Hipertrofie patologică cardiacă sinergică indusă de o dietă bogată în sare în IGF-IIRα specifică cardiacă

Școala de afiliere de medicină chineză post-bacalaureat, Colegiul de medicină chineză, China Medical University, Taichung, Taiwan

cardiacă

Roluri Analiză formală, Scriere - proiect original

Afiliat Institutul de absolvenți de științe medicale de bază, China Medical University, Taichung, Taiwan

Afiliere Traducere Cercetare Core, China Medical University Hospital, China Medical University, Taichung, Taiwan

Roluri Curarea datelor

Divizia de afiliere pentru cardiologie, Spitalul Universitar Medical din China, Taichung, Taiwan

Școala de afiliere de medicină chineză, China Medical University, Taichung, Taiwan

Departamentul de afiliere pentru medicină internă, Divizia de Cardiologie, Spitalul General Taichung al Forțelor Armate, Taichung, Taiwan

Departamentul de Chirurgie pentru Afiliere, Școala de Medicină, Colegiul de Medicină, Universitatea de Medicină Taipei, Taipei, Taiwan

Departamentul de afiliere a biotehnologiei, Universitatea Bharathiar, Coimbatore, India

A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Wei-Wen Kuo, Chih-Yang Huang

Departamentul de afiliere pentru știință și tehnologie biologică, China Medical University, Taichung, Taiwan

A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Wei-Wen Kuo, Chih-Yang Huang

Roluri Conceptualizare, achiziție de finanțare, administrare de proiecte, resurse

Afiliații Colegiul de Medicină, Spitalul Hualien Tzu Chi, Fundația Medicală Budistă Tzu Chi, Universitatea Tzu Chi, Hualien, Taiwan, Departamentul de Cercetări Medicale, Spitalul Universitar Medical din China, Universitatea Medicală din China, Taichung, Taiwan, Departamentul de Biotehnologie, Universitatea Asia, Taichung, Taiwan

  • Ruey-Lin Chang,
  • Srinivasan Nithiyanantham,
  • Chih-Yang Huang,
  • Pei-Ying Pai,
  • Tung-Ti Chang,
  • Lai-Chin Hu,
  • Ray-Jade Chen,
  • V. VijayaPadma,
  • Wei-Wen Kuo,
  • Chih-Yang Huang

Cifre

Abstract

Citare: Chang R-L, Nithiyanantham S, Huang C-Y, Pai P-Y, Chang T-T, Hu L-C și colab. (2019) Hipertrofie patologică cardiacă sinergică indusă de o dietă bogată în sare la șobolanii transgenici cardiaci specifici IGF-IIRα. PLoS ONE 14 (6): e0216285. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0216285

Editor: Luis Eduardo M. Quintas, Universitatea Federală din Rio de Janeiro, BRAZILIA

Primit: 18 septembrie 2018; Admis: 17 aprilie 2019; Publicat: 18 iunie 2019

Disponibilitatea datelor: Toate datele relevante se găsesc în lucrare.

Finanțarea: Acest studiu a fost susținut de China Medical University - 105-S-07, Taiwan; China Medical University and Hospital - 02, Taiwan; Universitatea Asia - 106, Taiwan. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului.

Interese concurente: Autorii au declarat că nu există interese concurente.

Introducere

Recent, am identificat noi alternative de splicing IGF-IIR trunchiat utilizând amplificarea rapidă a capetelor ADNc (RACE) și analiza secvenței. Acestui fragment îi lipsea segmentul exon 1-9 IGF-IIR, dar consta din intron 9 (nt 645-806) - exon10- intron 36 (nt 1-455). Modelul de expresie a ARNm, de exemplu, specific intronului 9 (nt 645-806) a dezvăluit expresia sa în inimă, creier, ficat, placentă și testicul șobolanilor. Mai mult, am confirmat, de asemenea, că acest transcript poate codifica o proteină cu 1359 aminoacizi cu codon de pornire la 231 bp (exon 10) și opri codonul la 4307 bp (intron 36). Prin analiza secvenței, am constatat că aminoacizii proteinei trunchiate erau în concordanță cu IGF-IIR, cu excepția aminoacidului C-terminal 15. Am denumit noua proteină IGF-IIRα și ne-am propus să identificăm semnificația sa biologică și implicarea sa în fiziopatologia cardiacă.

IGF-IIRα reglează apoptoza cardiacă prin reglarea descendentă a proteinelor de supraviețuire AKT/PI3K de semnalizare și reglarea în sus a activării caspazei 3. În plus, supraexprimarea IGF-IIRα reglează fibroza cardiacă prin semnalizarea uPA/tPA/TGF-β și acumularea mai mare de colagen și a agravat în continuare efectul acesteia în condiții de sare ridicată [11]. În acest studiu, ne-am propus să identificăm dacă IGF-IIRα nou este implicat în hipertrofia cardiacă și continuă rolul său funcțional în insuficiența cardiacă hipertensivă indusă de sare în vivo. Apoi, am dori să investigăm dacă IGF-IIRα ar putea fi o țintă terapeutică potențială nouă pentru insuficiența cardiacă.

Materiale și metode

Anticorpi și reactivi

Toate substanțele chimice și reactivii au fost achiziționați de la Sigma-Aldrich, SUA. Pentru western blot, anticorpii primari p-ERK, p-JNK, p-P38 au fost cumpărați de la Cell Signaling, SUA. IGF-IIR, AT1R, NFATC3, ANP, BNP, α-tubulină, p-PKC (Abcam, SUA) și GAPDH, SIRT1, Gαq, p-GATA4 (Santa Cruz Biotechnology, SUA). Toți anticorpii secundari (anti-iepure, șoareci și capre, anticorpi conjugați cu HRP) au fost procurați de la Santa Cruz Biotechnology, SUA.

Construcție transgenică

Construcția transgenică include promotorul rMYH6, ADN-ul BAC 3HA-IGF-IIRα-A2 (NCBI). 3HA-IGF-IIRα-A2 a fost amplificat și ligat în vectorul de expresie al promotorului rMYH6. Exemplele de secvențe utilizate includ IGF-IIRα: 5’IGF-IIRα-KnpI: 5’-TTGGTACCGAATGAGTGTCATAAACTTTGAG-3 ’și 3’-IGF-IIRα-XbaI: 5’-CCCTCTAGAAGTCATGTCGGCTGCTGTGAGTGA. Apoi am subclonat cu succes lungimea completă a IGF-IIRα în pcDNA3.1-myc-His condus de promotorul cardiac specific α-MHC prin microinjecție pronucleară și am dezvoltat IGF-IIRα peste șobolani transgenici de expresie (TG). Fondatorii pozitivi au fost identificați prin PCR și încrucișați la WT. Genotiparea a fost efectuată prin analize PCR cu primeri specifici. Grund înainte 5’-TAGCAAACTTCAGCCACCCTTC-3 ’și grund invers 5’-ACTTCCACTCTTATCCACAGCACAC-3’ care au fost proiectate pentru a amplifica un fragment de 739bp.