O combinație de extract de ginseng roșu coreean și Glycyrrhiza glabra L

Departamentul de Științe Alimentare și Nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Institutul coreean de nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Departamentul de Științe Alimentare și Nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Institutul coreean de nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Departamentul de Științe Alimentare și Nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Institutul coreean de nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Coreea Ginseng Corporation Institutul de Cercetare, Coreea Ginseng Corporation, Daejeon, Coreea.

Departamentul de Științe Alimentare și Biotehnologie, Universitatea Națională Kangwon, Chuncheon, Coreea.

Adresă corespondență către: Il-Jun Kang, dr., Departamentul de Știința Alimentelor și Nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon 24252, Coreea,

Departamentul de Științe Alimentare și Nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Institutul coreean de nutriție, Universitatea Hallym, Chuncheon, Coreea.

Abstract

Introducere

Obezitatea este o boală inflamatorie cronică modernă. 1 Obezitatea nu numai că afectează aspectul, ci provoacă și sindroame metabolice multiple, inclusiv hiperlipidemie, boli cardiovasculare, diabet de tip 2 și ficat gras nealcoolic. 2 Conceptul actual curent pentru tratarea obezității este gestionarea echilibrului metabolic între aportul și consumul de energie. 3

În tratamentul obezității, eficacitatea și siguranța produselor naturale sunt mai liniștitoare datorită efectelor secundare mai puține, comparativ cu medicamentele sintetice chimice tradiționale cunoscute ca cauzând diaree și vărsături. 4-6 În ultimii ani, multe studii au raportat că două sau mai multe produse naturale amestecate la rapoarte diferite au funcții mai pronunțate decât un singur produs natural. 7-10 Acest lucru s-ar putea datora efectelor sinergice ale compușilor activi prezenți în diverse produse naturale. 11

Ginsengul roșu este un soi de ginseng fermentat preparat prin uscare cu abur. 12 Poate reduce tensiunea arterială și poate preveni oxidarea. În plus, are efecte anticancerigene, anti-obezitate, hipolipidemice și hipoglicemiante. 13-16 Ginseng roșu fermentat își poate crește conținutul de ginsenozide totale, își poate îmbunătăți biodisponibilitatea și își poate îmbunătăți activitatea farmacologică. 17 Saponinele se numără printre principalii compuși activi ai ginsengului roșu. S-a raportat pe scară largă că saponinele pot inhiba activitatea lipazei, 18 pot reduce trigliceridele plasmatice (TG) și pot atenua adipogeneza. 19 Glycyrrhiza glabra L. este cultivat în multe țări20 și este bine cunoscut în medicina tradițională pentru tratarea afecțiunilor hepatice, durerilor de gât, astmului bronșic și a febrei. 21 În plus, s-a indicat că Glycyrrhiza glabra Extractul de L. (GG) poate reduce TG plasmatic la modelele de șobolani obezi. 22

În acest studiu, am amestecat fără precedent fracțiunea de saponină de ginseng roșu coreeană (RGS) și extractul de GG și am explorat dacă amestecul în proporții diferite ar putea spori efectul lor anti-obezitate.

Materiale și metode

pregătirea unei mostre

RGS și GG standardizate au fost achiziționate de la Korean Ginseng Corporation (Daejeon, Coreea). Extractele standardizate de ginseng roșu au fost fracționate cu cromatografie pe coloană Diaion HP20 folosind H2O, 30% etanol (EtOH) și 95% EtOH ca eluant într-un proces de eluție secvențială. Apoi fracția de EtOH 95% a fost concentrată în vid și uscată prin pulverizare pentru a obține fracția de saponină. GG uscat a fost extras de două ori cu 30% EtOH la 80 ° C, filtrat cu 1 μm dimensiunea porilor, concentrat sub presiune redusă și uscat prin pulverizare. Apoi, pulberile uscate de extract RGS și GG au fost amestecate la un raport de masă de 3: 1 (SG31), 1: 1 (SG11) sau 1: 3 (SG13).

