Frontiere Fluvoxamină reticul endoplasmatic atenuat Rezistența la leptină indusă de stres

Endocrinologie celulară

reticul

  • Descărcați articolul
    • Descărcați PDF
    • ReadCube
    • XML (NLM)
    • Suplimentar
      Material
  • Citarea exportului
    • Notă finală
    • Manager de referință
    • Fișier TEXT simplu
    • BibTex
DISTRIBUIE PE

Cercetare originală ARTICOL

  • Departamentul de farmacoterapie, Școala de absolvire a științelor biomedicale, Universitatea Hiroshima, Minami-ku, Hiroshima, Japonia

Dovezi în creștere indică faptul că stresul reticulului endoplasmatic (stresul ER) este implicat în dezvoltarea sindromului metabolic. Cu toate acestea, tratamentele farmacologice care vizează stresul ER nu sunt bine înțelese. În studiul de față, am constatat că fluvoxamina, un inhibitor selectiv al recaptării serotoninei utilizat pentru depresie, poate atenua „rezistența la leptină” indusă de stresul ER, adică insensibilitatea la hormonul anti-obezitate leptină. Tratamentul cu tunicamicină, un reactiv care induce stresul ER, a provocat moartea celulară, care a fost semnificativ inhibată de fluvoxamină. Leptina activează semnalizarea JAK2 - STAT3. Stresul ER a provocat o afectare a fosforilării STAT3 indusă de leptină, care a fost inversată de fluvoxamină. Fluvoxamina ar fi un medicament nou sensibilizant la leptină, care vizează stresul ER.

Introducere

Materiale și metode

Materiale și reactivi

Tunicamicina a fost obținută de la Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Japonia). Leptina și fluvoxamina au fost obținute de la SIGMA (St. Louis, MO, SUA).

Cultură de celule

Celulele SH-SY5Y de neuroblastom uman au fost menținute în mediul Eagle modificat de Dulbecco, suplimentat cu 10% (v/v) ser fetal de vițel inactivat la căldură la 37 ° C în 5% CO2 umidificat și 95% aer.

Generarea de celule Ob-Rb Leptin-Transfectate

Construcția umană a receptorului de leptină Ob - Rb, un cadou de la Genentech Inc., a fost transfectată în celule SH-SY5Y și HEK293 folosind reactiv Lipofectamine Plus (Life Technologies Inc.) conform instrucțiunilor producătorului. Transfectanții stabili (celule SH-SY5Y - Ob - Rb și HEK293 - Ob - Rb) au fost obținuți prin selecție cu antibioticul G418 (Hosoi și colab., 2006).

Analiza Western Blot

Western blot a fost efectuat așa cum s-a descris anterior (Hosoi și colab., 2010a, b). Celulele au fost spălate cu PBS rece ca gheața și lizate într-un tampon conținând 10 mM HEPES - NaOH (pH 7,5), 150 mM NaCI, 1 mM EGTA, 1 mM Na3VO4, 10 mM NaF, 10 μg/mL aprotinină, 10 μg/mL leupeptină, fluorură de fenilmetilsulfonil 1 mM (PMSF) și 1% NP-40 timp de 20 min. Lizatul a fost centrifugat la 15.000 rpm timp de 20 de minute la 4 ° C și supernatantul a fost colectat. Probele au fost fierte cu tampon laemmli timp de 3 minute, fracționate prin electroforeză pe gel de dodecilsulfat de sodiu-poliacrilamidă (SDS-PAGE) și transferate la 4 ° C în membranele de nitroceluloză. Membranele au fost incubate cu anti-phospho STAT3 (Tyr705: Cell Signaling; 1: 1.000), anti-STAT3 (Santa Cruz; 1: 1.000), anti-KDEL (StressGen; 1: 1.000) și anti-PARP (Santa Cruz ) .diluat la 1: 1.000) anticorpi urmati de un anticorp legat de peroxidaza anti-hrean. Peroxidaza a fost detectată prin chemiluminiscență utilizând un sistem de chemiluminescență îmbunătățit.