Hipercolesterolemie cu LDL bogat în colesterol și niveluri normale de LDL - Apolipoproteina B

De la Centrul pentru Nutriție Umană și Departamentele de Nutriție Clinică, Medicină Internă și Biochimie ale Universității din Texas Southwestern Medical Center din Dallas și Veterans Affairs Medical Center, Dallas, Tex.

Abstract

Hipercolesterolemia este multifactorială în originea sa. 1 2 Majoritatea formelor de hipercolesterolemie se caracterizează prin concentrații plasmatice crescute de colesterol LDL și, în majoritatea cazurilor, nivelurile plasmatice ale LDL - apolipoproteina B-100 (apo B) sunt, de asemenea, crescute. 1 Mai multe mecanisme pot duce la niveluri ridicate de LDL - apo B; acestea includ activitatea redusă a receptorilor LDL, 3 apo B defect care previne legarea normală a LDL de receptorii LDL, 4 5 6 7 și posibil supraproducția lipoproteinelor care conțin apo B de către ficat. 1 În plus, am descris recent o altă formă de colesterol LDL crescut în care nivelurile LDL - apo B nu sunt crescute. 1 Această formă de hipercolesterolemie se caracterizează printr-un raport ridicat de colesterol la apo B în particulele LDL. Rezultatul acestui raport crescut este un nivel ridicat de colesterol LDL, în intervalul hipercolesterolemic, cu un nivel LDL - apo B în intervalul normal. Defectul reprezintă probabil o alterare a metabolismului colesterolului și nu a metabolismului apo B. Datele noastre au sugerat că aproximativ o treime dintre bărbații cu hipercolesterolemie moderată primară au această afecțiune 1 și poate fi o formă și mai frecventă de hipercolesterolemie la femei. 8

O abordare a tratamentului acestei forme de hipercolesterolemie poate fi reducerea raportului LDL colesterol/apo B mai degrabă decât scăderea nivelului LDL - apo B. Această abordare ar fi direcționată către defectul primar. Două forme de terapie - dietele cu conținut scăzut de grăsimi 9 și sechestranții cu acid biliar 10 11 - au fost raportate pentru a reduce raportul LDL colesterol/apo B și, prin urmare, ar putea fi terapia preferată pentru acest tip de hipercolesterolemie. Din acest motiv, am identificat pacienți bărbați hipercolesterolemici cu niveluri relativ normale de LDL - apo B, dar au crescut raporturile LDL colesterol/apo B și am examinat răspunsul lor în ordine la o dietă redusă de grăsimi și un sechestrant de acid biliar. Întrebarea luată în considerare a fost dacă aceste forme de gestionare vor inversa acest tip special de hipercolesterolemie care rezultă dintr-un defect al compoziției LDL.

Metode

Pacienți

Proiectare experimentală

Proceduri

Douăzeci de mililitri de sânge au fost colectați de fiecare dată după un post de 12 ore. Sângele a fost prelevat prin puncție venoasă în tuburi care conțin EDTA disodic la o concentrație de 1 mg/ml. Plasma a fost separată la scurt timp după recoltarea sângelui la 4 ° C și depozitată la aceeași temperatură pentru analiză. S-au adăugat conservanți la probele de plasmă după cum urmează: sulfat de gentamicină (0,005%), cloramfenicol (0,005%), azidă de sodiu (0,01%) și Trasilol (100 UI/ml). Nivelurile colesterolului total plasmatic și ale trigliceridelor au fost măsurate enzimatic, 13 14 și colesterolul HDL s-au măsurat după precipitarea lipoproteinelor care conțin apo B cu utilizarea de 0,55 mmol/L acid fosfotungstic și 25 mmol/L clorură de magneziu. 15 Colesterol în VLDL + IDL (d 16 VLDL + IDL izolarea a fost efectuată prin ultracentrifugare timp de 18 ore la 39.000 rpm. Primii 2 ml au fost colectați cantitativ; colesterolul total a fost măsurat în fracțiuni de densitate mai mici și mai mari de 1,019 g/ml. Recuperarea colesterolului a fost> 96%. VLDL + IDL colesterol (d 16 17 Pe scurt, LDL (d= 1,019 până la 1,063 g/mL) a fost izolat din infranatantul cu plasmă cu densitate 1,019 g/mL. Colesterolul total a fost măsurat enzimatic, iar apolipoproteina a fost măsurată chimic. 16 17 S-a calculat raportul colesterol LDL/apo B. Concentrațiile absolute de apo B în LDL au fost calculate ca produs al raportului colesterol/apo B în LDL izolat și concentrația absolută de LDL colesterol. Nivelurile de apo B în VLDL + IDL au fost măsurate prin precipitarea apo B utilizând o concentrație finală de 50% alcool izopropilic, delipidarea precipitatului cu alcool 100% și redizolvarea apo B cu 1,5 mol/L acid deoxicolic sodic și 0,1N NaOH. 16 18 Conținutul de proteine a fost măsurat chimic utilizând modificarea lui Markwell și colab 19 din procedura lui Lowry și colab. 20 Apo totalul B a fost calculat ca suma VLDL + IDL - apo B și LDL - apo B.

