Malnutriție, un nou inductor pentru calcificarea arterială la pacienții cu hemodializă
Abstract
fundal
Calcificarea arterială este un factor de risc cardiovascular semnificativ la pacienții cu hemodializă. O serie de factori sunt implicați în procesul de calcificare arterială; cu toate acestea, relația dintre malnutriție și calcificarea arterială este încă neclară.
Metode
68 de pacienți cu hemodializă au fost înrolați în acest studiu. Starea nutrițională a fost evaluată utilizând o evaluare globală subiectivă cantitativă modificată (MQSGA). Au fost măsurați parametrii biochimici serici înrudiți. Și probele de arteră radială au fost colectate în timpul operațiilor de fistulă arteriovenoasă. Pata de hematoxilină/eozină a fost utilizată pentru a observa structurile arteriale, în timp ce pata roșie de Alizarină pentru a observa depozitele calcificate și a clasifica gradul calcificat. Expresiile proteinei morfogenetice osoase 2 (BMP2) și ale proteinei Gla matrice (MGP) au fost detectate prin imunohistochimie și metode western blot.
Rezultate
66,18% dintre pacienții cu hemodializă au fost malnutriți. La pacienții cu hemodializă, depozitele calcificate au fost localizate în principal în stratul medial al arterelor radiale, iar expresiile BMP2 și MGP au fost ambele crescute în zonele calcificate. Nivelurile de albumină serică au fost asociate negativ cu scorul de calcificare și expresiile BMP2 și MGP. În timp ce scorul MQSGA, fosforul seric și produsul de calciu × fosfor au prezentat relații pozitive cu scorul de calcificare și expresiile BMP2 și MGP.
Concluzii
Malnutriția este predominantă la pacienții cu hemodializă și este asociată cu calcificarea arterială și expresiile BMP2 și MGP în arterele radiale calcificate. Malnutriția poate fi un nou candidat inductor pentru calcificarea arterială la pacienții cu hemodializă.
fundal
Calcificarea arterială este un factor de risc major al mortalității cardiovasculare, în special la pacienții cu hemodializă [1]. Crește rigiditatea arterială, viteza undei pulsului, scade complianța arterială și duce în cele din urmă la evenimente cardiovasculare severe [2, 3].
Calcificarea arterială este considerată în mod tradițional a fi un proces pasiv; cu toate acestea, studii recente au arătat că calcificarea arterială este un proces reglementat activ și o serie de factori sunt implicați în acest proces [4]. Proteina morfogenetică osoasă 2 (BMP2) și proteina matrice Gla (MGP) sunt două proteine critice strâns legate, care reglează calcificarea arterială [5]. Și BMP2 sa dovedit a fi un promotor pentru calcificarea arterială, în timp ce MGP este considerat a fi un inhibitor al calcificării arteriale [6, 7]. Cu toate acestea, încă nu este clar care este factorul cheie asociat cu prevalența calcificării arteriale și expresiile BMP2 și MGP în boala renală în stadiu final (ESRD).
Malnutriția este, de asemenea, un factor esențial asociat cu morbiditatea și mortalitatea crescută la pacienții cu hemodializă [8]. Cu toate acestea, dacă malnutriția participă la procesul de calcificare arterială și se asociază cu expresiile BMP2 și MGP nu este bine înțeles. În prezentul studiu, am estimat starea nutrițională a pacienților cu hemodializă și am investigat rolul malnutriției în procesul de calcificare arterială.
Materiale și metode
Pacienți
Colectarea datelor caracteristice demografice și evaluarea stării nutriționale
Datele caracteristice demografice au fost colectate după cum urmează: sex, vârstă, înălțime, greutate, boli primare, complicații și durata hemodializei.
Evaluarea subiectivă globală cantitativă modificată (MQSGA), o metodă bună de evaluare a stării nutriționale, a fost utilizată special pentru pacienții cu ESRD. În acest studiu, am folosit MQSGA pentru a evalua starea nutrițională a pacienților înrolați cu hemodializă. MQSGA constă din șapte componente: schimbarea greutății, simptome gastro-intestinale, aport alimentar, capacitate funcțională, comorbiditate, grăsime subcutanată și semne de irosire musculară. Fiecare componentă are un scor de la 1 (normal) la 5 (foarte sever). „Scorul de malnutriție” este un număr între 7 (normal) și 35 (subnutrit sever) [9]. Pe baza scorului MQSGA, s-au clasificat două grupuri: grupul de nutriție normală (scor de 7-10) și grupul de malnutriție (scor de 11-35).
