Metabolismul combustibilului în efectele gâștelor din Canada ale glucagonului asupra cineticii glucozei American Journal of
Departamentul de Biologie, Universitatea din Ottawa, Ottawa, Ontario, Canada
Adresa pentru cereri de reimprimare și alte corespondențe: E. Vaillancourt, Dept. de Biologie, Univ. din Ottawa, 30 Marie-Curie, Ottawa, Ontario, K1N 6N5, Canada (e-mail: [email protected]).
Departamentul de Biologie, Universitatea din Ottawa, Ottawa, Ontario, Canada
Abstract
Animale.
Cateterizări.
Calorimetre indirecte.
Alimentele au fost reținute timp de 8 ore înainte de începerea măsurătorilor pentru a obține măsurători fiabile ale ratei metabolice inițiale (prin eliminarea creșterii de căldură a alimentării) și pentru a facilita curățarea echipamentului postexperimental (2). Ratele consumului de oxigen (ṀO2) și ale producției de dioxid de carbon (ṀCO2) au fost apoi măsurate cu un sistem Oxymax calibrat (Columbus Instruments, Columbus, OH) (vezi Ref. 52 pentru detalii) conectat la un respirometru Lexan personalizat, cu dublu scop alimentat cu aer de 20 ° C la o rată de 8-12 l/min. Experimentele preliminare au arătat că gâștele rămân mai liniștite în timp ce stau pe o suprafață ușor răcită. Prin urmare, fundul detașabil al respirometrului a fost îndepărtat pentru a permite păsărilor să stea direct pe o placă de aluminiu termostatată de 60 × 60 cm, personalizată, menținută la 15 ° C folosind o baie de apă. Înlocuirea fundului plat Lexan cu placa plată din aluminiu nu a modificat volumul respirometrului și nu a afectat modul în care a funcționat.
Cinetica glucozei.
Prelevarea de țesuturi.
Nouă gâște adulte canadiene imprimate în continuare (patru bărbați și cinci femele) au fost anesteziate la fermă în decembrie 2012 folosind o injecție intramusculară de ketamină și xilazină și, în timp ce erau anesteziate, au fost eutanasiate folosind o supradoză de sodiu pentobarbital administrat intraperitoneal. Aproximativ 5 g de țesut au fost excizate rapid și au fost congelate cu ajutorul cleștelor de aluminiu pre-răcite în azot lichid. Probele de pectoralis au fost prelevate de-a lungul părții anterioare a chilei, de-a lungul întregii grosimi a mușchiului. Toate țesuturile au fost prelevate și congelate în decurs de 10 minute după moarte. Pectoralele și ficatul au fost apoi disecate din carcase, plasate în pungi de plastic etichetate și aduse înapoi la laborator unde a fost înregistrată greutatea organului (inclusiv probele congelate) pentru ambele țesuturi pentru a calcula rezervele de carbohidrați. Probele au fost depozitate la -80 ° C până la testarea concentrațiilor de carbohidrați. Pentru analiză, probele de pectoral fragil congelate au fost spulberate în bucăți mici și prelevate la întâmplare, permițând astfel măsurători reprezentative pentru întreaga grosime a mușchiului.
Concentrația de glucoză și glicogen.
Procedurile de măsurare pentru concentrația țesutului de glucoză și glicogen au fost adaptate de la Fournier și Weber (14). Pe scurt, aproximativ 1 g de țesut (pectoral, ficat) a fost măcinat fin în azot lichid cu un mortar și un pistil pre-răcit. Fiecare probă înghețată a fost cântărită și plasată în 4 volume de acid percloric 6% răcit cu gheață (PCA). După omogenizare, probele au fost centrifugate la 2.800 g timp de 10 min. Supernatanții au fost apoi alicotați în tuburi de centrifugă de 1,5 ml și depozitați la -20 ° C până la testare. Concentrația de glucoză a fost determinată în conformitate cu Bergmeyer (4). Concentrația glicogenului a fost determinată folosind amiloglucozidază (A-7095; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) pentru hidrolizarea glicogenului, urmată de adăugarea de 6% PCA pentru a opri reacția. Standardele de glucoză și glicogen și martorii negativi au fost utilizate în fiecare serie de teste, deoarece amiloglucozidaza conținea cantități semnificative de glucoză și/sau glicogen. Concentrațiile de glicogen tisular au fost corectate pentru această contribuție de către enzima contaminată și pentru glucoza liberă deja prezentă înainte de hidroliza glicogenului.
Analize plasmatice.
Calcule și statistici.
FIG. 1.Acizi grași neesterificați în plasmă (A), fosfolipid (A), triacilglicerol (A), glicerol (), glucoza) și lactat () concentrația la gâștele canadiene adulte înainte, în timpul și după perfuzia cu glucagon. * Diferență semnificativă față de valoarea inițială (
Tabelul 1. Contribuții relative (procente de masă) ale acizilor grași individuali la totalul acizilor grași neesterificați, triacilglicerol și fosfolipide în plasma gâștelor din Canada
Valorile sunt procentul de masă al esterilor metilici ai acizilor grași, exprimat ca medii ± SE ( = 5). NEFA, acizi grași neesterificați; TAG, triacilglicerol; PL, fosfolipide; SFA, acizi grași saturați; MUFA, acizi grași mononesaturați; PUFA, acizi grași polinesaturați; DBI, indice cu dublă legătură; n.d., nedetectat; adică urme. Numai acizii grași care contribuie la> 1% din concentrația totală de acizi grași în cel puțin o fracțiune sunt tabelați. Pentru fiecare fracție, sunt, de asemenea, indicate concentrația totală (în micromoli de FA pe mililitru de plasmă), contribuțiile relative ale SFA, MUFA și PUFA, DBI și lungimea medie a lanțului de carbon. Abundența relativă a acizilor grași individuali în fiecare fracțiune lipidică nu s-a modificat odată cu perfuzia de glucagon; astfel, valorile medii pentru întregul experiment sunt prezentate aici.