Efectul inhibitorului lipazei pancreatice și al absorbantului lipidelor asupra colesterolemiei și a producției fecale

Abstract

Introducere

Experimental

Animale și diete

Au fost folosiți 21 de șobolani femele Wistar, cu vârsta de aproximativ 6 săptămâni. Șobolanii au fost adăpostiți individual într-un vivariu controlat de temperatură și umiditate (22 ± 1 ° C, umiditate relativă 60 ± 5%). Toate dietele au fost suplimentate cu colesterol la 10 g kg -1 și făină de nucă de cocos la 124 g kg -1. Masa de nucă de cocos conținând 56,5% grăsime a fost achiziționată într-un magazin de alimente sănătoase.

lipazei

Tabelul 1 prezintă compoziția dietelor martor și experimentale. Dieta pentru șobolani ST-1 a fost furnizată de Velaz Ltd. (Lysolaje, Republica Cehă). După 4 săptămâni, șobolanii au fost împărțiți în mod aleatoriu în trei grupuri de câte 7 șobolani fiecare. Dieta nr. 2 a fost suplimentat cu orlistat la 0,3 g kg -1. Dieta nr. 3 a fost suplimentat cu alginat amidat la 40 g kg -1 în detrimentul celulozei. Dozarea orlistat a fost media concentrațiilor utilizate în experimentul lui Cruz-Henandez și colab. [11]. Dietele și apa erau disponibile ad libitum. În cursul acestui experiment, au fost măsurate greutățile corporale inițiale și finale. În acest experiment, greutatea corporală inițială medie a șobolanilor a fost de 240 ± 28 g. Studiul a fost aprobat de Comitetul de Etică al Institutului de Științe Animale și de Comisia Centrală pentru Bunăstarea Animalelor din Ministerul Agriculturii din Republica Cehă.

Compoziția dietelor martor și experimentale (g kg -1)

Durata experimentului a fost de 3 săptămâni și apoi, șobolanii au fost sacrificați prin decapitare după anestezie prin inhalarea izofluranului (Nicholas Piramal India Ltd., Londra, Marea Britanie). Șobolanii au primit 4 g de furaje cu 4 ore înainte de a fi sacrificați [12].

Materiale și reactivi

Sarea de sodiu a acidului alginic, produsul cu viscozitate redusă A1112 din algele brune, acidul manuronic sodic, reactivul 1-fenil-3-metil-5-pirazolonă (PMP), orlistat, un material de referință certificat (PHR 1445), celuloză microcristalină și N-octadecilamina a fost achiziționată de la Sigma-Aldrich (Praga). Alte produse chimice au fost achiziționate de la P-Lab (Praga, Republica Cehă). Sarea de sodiu a acidului L-guluronic a fost obținută de la Carbosynth Ltd., Compton, Marea Britanie. Kitul Sylon HTP (hexametildisilazan-trimetil clorosilan-piridină 3: 1: 9) a fost achiziționat de la Supelco (Bellefonte, S.U.A.). Acidul izolitocolic, acidul norcolic, acidul 12-cetolitocolic, acizii α-, β-, ω-muricholici și β-sitostanol au fost achiziționați de la Steraloids Inc. (Newport, S.U.A.). Alți steroli au fost obținuți de la Sigma-Aldrich (Praga).

Prepararea alginatului amidat

N-octadecilamida acidului alginic a fost preparată prin reacția acidului alginic metil-esterificat cu reactivul N-octadecilamină [13]. Reacția cu N-octadecilamină a fost efectuată în condiții eterogene. Produsul a fost spălat cu etanol acidificat, eter de petrol, etanol pur și acetonă și în final uscat la aer.

metode de analiză

Metoda de titrare pentru determinarea grupului carboxil

Conținutul tuturor grupărilor carboxil COOHt (% m/m) în acid alginic și conținutul grupărilor carboxil libere COOHf (% m/m) din esterul său metilic au fost determinate printr-o metodă de titrare [14].

Analiza elementară organică și determinarea gradului de substituție

Conținutul de C, H și N (% m/m) a fost determinat prin analize elementare organice. Gradul de amidare (DA, mol.%) Al produselor finale a fost calculat în conformitate cu Taubner și colab. [13], pe baza conținutului de carbon și azot.

Analiza greutății moleculare

Reacția cu derivați organici dinitro se bazează pe capacitatea de a reduce acidul dinitrosalicilic prin reducerea grupărilor polizaharide [15]. Pentru calibrare s-a folosit acid galacturonic.

Analiza raportului acid manuronic la acid guluronic în alginat

Alginatul a fost hidrolizat așa cum a fost descris de Lu și colab. [16] cu unele modificări. Derivatizarea acizilor uronici a fost efectuată așa cum este descris de Dai și colab. [17]. Aceeași procedură a fost utilizată pentru a trata standardele de monozaharide și amestecul lor echimolar. Raportul manuronat la guluronat a fost calculat din rezultatele analizei ulterioare C18 HPLC-DAD (raportul zonelor de vârf corectate pentru factorii de răspuns). A fost utilizată o coloană C18 analitică ZORBAX (Agilent Company).

Prelevarea de probe

Probele de sânge amestecat au fost extrase de la fiecare șobolan în momentul sacrificării. Probele au fost lăsate să stea 30 de minute. Serurile au fost separate prin centrifugare, depozitate într-un frigider și analizate în ziua următoare. După laparotomie, ficatul a fost excizat și ținut la -40 ° C până la analiză. În ultimele 5 zile ale acestui experiment, fecalele au fost colectate, cântărite, combinate, congelate și depozitate până la analiză.

Analize ale lipidelor serice, hepatice și fecale

Concentrațiile serice de colesterol, triacilgliceroli, bilirubină și activitățile aspartatului aminotransferazei (AST) și alaninei aminotransferazei (ALT) au fost determinate folosind truse comerciale (BioVendor Ltd., Brno, Republica Cehă). Lipidele hepatice și fecale totale au fost extrase cu amestec de cloroform-metanol și măsurate gravimetric [18]. Colesterolul hepatic, sterolii fecali neutri și acizii biliari au fost determinați așa cum s-a descris anterior [10].