Colectarea datelor biochimice
Înainte de operație, probele de sânge au fost colectate în tuburi care conțin acid etilendiaminetetraacetic (EDTA) și apoi depozitate la -20 ° C înainte de a fi analizate. Calciul seric, fosforul seric, albumina, trigliceridele, colesterolul total (TG), colesterolul lipoproteinelor cu densitate scăzută (LDL-c) și colesterolul lipoproteinelor cu densitate ridicată (HDL-c) au fost măsurate utilizând autoanalizatorul TBA-120, Toshiba Medical Systems, Japonia).
Nivelurile serice ale hormonului paratiroidian intact (PTH) au fost evaluate prin metoda chemiluminescenței (Immulyte 2000; DPC, Los Angeles, CA). Calciul × fosfor (Ca × P) a fost calculat pe baza calciului seric și a fosforului seric. Calciu seric 1 mmol/L = 4 mg/dl, fosfor seric 1 mmol/L = 3,1 mg/dl, calciu seric ajustat (mg/dl): calciculm seric + 0,8 × [4-sAlb (albumina serică) (g/dl )]].
Analiza histologică
Un segment circumferențial de 2-3 mm al arterei radiale a fost excizat de la pacienți în timpul operațiilor de fistulă arterio-venoasă și plasat imediat în soluție salină. Probele au fost disecate fără grăsimi și subcutanate, fixate peste noapte în paraformaldehidă 4% și apoi încorporate în parafină. Secțiunile de țesut cu grosimea de 4 μm au fost preparate și colorate cu hematoxilină/eozină (HE, Beyotime Institute of Biology, Suzhou, China). Și roșu de alizarină (Genmed Scientifics Inc. SUA).
EL pata
3 până la 5 secțiuni pe specimen au fost deparafinate și hidratate la apă. Colorați nucleii cu hematoxilină timp de 10 minute. Apoi clătiți cu apă curentă de la robinet timp de 10 minute. După deshidratarea a 5 secunde în alcool 95%, secțiunile au fost contracolorate cu eozină de la 30 secunde la 2 minute, în funcție de vârsta eozinei și de adâncimea contracolorului dorit. Deshidratați în 95% alcooli 2 minute și repetați o dată pentru a îndepărta excesul de eozină. La microscop, am putut vedea cum nucleele erau colorate în albastru, în timp ce citoplasma era colorată în roz.
Pete roșii de alizarină
Pata roșie de alizarină este o metodă dependentă de PH pentru diferențierea oxalatului de calciu de carbonatul de calciu și fosfatul. 3 până la 5 secțiuni pe specimen au fost deparafinate și hidratate până la apă distilată. Patați diapozitivele cu soluția roșie de alizarină timp de aproximativ 2 minute. Scoateți excesul de vopsea și secțiunile de ștergere. Se deshidratează în acetonă și apoi în soluție de acetonă-xilen (1: 1). Se curăță în xilen și se montează într-un suport de montare sintetic. La microscop, am putut observa că depunerile de calciu (cu excepția oxalatului) au fost colorate în roșu portocaliu.
Scorul de calcificare histologică
Scorul de calcificare histologică a fost obținut prin calcularea tuturor scorurilor din toate secțiunile de colorare roșie de Alizarin și a fost clasificat de la 0 la 4 [10]. Un scor de 2,5 până la 4 = calcificare severă. Conform scorului petei roșii de Alizarin, am clasificat pacienții în trei grupe: grupul necalcificat (NC), grupul ușor calcificat (SLC) și grupul sever calcificat (SEC).
Pata imunohistochimică
3 până la 5 diapozitive necolorate ale fiecărei secțiuni de țesut au fost deparafinizate în xilen și rehidratate în achohol descendent. Lamele au fost apoi plasate în peroxid de hidrogen 3% pentru a inhiba peroxidaza endogenă. După spălare în ser fiziologic Tris, secțiunile au fost blocate de 3% ser albumină bovină (Sigma-Aldrich Tradign Co., Ltd.) timp de 15 minute și apoi incubate cu anticorp primar la diluții adecvate peste noapte. Anticorpii utilizați au fost: BMP2 (1: 100, Abcam) și MGP (1: 100, Santa Cruz Biotechnology). Colorarea fără anticorpul primar întrerupt ca un control negativ. Al doilea anticorp peroxid conjugat capră-șoarece (Weijia, Guangzhou, China) la diluarea 1: 400 a fost aplicat timp de 45 de minute, dezvoltat cu DAB (Weijia, Guangzhou, China), iar secțiunile au fost colorate cu Harris Hematoxylin (Weijia, Guangzhou ), China).