Coeficienții de variație pentru metoda enzimatică pentru cuantificarea colesterolului și pentru metoda chimică de cuantificare a apo B au fost ≤3,0%. Ultima metodă a fost standardizată în laboratorul nostru după cum urmează. În primul rând, standardul pentru modificarea Markwell 19 a procedurii Lowry-Folin 20 este albumina serică bovină obținută de la Institutul Național de Standarde și Tehnologie. 17 În al doilea rând, pentru măsurarea directă a apo B în LDL și VLDL + IDL, a fost utilizat un factor de cromogenitate de 1 din motive detaliate anterior 17; în al treilea rând, nivelurile de apo B măsurate prin metoda chimică și cu metode imunochimice pentru apo B dau valori similare cu un coeficient de corelație ridicat. 17

Studiul actual a necesitat izolarea LDL (d= 1,019 până la 1,063 g/ml) pentru a determina raportul dintre LDL colesterol și apo B în lipoproteina acestor pacienți. De asemenea, a fost necesar să se determine coeficienții fiziologici de variație a acestor rapoarte la pacienții selectați pentru studiu. Acești coeficienți au fost determinați pe o perioadă de 5 zile în fiecare dintre cele trei faze ale studiului.

Pacienții au fost testați pentru apo B-100 defect familial (mutație FDB-3500) prin amplificare genetică și scindare cu Msp I. 21 Pe scurt, ADN-ul genomic a fost extras din sângele integral prin extracție de fenol-cloroform și precipitare cu etanol. În timpul reacției în lanț a polimerazei s-au folosit doi grunduri. Exemplul 1 a fost 5 ′ CCAACACTTACTTGAATTCCAAGAGCACCC 3 ′ și Exemplul 2 a fost 5 ′ CTGTGCTCCCAGAGGGAATATATGCGTTGG 3 ′. Acești primeri au fost obținuți de la Departamentul de Cardiologie al Universității din Texas Southwestern Medical Center din Dallas. Produsele de digestie au fost electroforezate pe un gel nedenaturant de acrilamidă 12%. Au fost utilizați doi markeri ADN pentru a estima dimensiunea produselor de digestie - Lambda C1 857-Dral și Msp/ puc 18. Benzile au fost vizualizate sub lumină UV după tratamentul gelurilor cu bromură de etidiu. Toți pacienții au prezentat o singură bandă de 120 bp. Subiecții heterozigoți pentru glutamină pentru mutația argininei ar fi de așteptat să aibă două benzi de 149 și respectiv 120 bp, în timp ce cazul homozigot ar avea o singură bandă de 149 bp. 21

Analize statistice

Datele sunt exprimate ca medie ± SD. Compararea mijloacelor a fost făcută prin măsuri repetate ANOVA cu o ajustare Bonferroni pentru multiplicitatea tratamentelor. O α de 0,05/3 (0,0167) a fost considerată semnificativă statistic. Coeficienții variației fiziologice au fost determinați pentru raporturile LDL colesterol/apo B și acești coeficienți au fost, de asemenea, comparați prin măsuri repetate ANOVA.