig. 1c pentru IL-1β C-511T și Fig. 1d pt TNF-a G-308A). Pentru a îmbunătăți calitatea și validarea genotipării, 10% din probele de genotipare aleatorii au fost confirmate prin PCR cu tehnici de polimorfism de lungime a fragmentului de restricție (PCR-RFLP).