Frontierele combinate Adjuvantul Poly I C îmbunătățește efectele antitumorale ale oncologiei celulelor CAR-T

Imunitatea împotriva cancerului și imunoterapia

Editat de
Rayne Rouce

Baylor College of Medicine, Statele Unite

Revizuite de
Robin Parihar

Baylor College of Medicine, Statele Unite

Yang Xu

Universitatea de Știință și Tehnologie din Sud, China

Afilierile editorului și ale recenzenților sunt cele mai recente oferite în profilurile lor de cercetare Loop și este posibil să nu reflecte situația lor în momentul examinării.

poly

  • Descărcați articolul
    • Descărcați PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Suplimentar
      Material
  • Citarea exportului
    • Notă finală
    • Manager de referință
    • Fișier TEXT simplu
    • BibTex
DISTRIBUIE PE

Cercetare originală ARTICOL

  • 1 Laborator cheie de stat al oncogenelor și genelor conexe, Shanghai Cancer Institute, Renji Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai, China
  • 2 CARsgen Therapeutics, Shanghai, China

Introducere

S-a demonstrat că imunoterapia cu celule T adoptive este o nouă modalitate de combatere a tumorilor maligne. În special, limfocitele T proiectate pentru a exprima receptorul antigenului himeric (CAR) au demonstrat o mare promisiune în tratarea malignităților hematologice (1). Celulele CAR-T direcționate către CD19 au fost aprobate de FDA pentru a trata leucemia limfoblastică acută cu celule B recidivate (B-ALL) și limfomul difuz cu celule B mari (DLBCL) (2, 3).

Terapia CAR-T este, de asemenea, o abordare nouă pentru tratarea altor tumori maligne. În prezent, Glypian-3 (GPC3), receptorul factorului de creștere epidermică (EGFR), receptorul factorului de creștere epidermică uman (receptorul HER2), antigenul carcinoembrionar (CEA), disialogangliosida 2 (GD2), mezotelina, antigenul membranei specifice prostatei (PSMA) și interleukina-13Ra2 (IL13Ra2) au fost testate ca ținte ale celulelor CAR-T în tumoarea solidă. Cu toate acestea, terapia CAR-T pentru tumorile solide nu a fost la fel de eficientă ca cele care vizează malignități hematologice (4-7).

Motivele succesului limitat al celulelor T CAR în tumoarea solidă sunt investigate în mod activ și sunt probabil multifactoriale. Un motiv major este micromediul imunosupresor care poate împiedica funcția și persistența celulelor T CAR. Aceasta include prezența celulelor T reglatoare, a macrofagelor asociate tumorii, a celulelor supresoare derivate din mieloide (MDSC) și a fibroblastelor asociate cancerului, care promovează niveluri mai ridicate de liganzi inhibitori și citokine (8). Mai mult, numeroase molecule de control imun, cum ar fi PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, B7S1 (9), promovează epuizarea celulelor T și diminuează activarea celulelor T în țesuturi. În consecință, blocarea moleculelor punctului de control imun a îmbunătățit activitatea antitumorală a celulelor CAR-T (10). În plus, Indoleamina 2,3-dioxigenaza (IDO) este o enzimă intracelulară care mediază metabolismul aminoacidului esențial triptofan în metaboliți imunosupresori. Activitatea IDO tumorală poate inhiba terapia CAR-T prin acțiunea metaboliților triptofan, în timp ce inhibitorul IDO a restabilit controlul tumorii într-un model de limfom xenogrefă (11). Aceste date au sugerat că vizarea mediului imunosupresor al tumorii este o abordare potențială pentru creșterea imunității antitumorale a celulelor CAR-T.

Acidul polinozinic-policididilic (poli I: C), un analog sintetic al ARN-ului cu catenă dublă (dsRNA), este recunoscut de receptorul cu taxă 3 (TLR3), proteina kinază activată dsRNA (PKR), gena inductibilă a acidului retinoic I proteină (RIG-I) și proteina asociată diferențierii melanomului 5 (MDA5) (12). Aplicarea poli I: C în imunoterapia tumorală a fost bine investigată de câteva decenii. Poli I: C activează sistemul imunitar înnăscut, cu reglarea ulterioară a imunității adaptive (13), ducând la modificări ale microambientului tumoral și o supresie izbitoare a creșterii tumorii (14, 15). În plus, poli I: C a fost raportat că este capabil să prelungească supraviețuirea celulelor T CD4 + (16), să promoveze proliferarea celulelor T activate (17) și să reactiveze celulele T CD8 + care se infiltrează în tumoră (18). Mai mult, studiile au arătat că poli I: C ar putea declanșa direct celulele canceroase pentru a iniția apoptoza, astfel încât poli I: C ar putea reduce metastazele tumorale la șoarecii imunodeficienți (19). Acest lucru a construit rațiunea de a combina poli I: C cu terapia cu celule CAR-T.

În acest studiu, explorăm potențialul utilizării poli I: C pentru a crește activitățile antitumorale ale celulelor CAR-T și mecanismul de bază.

Materiale și metode

Linii celulare și medii

Linia de carcinom de colon murin CT26 (EGFRvIII NEG) a fost menținută în laboratorul nostru. Linia de celule renale embrionare umane 293T a fost achiziționată de la American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA). Ambele celule au fost crescute ca monostrat în mediu de cultură DMEM (Gibco) conținând 10% ser fetal bovin (FBS, Biowest) și 1% L-glutamină. Linia celulară de cancer mamar murin E0771 (EGFRvIII NEG, înzestrată de Dr. Xiang Zhang de la Baylor College of Medicine) a fost cultivată în mediu RPMI 1.640 (Gibco) suplimentat cu 10% FBS și 10 mmol/L HEPES. Toate celulele au fost menținute în mod obișnuit la 37 ° C într-un incubator cu atmosferă de 5% CO2. Aceste linii celulare au fost testate în mod regulat pentru micoplasmă și au fost negative.

Murine EGFRvIII Construction

Un omolog murin al mutației EGFRvIII uman a fost creat prin utilizarea secvențelor de ADNc care se întind pe EGFR murin conform raportului (20). Pe scurt, secvențele de ADNc donate în vectorul pPWT pentru a construi EGFRvIII murin recombinant au fost după cum urmează: perechi de baze 60-147, GT și 951-3737. Această procedură de clonare creează o peptidă joncțională (LEEKKGNYVVTDH) identică cu cea găsită în EGFRvIII uman. Vectorii lentivirali deficienți în replicare care conțin EGFRvIII murin recombinant au fost apoi generați de 293T de linii celulare de ambalare și utilizați pentru transfectarea celulelor CT26 și E0771. Celulele transfectate au fost incubate cu ch806 Ab urmate de FITC etichetate anti-IgG umane de capră, apoi celulele pozitive au fost sortate prin citometru de flux.

Analiza proliferării

Celulele tumorale au fost placate la 10 4 celule/godeu în plăci cu 96 de godeuri cu concentrații diferite de poli I: C (0,5 ng/mL, 5 ng/mL, 50 ng/mL, 500 ng/mL, 5 μg/mL). Celulele T activate au fost însămânțate în plăci cu 96 de godeuri cu concentrații poli I: C de 10 și 50 μg/ml. Proliferarea celulară a fost analizată prin metoda CCK8 la 24, 48 și respectiv 72 ore.