Cultura și diferențierea celulară

Preadipocitele 3T3-L1 au fost achiziționate din colecția American Type Culture Collection (CL-173, Manassas, VA, SUA) și cultivate în mediul Eagle modificat de Dulbecco (Biowest, Riverside, MO, SUA) conținând 1% penicilină/streptomicină (P/S; Gibco, Grand Island, NY, SUA) și 10% ser de vițel bovin (Gibco) la 37 ° C cu 5% CO2. După 2 zile, celulele au atins confluența. Apoi celulele au fost induse prin mediu de diferențiere MDI care conținea 10% ser fetal bovin (FBS; Gibco), 1% P/S, 0,5 mM 3-izobutil-1-metilxantină (IBMX; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SUA), 1 μM dexametazonă (Dex; Sigma-Aldrich) și 10 μg/ml insulină (Gibco) timp de 2 zile. Două zile mai târziu, celulele au fost induse în continuare cu mediu de diferențiere MDI timp de 2 zile (eliminat IBMX și Dex). După aceea, mediul obișnuit (10% FBS și 1% P/S) a fost reîmprospătat la fiecare 2 zile până în a 8-a zi. 23

Analiza viabilității celulare

Celulele au fost însămânțate la o densitate de 5 × 104 celule/godeu împreună cu extracte (0-300 μg/ml) timp de 24 de ore. Reactivul MTT a fost adăugat la mediu și incubat timp de 2 ore. Mediul a fost golit, iar sarea de formazan a fost redizolvată în dimetil sulfoxid (DMSO; Sigma-Aldrich), măsurată utilizând un spectrometru vizibil ultraviolet (UV) (Multiskan FC; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, SUA) la 570 nm. 23

Test de colorare cu ulei roșu O

Celulele au fost însămânțate la o densitate de 5 × 104 celule/godeu și induse să se diferențieze împreună cu extracte (100 μg/ml). Aceste adipocite mature au fost spălate cu soluție salină tamponată cu fosfat (Lonza, Walkersville, MD, SUA) și asigurate în paraformaldehidă 4% la temperatura camerei timp de 1 oră. După clătirea celulelor securizate cu izopropanol 60%, acestea au fost colorate cu soluție roșu ulei O (Sigma-Aldrich) (0,35% vopsea roșie ulei O în izopropanol 60%) timp de 20 min și apoi spălate cu apă distilată. Celulele colorate au fost uscate în mod natural și apoi dizolvate în izopropanol 100%. Absorbanța a fost măsurată la 520 nm folosind un spectrometru vizibil la UV. 24

Proiectarea experimentelor pe animale

Șoarecii C57BL/6J de sex masculin de 5 săptămâni au fost obținuți de la Central Laboratory Animal Incorporated (Seoul, Coreea) și s-au acomodat la mediul de laborator (temperatura de 24 ° C ± 2 ° C, umiditatea relativă de 55% ± 5% și alternativă 12-h lumină/12-h ciclu întunecat) timp de 1 săptămână. Acești șoareci au fost apoi împărțiți în mod aleatoriu în două grupuri: (1) grup de control = 8), șoarecii au fost hrăniți cu dietă cu grăsimi normale (NFD; 10% kcal grăsime, dieta ajustată cu calorii, nr. TD.06416; Envigo, Madison, WI, SUA) și (2) grup experimental = 64), șoarecii au fost hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi (HFD; 60% kcal grăsime, dieta ajustată cu calorii, nr. TD.06414; Envigo). După inducerea obezității prin HFD timp de 2 săptămâni, șoarecii experimentali din grup au fost din nou împărțiți aleatoriu în șapte grupuri ( = 8 pentru fiecare grup): (1) grup HFD, (2) grup GC, un grup de control pozitiv cu efect de pierdere în greutate de Garcinia Cambogia extract de apă (GC, 100 mg/kg/zi), 25 (3) grup RGS, (4) grup GG, (5) grup SG31, (6) grup SG11 și (7) grup SG13). Toate extractele (cu excepția GC) au fost administrate oral șoarecilor timp de 10 săptămâni (200 mg/kg/zi), iar șoarecilor li s-a permis accesul gratuit la dietă și apă. Greutatea corporală, aportul de alimente și aportul de apă au fost înregistrate în fiecare săptămână. Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor (IACUC) al Universității Hallym a aprobat toate planurile și programele experimentale (numărul de aprobare: Hallym 2018-61).

Colectarea probelor de sânge și organe

După procesul de administrare orală, șoarecii au fost posti timp de 12 ore și anesteziați cu 2,2,2-tribromoetanol și 2-metil-2-butanol (Sigma-Aldrich), iar sângele a fost colectat din venele orbitale. 26 Serul a fost obținut prin centrifugare (3000 g timp de 15 minute la 4 ° C; centrifugă 5424R; Eppendorf, Hamburg, Germania) a probei de sânge și depozitat la -70 ° C. După colectarea probelor de sânge, țesuturile organelor au fost îndepărtate și clătite cu ser fiziologic. Umezeala a fost apoi îndepărtată și țesuturile organelor uscate au fost cântărite.